Summary
Iris neovascularization, een gemeenschappelijke complicatie van ischemische retinale ziekte, kan leiden tot zicht-bedreigende neovascular glaucoom. Hier beschrijven we een lymfkliertest protocol voor experimentele iris neovascularization die kan worden gebruikt voor noninvasive evaluatie van angiogenese-modulerende stoffen induceren.
Abstract
We beschrijven een model van iris punctie-geïnduceerde neovascularization als een algemeen model voor noninvasive evaluatie van angiogenese. Het model is ook relevant voor het targeten van neovascular glaucoom, een gezicht-bedreigende complicatie van diabetische retinopathie. Deze methode is gebaseerd op de inductie van iris vasculaire reactie door een reeks van zelfsluitende uveal lekke banden op BALB/c muizen en profiteert van de postpartum rijping van muis oogbeschadigingen en/of therapieën. Muis pups ondergaan uveal lekke banden vanaf postnatale dag 12,5, wanneer de pups natuurlijk hun ogen, tot postnatale dag 24,5 open. Als gevolg van de transparantie van het hoornvlies, kan iris therapieën worden geanalyseerd gemakkelijk door de tijd door noninvasive in vivo methoden. De semi-transparante iris voor BALB/c muizen kunnen bovendien, flatmounted met minimale aspecifieke achtergrondkleuring p.a. gedetailleerde immunohistologic. In dit model, angiogenese is vooral het gevolg van de inflammatoire en plasminogen activeren van systemen. De punctie-geïnduceerde model is de eerste voor het opwekken van iris neovascularization in kleine knaagdieren, en heeft het voordeel van het toestaan van directe noninvasive in vivo analyse van het angiogenic-proces. Bovendien, het model kan worden gecombineerd met angiogenic modulerende stoffen, waarin wordt benadrukt het potentieel in de studie van angiogenese met een perspectief in vivo .
Introduction
De iris, samen met het straalvormig lichaam en de vaatvlies, omvat de uvea, dat het meest gevacuoliseerd weefsel van het oog is. Iris therapieën is van essentieel belang bij het handhaven van de homeostase in de voorste kamer van het oog. Als gevolg van overvloedige anastomotic verbindingen tussen slagaders en aders geven iris bloedvaten voedingsstoffen en de levering van zuurstof niet alleen aan de iris zelf, maar ook tot het hele anterieure segment van de oog-1.
De vorming van nieuwe bloedvaten of angiogenese van bestaande, is van fundamenteel belang in fysiologische processen, zoals ontwikkeling en wond genezing2. Angiogenese is fijn geregeld door een veelheid van canonieke factoren, zoals de vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF) en plasminogen activator inhibitor (PAI), evenals meerdere inflammatoire factoren en een gebrek aan evenwicht van deze factoren kan leiden tot pathologische angiogenese3.
In het oog is neovascularization de oorzaak van zicht-bedreigende ziekten, zoals proliferatieve diabetische retinopathie (PDR) en neovascular glaucoom (NVG). In deze oogbeschadigingen en/of ziekten, ligt de focal neovascularization vaak in de retinale weefsel, maar het gebrek aan evenwicht in de inflammatoire en angiogenic factoren in beide de posterieure en anterieure oogbeschadigingen en/of kamers van het oog heeft in verband gebracht met rubeosis iridis, de klinische term voor iris pathologische neoangiogenesis4. Deze aandoeningen geven de mogelijkheid van de volwassen iris ondergaan van angiogenese. Bij muizen, oogbeschadigingen en/of therapieën is onvolwassen na de geboorte en blijft rijping postpartum. Deze eigenaardigheid van ontwikkeling wordt benut in de muismodel van zuurstof-geïnduceerde retinopathie, een model dat nauw samen van de Nabootsers van de klinische toestand van retinopathie van prematuriteit5. Bovendien, angiogenese en ontstekingen spelen een sleutelrol in de wond genezing mechanismen6, en wond genezing zelf angiogenese modellen7gekoppeld is geweest.
