Здесь мы представляем протокол к хирургическим путем создания «кишечной петли перевязаны» в курица тонкий кишечник. Эта процедура позволяет для сравнения нескольких штаммов Clostridium perfringens вирулентности в situ в одном узле. Этот метод значительно уменьшается количество кур, обычно необходимых для подобных экспериментов в естественных условиях .
Энтерит Некротический был изучен в КУР, с использованием различных моделей инфекции в естественных условиях . Большинство из них использовать сочетание предрасполагающих факторов, таких как кокцидиоза и диеты, с кормления или администрации через канал, с помощью Clostridium perfringens. В этих моделях сравнение нескольких штаммов C. perfringens вирулентности исследований требуется большое количество хостов для получения значимых результатов. Смертность в ходе исследования может быть высокой зависимости от экспериментальной модели, поэтому повышение этических соображений относительно животных в научных исследованиях. Разработка новых моделей инфекции, требующие меньше животных для изучения патогенеза, пока предоставление статистически существенных и допустимых результатов, имеет важное значение в плане сокращения использования животных в научных исследованиях. Кишечные перевязаны цикла модели были использованы для изучения клостридий инфекции в различных видов, таких как мышей, кроликов и телят. После хирургических процедур для создания сегментов перевязаны цикла штаммы C. perfringens вводят непосредственно в петли, чтобы установить тесный контакт между бактериями и слизистую кишечника. По завершении процедуры после нескольких часов берутся образцы Люминал содержания и тонкой кишки. Несколько штаммов бактерий могут быть привиты в каждое животное, что сокращает количество необходимых предметов в экспериментах. Кроме того процедуры проводятся под общим наркозом для уменьшения боли животных. В КУР эта модель будет более подходящим, чем пероральный для сравнения патогенности штамм C. perfringens , поскольку требуется меньшее количество животных, не предрасполагающие факторы требуются навести болезни и боль контролируется анальгетики . Кишечные петли перевязаны модель плохо описан в кур и стандартизации имеет важное значение для его оптимального использования. Эта рукопись обеспечивает все необходимые шаги для создания многочисленных кишечных петель перевязаны в кур и приносит информацию о критических точек для получения достоверных результатов.
Использование животных моделей для изучения инфекционных заболеваний, затрагивающих людей и животных является главным инструментом в оценке Факторы вирулентности, регулирующие патогенеза конкретные условия также в отношении разработки стратегий для предотвращения или лечения заболеваний1. Несмотря на многочисленные преимущества использования животных моделей для изучения различных заболеваний возникают этические соображения относительно этой практики. Исследователи должны свести к минимуму использование животных во время получения существенных и допустимые результаты. Для обеспечения учета вопросов благосостояния в таких исследованиях была разработана концепция 3 Rs принципов (Replace, уменьшить и уточнить). В исследованиях энтерит Некротический курица в естественных условиях курица модели используются для изучения этиологии, профилактики и лечения данного состояния2,3,4,5. Патогенные штаммы C. perfringens проведение конкретных вирулентности факторы, такие как NetB токсин6, находятся в ведении вызывают некротические энтерит в КУР7. Принцип замены, таким образом, трудно достичь в таком случае, поскольку эти факторы вирулентности могут быть не так критично в других видов животных. Большинство моделей для энтерит Некротический в КУР использовать комбинацию факторов риска, таких как кокцидиоза и изменили диету, чтобы побудить некротические энтерит, следуют затравки культуры бульон, содержащий большое количество C. perfringens2. Эти модели будут вызывать заболевания в большое количество кур, и смертности может иметь важное значение в таких испытаний8, таким образом вызывает обеспокоенность по поводу сокращения и уточнения принципов в исследований на животных.
