発芽アッセイ回転楕円体を使用して推定される芽新生体外パフォーマンスを評価する包括的な手順
Summary
In vitro血管芽腫 (HBs) と HBs におけるその役割の古典的な腫瘍血管新生が存在するかどうかを評価する包括的な手順を提案します。結果は、HB 血管新生の複雑さを強調表示し、血管新生のこの共通の形態の HB 血管新生における補完機構のみが示唆されました。
Abstract
・ フォン ・ ヒッペル-リンダウ (VHL) 癌抑制遺伝子の不活化は、人間の中枢神経系 (CNS) 内血管芽腫 (HBs) の開発で重要な役割を果たしています。しかし、細胞の起源と HBs (新生血管を含む) の進化の過程の両方残る物議を醸す、VHL HBs、古典的な HB 新生に基づいての抗血管新生が臨床試験で残念な結果を生成しました。抗血管内治療の臨床成功の翻訳 1 つの主要な障害は、この血管豊富な腫瘍血管新生の徹底的な理解の欠如です。この記事では体外でHBs に於いての役割と同様、HBs、古典的な腫瘍血管新生が存在するかどうかを評価する包括的な手順を提案する.この手順で研究者は正確に HB 血管新生の複雑さを理解し、HBs で血管新生のこの一般的な形式の関数を識別できます。これらのプロトコルは、腫瘍の治療のため、または HBs 抗血管新生治療の最適化で将来の翻訳を支援する並進可能性が高い腫瘍については、最も有望な抗血管治療の評価に使用できます。結果は、HB の血管新生の複雑さを強調表示し、この一般的なフォームの血管新生が HB 血管新生の補完機構のみであることを示唆します。
Introduction
血管芽腫 (HBs) は、人間の中枢神経系 (CNS) にのみ見られる血管腫です。フォン ・ ヒッペル-リンダウ (VHL) 病や散発的な病変の患者で開発します。VHL HBs は頻繁に再発のため外科的治療によって治癒が困難とこれに起因する遺伝的多発障害1。VHL 癌抑制遺伝子の不活化は、VHL HBs の腫瘍の根本的な原因と考えられている、(新生血管を含む) 細胞の起源と HBs の進化プロセスのまま大きく物議を醸す2です。したがって、HB 新生血管生物学的メカニズムの理解は、VHL HBs の最も有望な抗血管戦略に有用な洞察を提供可能性があります。
最近の研究では、HB 新生血管が発生学的血管3,4、5と似ていることを示唆しています。古典的な血管内皮増殖因子 (VEGF)-を介した血管新生血管の内皮細胞に由来する、関数の VHL の損失によって牽引されて増殖し、新生血管形成されている6に挑戦します。1965 年 Cancilla とジマーマンは、HBs の由来内皮7電子顕微鏡を使用してください。その後、間質細胞由来 vasoformative エレメント8それが見つかりました。1982 年、Jurcoらは間質細胞が内皮細胞起源9あることを発見しました。したがって、我々 の仮説ひと血管内皮細胞が HB 血管新生10の元の細胞であります。VHL 患者手術から派生した HB 細胞の初代培養を使用することをお勧め、HB からプライマリ カルチャが、安定しない、細胞株の確立された3できませんでした私たちの以前の研究が示されます。また、HB 血管成分10,11の前駆細胞が含まれているために、3 D 環境で初代培養は HB 新生血管の細胞起源を識別できませんでした。したがって、プリミティブと古典的な血管内皮細胞のモデルとしてひと血管内皮細胞 (株) は、HBs の細胞の代替モデルとして役立つことができます。
回転楕円体の発芽アッセイは、組織工学12,13の新しいモデルです。本稿で、3 D コラーゲン ベース共システムの in vitroアッセイを発芽回転楕円体を使用して、開発された HBs に於いての役割と同様、HBs、古典的な腫瘍血管新生が存在するかどうかを評価するための全体的な目標を持つ。
Protocol
Representative Results
Discussion
最近では、血管生物学の研究の複数のフィールドが血管内皮15の研究によって刺激されました。この記事での新規候補分子を識別するために操作の血管内皮細胞における機能の VHL 遺伝子の損失に起因する血管の形成を研究する実験モデルとして技術を発芽内皮細胞スフェロイドを開発した、血管新生のカスケード。我々 の知る限り、これは天体の変更された血管内皮細胞?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、上海科学委員会、技術 (15411951800、15410723200) からの助成金によって支えられました。著者教授 YuMei 温とその技術支援復旦の病原微生物部大学教授・ チャオ趙を感謝したいです。
Materials
| human umbilical vein endothelial cell | Fudan IBS Cell Center | FDCC-HXN180 | |
| dulbecco’s modified eagle’s medium | Gibco | 11995040 | |
| fetal bovine serum | Gibco | 26400044 | |
| PLKO.1-puro vector | Addgene | #8453 | |
| packing plasmid psPAX2 | Addgene | #12260 | |
| envelope plasmid pMD2.G | Addgene | #12259 | |
| 3D round-bottom 96-well plates | S-Bio | MS-9096M | |
| matrigel | BD Biosciences | 354234 | |
| Opti-MEM medium | Gibco | 31985-070 | reduced serum medium |
| 15-well plate | Ibidi | 81501 | Air bubbles in the gel can be reduced by equilibrating the μ–Slide angiogenesis before usage inside the incubator overnight |
| endothelial cell growth supplements | Sciencell | #1052 | |
| 10-cm culture dish | Corning | Scipu000813 | |
| Puromycin | Gibco | A1113802 | |
| typsin-EDTA | Gibco | 25200056 | |
| Automated Cell Counter System | BioTech | ||
| Image Analysis software | Winmasis | http://mywim.wimasis.com |
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