In deze studie beschrijven we een model van lekke band-geïnduceerde iris neovascularization. Uveal lekke banden worden uitgevoerd van de buitenste grens van de limbus, die iris neovascularization door triggering de wond genezing systeem veroorzaken. Als gevolg van de transparantie van het hoornvlies, de iris therapieën kunnen gemakkelijk in vivo door noninvasive methoden geanalyseerd. Geperforeerde ogen presenteren een verhoging van vasculaire bed in de iris, die gekoppeld aan een stijging van het plasminogen activeren en inflammatoire merkers8 is. Het gepresenteerde model heeft een groot potentieel als een nieuwe tool angiogenese en screening van angiogenic verbindingen te bestuderen en kunt direct in vivo visualisatie van de processen van de angiogenic.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
BALB/c muis pups van beide geslachten werden gebruikt overeenkomstig de verklaring voor het gebruik van dieren in Oftalmo en visie onderzoek, en de protocollen werden goedgekeurd door Stockholmse Comité voor ethisch verantwoord onderzoek van het dier. Muizen werden gehuisvest in nesten, samen met de zogende moeder, met een 12u dag/nacht cyclus, vrije toegang tot voedsel en water, en dagelijks gecontroleerd.
Opmerking: Voor de chirurgische ingreep, muizen hielden onder verdoving met vluchtige Isofluraan. Oogbeschadigingen en/of zalven zijn afgeraden tijdens oogbeschadigingen en/of procedures, als zij met de behandelingen en stoffen worden gebruikt interfereren kunnen. Indien nodig, om te voorkomen dat droge-eye, kan een daling van steriele normale zoutoplossing worden toegepast. Hoewel uveal puncties zelfherstellende zijn, was gezorgd tijdens uveal puncties steriliteit met chirurgische instrumenten. Na chirurgische behandeling opgenomen hydratatie met normale zoutoplossing subcutaan, en analgesie met oogbeschadigingen en/of actuele administratie van tetracaïne hydrochloride. De pups mochten sternale lighouding op een verwarming pad herstellen voordat het wordt teruggestuurd naar de zogende moeder, in een schone kooi. Nesten werden gehouden met dezelfde zogende moeder om stress te vermijden.
1. anesthesie
- Bereiden de verdoving inductie zaal, Isofluraan verdoving beheren en ervoor zorgen dat er ook een kleine muis masker is gekoppeld.
Opmerking: Voer alle dierproeven in overeenstemming met alle toepasselijke ethische vergunningen. - Prefill de inductie kamer met 3-4% vluchtige Isofluraan in atmosferische lucht.
Opmerking: Verschillende verdoving stoffen, andere dan Isofluraan kunnen worden gebruikt, overeenkomstig ethische vergunningen. Vluchtige verdoving procedures dient op een geventileerde bankje of fume hood. - Plaats een postnatale (P) 12,5-dag oude BALB/c muis pup in de zaal van inductie. Bevestigen dat de apparaten van het narcose is klaar om te leveren Isofluraan aan de inductie-kamer.
Opmerking: Muis pups zijn kwetsbaar en beste behandeld door de scruff. De pups bij elkaar houden als een nestje of met de zogende moeder om stress te vermijden. - Laat de pup te worden volledig verdoofd.
- Zacht, halen de muis pup door de scruff.
Opmerking: Houd de kamer van de inductie gesloten op elk moment voor veilige en stabiele inductie. - De muis naar de knaagdier masker overbrengen. Zorg ervoor dat de verdoving stroom overschakelen van de inductie kamer aan het masker, wanneer de muis te bewegen.
- Uitvoeren van een teen snuifje ter bevestiging van de verdoving.
2. het doorprikken van Procedure onder chirurgische stereoscoop
- Plaats de muis in de positie van de laterale lighouding. Bevestig dat het masker is goed gepositioneerd zodat het oog van de muis in het gezichtsveld van de stereoscoop is.
- Zachtjes draaien de muis hoofd zodat het oog naar de stereoscoop boven ligt.
Opmerking: Duidelijke focus van het oog moet gebeuren onder de stereoscoop. Voor positionering, wordt een vergroting van 16 X aanbevolen, terwijl 40 X moet worden gebruikt voor het uitvoeren van de chirurgische ingreep. Als ethische vergunningen mogelijk is, kan het puntje van de snorharen trimmen vergemakkelijken de visualisatie van het oog. - Met behulp van kleine gelijkmakende pincet, zorgvuldig uitsteken van de pup oog door toepassing van de neerwaartse druk op de oogleden dorsale en ventrale voor het oog.
- Houden een zachte maar stevige ooglid van de pup, met een kleine Tang.