Кишечные петли перевязаны модели являются желательной альтернативой для изучения болезней, вызванных кишечных патогенов отношении принцип сокращения и уточнения. В этих моделях кишечные сегментов, под названием «петли» создаются путем размещения лигатуры вдоль желудочно-кишечного тракта для формирования независимой и герметичных отсеков, где патогены могут быть введены только9 или с другими молекулами, например вакцин-кандидатов 10 , 11. патогенов интереса находятся в тесном контакте с клетками кишечника и после нескольких часов время инфекции, кишечные образцы могут быть восстановлены для дальнейшего анализа. Это позволяет использовать несколько лечения и контрольных групп в то же самое животное. Статистический анализ может выполняться с моделями неоднократные меры, которые увеличивает силу дискриминации между группами и уменьшает количество необходимых кур, по сравнению с пероральная затравка испытания. Кроме того хирургических процедур и последующего заражения раз выполняются под непрерывной общей анестезии и обезболивание, таким образом к минимуму животных боль. Замкнутая перешнуровок являются идеальным шаблон для сокращения числа узлов и создания более гуманной системы исследований на животных.
Кишечные петли перевязаны модели хорошо описаны в различных видов, таких как телят, кроликов и мышей2,9, но плохо описано в КУР7. Для оптимального использования этой хирургической модели правильную технику и выполнения необходимы для создания перевязаны кишечной петли, чтобы избежать повреждения кишечника целостности. Цель этой рукописи должен описать метод шаг за шагом в создании нескольких кишечных петель в модели курица. Этот метод ограничен хирурга мастерство и опыт, как точные процедуры имеют важное значение для успеха проекта.
В многочисленных видов для изучения взаимодействия хост возбудителя и патогенезе заболеваний, вызванных различных кишечных патогенов, таких как Clostridium perfringens, Clostridium несговорчивый и были описаны модели кишечной петли Salmonella enterica7,9,<sup …
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана в птицы исследований (M. Boulianne) Председатель факультета ветеринарной медицины Университет Монреаля. DRS. Boulianne и родитель разработали модель. DRS. Boulianne и родитель выполненных операций. Д-р ожоги помощь в разработке протокола анестезии. Д-р родитель редактировать видео и написал рукопись. DRS Бернс, Дероше и Boulianne редактировать рукописи.
EZ-Scrub 747 | Becton Dickinson and Company | 4% chlorhexidine gluconate detergent impregnated sterile brush. No catalog number available. Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/infection-prevention/surgical-hand-scrubs/ez-scrub-preoperative-surgical-scrub-brushes | |
Isopropyl alcohol 70% USP 4 L | Commercial isopropyl alcohol | P016IP70 | Web address: http://www.comalc.com/products/ |
Chlorexidine | Sigma-Aldrich | 282227-1G | Chlorhexidine gluconate solution, must be diluted to 4%. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/282227?lang=fr®ion=CA&gclid=EAIaIQobChMI8vHr4_OY1wIV3rrACh2ZWQKuEAAYAiAAEgLKx_D_BwE |
Surgical Drape Small (27 inch x 24 inch) with 3 x 6 inch Fenestration | Veterinary Specialty Products | 32724 | Web address: http://www.vetspecialtyproducts.com/index.cfm?fuseaction=ecommercecatalog.detail&productgroup_id=15 |
Scalpel blades #3 | Swann-Morton | 301 | Web address: https://www.swann-morton.com/product/16.php |
Sterile saline NaCl 0.9% | Sigma-Aldrich | S8776-100ML | Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8776?lang=fr®ion=CA |
Vicryl 3-0 | Ethicon | D9003 | Polyglactin multifilament absorbable suture material. Web address: http://www.ethicon.com/healthcare-professionals/products/wound-closure/absorbable-sutures/coated-vicryl-polyglactin-910-suture |
Syringe 1 ml with 26G needle | Becton Dickinson and Company | 329652 | Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/diabetes-care/insulin-syringes/bd-1-ml-conventional-insulin-syringes |
Brain Heart Infusion | Sigma-Aldrich | 1104930500 | Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/110493?lang=fr®ion=CA&cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xorders-_-prodRecCold2-1 |
Eppendorf tube | Sigma-Aldrich | T9661-500EA | Microcentrifuge tube. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t9661?lang=fr®ion=CA&gclid=EAIaIQobChMI-YizzfiY1wIVRkCGCh30SQjuEAAYAiAAEgLK5fD_BwE |
Formalin solution, buffered neutral, 10% | Sigma-Aldrich | HT501128-4L | Ratio tissue : formalin of 1: 10 for adequate fixation. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht501128?lang=fr®ion=CA |
Clostridium perfringens strains | Université de Montréal, Chaire en recherche avicole | N/A | Specific to each laboratory, available upon request to correspondant author |