Opmerking: Het is aanbevolen om het uitvoeren van de oog-uitsteeksel en deksel te houden met de niet-dominante hand, zoals de punctie procedure moet worden uitgevoerd door de dominante hand. - U kunt de stereoscoop de cornea limbus opzoeken. Albino BALB/c limbus kan gemakkelijk worden geïdentificeerd door de circulaire vasculaire plexus posterieure naar het hoornvlies.
- Uitvoeren met een 0,25 mm diameter (30 G) schuine naald, een kleine uveal lekke band, in de buurt van de achterste limbal limiet van de uvea. Gebruik slechts het topje van de naald, en niet meer dan de helft de schuine kant (equivalent aan 0,5 mm), doorprikken de uvea. Indien goed uitgevoerd, de uveal puncties zijn zelfsluitende, maar intraoculaire injectie van studie stoffen kan worden beheerd door de dezelfde punctie wond.
Opmerking: Als ervaren met muis oogbeschadigingen en/of anatomie, wordt de uveal punctie uitgevoerd tussen het straalvormig lichaam en de ora serrata. Wees voorzichtig tijdens het uitvoeren van de uveal van de lekke band te voorkomen bezwijken van de lens. - De tweede uveal punctie in de tegenovergestelde site van het oog van de eerste lekke band site uitvoeren. Optimaliseren van de afstand en de positie van de lekke banden; Overweeg 12 en 6 uur lekke banden, met 12 uur wordt als dorsale mogelijk.
- Herhaal de procedure uveal lekke banden elke vier dagen tot P24.5. Vóór elke opeenvolgende uveal punctie, dierlijke status met bijzondere aandacht voor de aanwezigheid van traumatische cataract als gevolg van lens schade tijdens de uveal lekke band, of duidelijk verminderde oogbeschadigingen en/of druk te controleren. Streven naar het uitvoeren van herhalen lekke banden op dezelfde positie als de vorige lekke banden voor optimale effecten.
3. noninvasive in Vivo toezicht
- Voorafgaand aan de punctie of injecties op experimentele dagelijks, anesthetize de muis zoals presteerden boven.
- Met de muis in de positie van de laterale lighouding, moet u voorzichtig het oog uitsteken.
- Focus op iris therapieën met de chirurgische stereoscoop.
- Maak een foto van de iris therapieën met een camera gemonteerd op de chirurgische stereoscoop.
Opmerking: Hoewel niet noodzakelijk, inducerende meiose kan handig zijn om te normaliseren iris oppervlakte per dier. Overwegen ethische vergunningen bij het selecteren van een meiose-inducerende agent. Zorgvuldige focus van de iris therapieën vergemakkelijkt verdere kwantitatieve analyse. Een magnitude van 40 X wordt aanbevolen.
4. post-operatieve zorg
- Verwijder de BALB/c pup uit het knaagdier masker en zachtjes over te brengen naar een verwarming pad gelaagd met een chirurgische mat.
- Een daling van 1% tetracaïne oplossing toepassen geperforeerde ogen.
Opmerking: Andere pijnstillende oplossingen kunnen worden gebruikt, volgens ethische vergunningen. - Hydrateren het dier met een subcutane injectie van 200 µL van steriele normale zoutoplossing.
- De pup terug naar de moeder van de verpleging in een kooi schoon muis.
- Toezicht op het proces van de gegevensterugwinning. De pup moet zitten kundig voor deambulate en ga terug naar het nest.
5. ogen Enucleation
- Het dier door cervicale dislocatie euthanaseren. Enucleation en dissectie onder een stereoscoop voor betere visualisatie van de procedure uitvoeren.
Opmerking: Verschillende euthanasie procedures kunnen worden gebruikt. Het is raadzaam zich strikt houden aan ethische vergunningen. - Trek uit elkaar de oogleden ter verbetering van de blootstelling aan het oog.
- Maken een kleine snede (ongeveer 0.5 cm) in de buurt van de canthus van de deksels van het oog met een gebogen Bonn oog schaar.
- Gebruik de blootgestelde periocular ruimte te voegen micro gelijkmakende pincet achter (onder) de hele wereld in de baan.
- Pak het weefsel rondom het oog en trek het voorzichtig naar boven. Vermijd vasthouden aan de oogbol, gebruik van de omliggende weefsels dichter naar de oogkas.
- Plaats de gebogen Bonn oog schaar achter het oog globe in de baan.
- Snijden door de omliggende weefsels tot het oog wordt vrijgegeven uit het stopcontact.
Opmerking: Deze techniek dissectie onderhoudt anatomie van het oog en voordelen van latere analyse. - Overgaan tot de verwijdering van vreemde weefsels van het oog. De verwijdering van vreemde weefsel kan worden uitgevoerd na vaststelling, indien gewenst.
Opmerking: BALB/c muizen zijn melanine ontoereikend, dus, te verhogen van contrast, een donkere achtergrond wordt aanbevolen om de dissectie procedure. - Kort spoelen de geheel-eye in een petrischaal gevuld met steriele-fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS).
- Het oog overbrengen in een tube van 2 mL, met 1,5 mL van 4% gebufferd-formaline-oplossing.
- Het oog voor 6 uur op kamertemperatuur vaststellen.
Opmerking: Vaststelling verleent de stevigheid van het weefsel en vergemakkelijkt de dissectie van de iris. Tot vaststelling van de tijd moet worden getest en aangepast voor verschillende toepassingen.
6. Iris dissectie Procedure onder stereoscoop
- De kleefpoeders oplossing verwijderen uit de buis met een 1,5 mL kunststof Pasteur Pipet (of soortgelijke), en spoel het oog driemaal met verse PBS.
- Plaats het vaste oog in een zacht droog oppervlak (dissectie tribune) met de voorste kamer naar boven zijn gericht.
- Uitvoeren met een schuine naald 30 G, een ingangspunt posterieure aan de limbus.
- Holding het anterieure segment met een kleine gelijkmakende Tang, breng een tip Clayman-Vannas rechte schaar in de opening eerder gemaakt.
Opmerking: Het wordt aanbevolen om de verlostang met de niet-dominante hand, en de schaar met de dominante controle. - Gesneden terwijl het draaien van het oog met de gelijkmakende pincet, rond de limbus te verwijderen van het achterste segment van het oog.
Nota: Uitvoeren van gedeeltelijke bezuinigingen zal toestaan de binnenste punt van de schaar te blijven in het weefsel en sterk vergemakkelijkt het proces. - Plaats het anterieure segment geconfronteerd met naar beneden, bloot de lens.
- De lens zorgvuldig verwijderen door het met een kleine Tang grijpen en naar boven trekken.
Opmerking: Er is een schuine naald inzetbaar te doorprikken en trek de lens. - Plaats het anterieure segment met het hoornvlies naar beneden en de cut loodrecht op het gezichtsveld.
- Zachtjes grijpen het achterste aan het straalvormig lichaam weefsel met de kleine gelijkmakende pincet.
- Met een rechte schaar Clayman-Vannas, gaat u verder met het trim just anterior to het straalvormig lichaam te verwijderen van het trabecular gevlochten en isoleren van de iris. Controleren of het trabecular gevlochten is verwijderd; de iris moet verplaatsen binnen het hoornvlies.
- Zorgvuldig de anterior oogschelp Pipetteer met behulp van de kleine gelijkmakende Tang, houden van het hoornvlies, aan een 96-wells-plaat met 200 µL van PBS.
- Houd het hoornvlies in de put en de iris ontleden door te spoelen met PBS met een pipet.
Opmerking: Als de iris blijft aanhanger aan het hoornvlies, sommige trabecular gevlochten mogelijk heden, en de schuine kant van een naald 30 G kan worden gebruikt om te helpen de iris verdringt. - Verwijder het hoornvlies uit de 96-Wells met de kleine gelijkmakende Tang, en houd het geïsoleerd iris in de put voor verdere analyse.
- Opslaan van de vrij zwevende iris monsters bij 4 ° C.
Opmerking: Ondanks wordt vastgesteld, worden de langetermijnopslag van de vrij zwevende monsters van iris wordt niet aanbevolen.
7. mogelijke experimentele Read-Outs
- Gebruiken om te visualiseren de bloedvaten in de ontleed irissen, vrij zwevende geheel-mount immunohistochemistry kleuring van methoden voor markeringen zoals bloedplaatjes endothelial cel adhesie molecuul (PECAM) -1 of isolectin B4. Als alternatief, perfusie van het gehele lichaam met vasculaire kleuring, zoals TL-geëtiketteerden ultrahoog moleculair gewicht dextrans gebruiken.
- Gebruik in vivo noninvasive beelden uit te voeren in silico flat-montage en kwantificeren van volledige iris therapieën met passende imagingsoftware.
Opmerking: Therapieën kan worden gekwantificeerd, zowel in vivo en in vitro, met behulp van densitometrie of met therapieën analyse software9. - Het verwerken van de hele oogbol voor nucleïnezuren en eiwit extractie, gevolgd door PCR of immunoblotting methoden, uitvoeren van moleculaire analyse van de geperforeerde ogen.
Opmerking: Moleculaire analyse van weefsels wordt best uitgevoerd met niet-vaste weefsel, maar dissectie van niet-vaste iris is zeer uitdagend en het gebruik van het hele oog heeft statistisch significante resultaten weergegeven in eerdere studies8.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Albino BALB/c muis pups op P12.5 werden onderworpen aan uveal lekke banden, elke vierde dag herhaald (experimentele dag 0, 4, 8, 12), tot P24.5. P27.5, muizen werden euthanized en irissen zorgvuldig ontleed (experimentele dag 15). Foto's van muis ogen werden genomen met een camera die is aangesloten op een chirurgische stereoscoop voordat alle punctie series in experimentele dagelijks te beoordelen noninvasive evaluatie van de vasculaire reactie van iris. Uveal puncties induceren een vasculaire reactie van de iris door triggering de wond genezing systeem (Figuur 1). Als gevolg van de transparantie van het hoornvlies en de melanine-deficiënte BALB/c muizen, grotere iris therapieën is waarneembaar van experimentele dag 4 (P16.5) en intensiveert gedurende de looptijd van het protocol. Immunohistochemistry beelden voor PECAM-1 aanduiding van een toename van de algehele therapieën in irissen van geperforeerde ogen in vergelijking met besturingselementen (Figuur 2).
Figuur 1: Noninvasive monitoring van lekke band-geïnduceerde iris angiogenese. Representatieve beelden van dag 0, 4, 8, 12 en 15 van controle en geperforeerde ogen. Iris vasculaire reactie blijkt uit dag 4 in de geperforeerde ogen. Schaal bar = 1 mm. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 2: Iris vasculaire reactie in punctie-geïnduceerde ogen. Illustratieve afbeeldingen van PECAM-1 kleuring van dag 15 irissen, weergegeven als volledige weergave en gebied (vierkante), van het besturingselement vergroot en doorboord ogen. Schaal bar = 400 µm (boven); 200 µm (onder). Opmerking de verhoging van vasculaire bijkantoren in geperforeerde irissen. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
In het huidige protocol, wordt een nieuwe methode voor de inductie van iris vasculaire reactie door uveal punctie gepresenteerd. De punctie wond genezing mechanismen activeert en bevordert vasculaire reacties in de iris10,11. Dit is in overeenstemming met oogbeschadigingen en/of pathologieën, zoals PDR en NVG, waar hevige angiogenic reacties van het netvlies in het achterste segment van het oog in de klinische toestand van rubeosis iridis, een toegenomen vascularisatie van de iris12 uitmonden ,,13.
Het hoornvlies is avasculaire en bezit een merkwaardige collageen structuur leidt tot transparantie. In overeenstemming met deze is angiografie van het anterieure segment van het oog voor de visualisatie van iris therapieën haalbaar door rechtstreekse visualisatie van de bloedvaten iris met in vivo noninvasive methoden13,14. Vorige dierlijke modellen van iris neovascularization vertrouwd op grote-eyed dieren waar complexe chirurgische ingrepen werden uitgevoerd15,16,17, of door intraoculaire injectie van specifieke angiogenic stoffen 18 , 19. bij deze methode wordt het gebruik van pigment tekort BALB/c muizen kunnen directe observatie van de iris therapieën in vivo, en staat toe noninvasive kwantificering van de iris neovascularization op muizen, waardoor een nieuwe tool om te studeren van in vivo angiogenese.
Bovendien kan de onderhavige methode voor muis iris dissectie analyse van iris punctie-geïnduceerde neovascularization met vasculaire specifieke markers. Hier, iris schepen werden illustratively gekleurd met PECAM-1-antistoffen en gevisualiseerd door fluorescentie microscopie. Vrij zwevende, geheel-mount immunokleuring protocollen zijn gemakkelijk bereikt en vrij routine. Daarnaast kunnen de perfusie methoden voor bloedvaten in dit model worden uitgevoerd. Vasculaire specifieke kleuring verleent beoordeling van iris bloedvat structuur en dus kwantificering, door gebruiker gebaseerde of software analyse, van de iris neovasculature9. Als eerder beschreven8,20, was de illustratie van de iris neovasculature beoordeeld op dag 15 na-puncture-inductie. Niettemin, effecten op iris vascularisatie waarneembaar zo spoedig dag 4 na-puncture-inductie, suggereren dat evaluatie van de punctie-geïnduceerde iris neovascularization model kan worden verricht op verschillende tijdstippen, op basis van specifieke experimentele eisen.
Het is opmerkelijk dat dit protocol sommige uitdagingen presenteert, met name met betrekking tot de grootte van een muizen ogen ten opzichte van andere diermodel. Uiterste zorg moet worden genomen tijdens het uitvoeren van de uveal punctie-procedure, om te vermijden lens raakt of schade aan het oog. Waarneming van oogbeschadigingen en/of voorwaarde is paramount en dieren met experimentele-gerelateerde staar of oogbeschadigingen en/of onderdruk moet worden uitgesloten en adequaat euthanized. Muis irissen zijn uiterst kwetsbaar en enigszins kleverig. Juiste dissectie en isolatie van het weefsel presenteert een andere kritische stap voor het protocol. Een correcte scheiding van het trabecular gevlochten is noodzakelijk voor de verplaatsing van de iris van de voorste kamer. Bovendien, vanwege de kwetsbaarheid, iris isolatie vereist fixatie van het weefsel, die stroomafwaarts moleculaire analyse schaadt. Echter is een moleculaire analyse van een nietgefixeerde geheel-oog met succes toegepast op de onderhavige methode8.
Kortom presenteert het beschreven protocol een nieuwe punctie-geïnduceerde iris neovascularization muismodel. Dit model heeft het voordeel van het toestaan van in vivo noninvasive directe visualisatie van angiogenese. Bovendien, maakt het gebruik van kleine knaagdieren het gepresenteerde model aantrekkelijk voor studies van rubeosis iridis, zoals het vermijdt het gebruik van groot-eyed dieren en vergezeld van ethische beperking. Bovendien kan de procedure worden gecombineerd met injectie van pro - of anti-angiogenic stoffen via de zelfsluitende punctie, verbetering van het nut ervan als een nieuw model van in vivo angiogenese.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben niets te onthullen.
Acknowledgments
De auteurs bedanken Linnea Tankred en Diana Rydholm voor de veehouderij.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Bonn eye scissors | Bausch & Lomb | 23060 | |
| Clayman-Vannas curved scissors | Bausch & Lomb | E3383 C | |
| Clayman-Vannas straight scissors | Bausch & Lomb | E3383 S | |
| Objective adapter for camera | Handcrafted | N/A | Or any system that allows adapting a camera to the microscope |
| Heating Pad 100-110 watts | Non Applicable | N/A | Available in pet/veterinarian stores |
| Hypodermic 30g beveled needle | KDM GmBH germany | 911914 | |
| Iphone 4S | Apple | Non Applicable | Or other high resolution image acquistion device |
| Isoflurane | Baxter | KDG 9623 | |
| McPherson tying forceps | Bausch & Lomb | E1815 S | |
| Micro tying forceps | Bausch & Lomb | 63140 | |
| Minims tetracaine hydrochloride | Bausch & Lomb | N/A | 1 % (w/v) Eye Drops |
| Neutral-buffered formalin | Bioreagens | 0018-40 | |
| Normal saline solution | Fresenius Kabi | 210352 | 0.9 % (w/v) NaCl in injectable water |
| Phosphate-buffered saline | ThermoFisher Scientific | 10010023 | Balanced and buffered PBS pH 7.4 |
| Petri dish 10 cm | Starstedt | 83.3902 | |
| Petri dish 3 cm | Starstedt | 83.3900 | |
| Safe Seal Tube 2.0 mL | Starstedt | 72.685.200 | Or any eppendorf style tubes |
| TC plate 96-well | Starstedt | 83.3924 | |
| Transfer pipette 3.5 mL | Starstedt | 86.1171 | Or any other Pasteur pipette style |
| Univentor 400 anesthesia unit | Univentor Limited | N/A | Or equivalent flow regulator with induction chamber and mask for volatile anesthesia |
| Wild M650 surgical microscope | Wild Heerbrugg | N/A | Or other surgical or magnifying stereoscope |
References
- Morrison, J. C., Van Buskirk, E. M. Anterior collateral circulation in the primate eye. Ophthalmology. 90 (6), 707-715 (1983).
- Dreyfuss, J. L., Giordano, R. J., Regatieri, C. V. Ocular Angiogenesis. J Ophthalmol. 2015, 892043 (2015).
- Breuss, J. M., Uhrin, P. VEGF-initiated angiogenesis and the uPA/uPAR system. Cell Adh Migr. 6 (6), 535-615 (2012).
- Rodrigues, G. B., et al.
- Stahl, A., et al. The mouse retina as an angiogenesis model. Invest Ophth Vis Sci. 51 (6), 2813-2826 (2010).
- DiPietro, L. A. Angiogenesis and wound repair: when enough is enough. J Leukocy Biol. 100 (5), 979-984 (2016).
- Eming, S., Brachvogel, B., Odorisio, T., Koch, M. Regulation of angiogenesis: Wound healing as a model. Prog Histochem Cytoc. 42 (3), 115-170 (2007).
- Beaujean, O., Locri, F., Aronsson, M., Kvanta, A., André, H. A novel in vivo model of puncture-induced iris neovascularization. PloS One. 12 (6), e0180235 (2017).
- Zudaire, E., Gambardella, L., Kurcz, C., Vermeren, S. A Computational Tool for Quantitative Analysis of Vascular Networks. PloS One. 6 (11), (2011).
- Dorrell, M., Uusitalo-Jarvinen, H., Aguilar, E., Friedlander, M. Ocular neovascularization: basic mechanisms and therapeutic advances. Surv Ophthalmol. 52 Suppl 1, S3-S19 (2007).
- Kvanta, A. Ocular angiogenesis: the role of growth factors. Acta Ophthalmol. 84 (3), 282-288 (2006).
- Salman, A. G. Intrasilicone Bevacizumab Injection for Iris Neovascularization after Vitrectomy for Proliferative Diabetic Retinopathy. Ophthalmic Res. 49 (1), 20-24 (2013).
- Jeong, Y. C., Hwang, Y. H. Etiology and Features of Eyes with Rubeosis Iridis among Korean Patients: A Population-Based Single Center Study. PloS One. 11 (8), e0160662 (2016).
- Speier, S., Nyqvist, D., Köhler, M., Caicedo, A., Leibiger, I. B., Berggren, P. -O. Noninvasive high-resolution in vivo imaging of cell biology in the anterior chamber of the mouse eye. Nat Protoc. 3 (8), 1278-1286 (2008).
- Stefansson, E., Landers, M. B., Wolbarsht, M. L., Klintworth, G. K. Neovascularization of the Iris - an Experimental-Model in Cats. Invest Ophth Vis Sci. 25 (3), 361-364 (1984).
- Nork, T. M., Tso, M., Duvall, J., Hayreh, S. S. Cellular Mechanisms of Iris Neovascularization Secondary to Retinal Vein Occlusion. Arch Ophthalmol-Chic. 107 (4), 581-586 (1989).
- Hjelmeland, L. M., Stewart, M. W., Li, J. W., Toth, C. A., Burns, M. S., Landers, M. B. An Experimental-Model of Ectropion Uveae and Iris Neovascularization in the Cat. Invest Ophth Vis Sci. 33 (5), 1796-1803 (1992).
- Tolentino, M. J., Miller, J. W., Gragoudas, E. S., Chatzistefanou, K., Ferrara, N., Adamis, A. P. Vascular endothelial growth factor is sufficient to produce iris neovascularization and neovascular glaucoma in a nonhuman primate. Arch Ophthalmol-Chic. 114 (8), 964-970 (1996).
- Paula, J. S., et al. Rabbit Rubeosis Iridis Induced by Intravitreal Latex-derived Angiogenic Fraction. Curr Eye Res. 36 (9), 857-859 (2011).
- Takei, A., Ekström, M., et al. Gene Transfer of Prolyl Hydroxylase Domain 2 Inhibits Hypoxia-inducible Angiogenesis in a Model of Choroidal Neovascularization. Sci Rep. 7, 42546 (2017).
