यहां मस्तिष्क में amyloid-β (Aβ) के प्रारंभिक प्रभावों की जांच करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया है । यह पता चलता है कि Aβ clathrin मध्यस्थता endocytosis और axonal विकास शंकु के पतन लाती है । प्रोटोकॉल axonal विकास शंकु पर Aβ के प्रारंभिक प्रभाव का अध्ययन करने में उपयोगी है और अल्जाइमर रोग की रोकथाम की सुविधा हो सकती है ।
Amyloid-β (Aβ) अल्जाइमर रोग (AD) में स्मृति हानि का कारण बनता है । हालांकि चिकित्सकीय विज्ञापन रोगियों के दिमाग में Aβ स्तर को कम करने के लिए दिखाया गया है, इन स्मृति कार्यों में सुधार नहीं है । स्मृति विकलांगता की उपस्थिति से पहले मस्तिष्क में Aβ समुच्चय के बाद से, लक्ष्यीकरण Aβ विज्ञापन रोगियों जो पहले से ही स्मृति घाटे प्रदर्शन के इलाज के लिए अक्षम हो सकता है । इसलिए, बहाव Aβ जमाव के कारण संकेत विज्ञापन विकास से पहले अवरुद्ध किया जाना चाहिए । Aβ axonal अध…, न्यूरॉन नेटवर्क और स्मृति हानि के विघटन के लिए अग्रणी लाती है. हालांकि वहां Aβ विषाक्तता के तंत्र पर कई अध्ययन कर रहे हैं, Aβ विषाक्तता के स्रोत अज्ञात रहता है । मदद करने के लिए स्रोत की पहचान, हम एक उपंयास प्रोटोकॉल है कि माइक्रोस्कोप का उपयोग करता है, जीन अभिकर्मक, और जीवित सेल इमेजिंग जल्दी Aβ की वजह से axonal विकास शंकु में कल्चरल न्यूरॉन्स के कारण परिवर्तन की जांच का प्रस्ताव । इस प्रोटोकॉल से पता चला कि Aβ प्रेरित clathrin विकास शंकु पतन के बाद axonal विकास शंकु में मध्यस्थता endocytosis, प्रदर्शन endocytosis की है कि निषेध Aβ विषाक्तता रोकता है । इस प्रोटोकॉल Aβ के प्रारंभिक प्रभाव का अध्ययन करने में उपयोगी हो जाएगा और अधिक कुशल और preventative विज्ञापन उपचार के लिए नेतृत्व कर सकते हैं ।
Amyloid-β (Aβ) जमा अल्जाइमर रोग (ad) के साथ रोगियों के मस्तिष्क में पाए जाते हैं और1 विज्ञापन का एक महत्वपूर्ण कारण माना जाता है कि न्यूरॉन नेटवर्क को बाधित, स्मृति हानि के लिए अग्रणी2,3,4. कई नैदानिक दवा उंमीदवारों को प्रभावी ढंग से रोकने के लिए दिखाया गया है amyloid-β (Aβ) उत्पादन या Aβ जमा हटा दें । हालांकि, कोई भी विज्ञापन रोगियों5में स्मृति समारोह में सुधार लाने में सफल रहा है । Aβ पहले से ही मस्तिष्क में जमा है स्मृति दोष6की शुरुआत करने से पहले; इसलिए, स्मृति हानियों का प्रदर्शन रोगियों के दिमाग में Aβ के स्तर को कम करने अप्रभावी हो सकता है । Aβ साठा नैदानिक विज्ञापन रोगियों में मौजूद है; हालांकि, इन रोगियों को शायद ही कभी न्यूरॉन अध-पतन और स्मृति6घाटे के साथ मौजूद. Aβ जमाव और स्मृति हानि के बीच एक समय अंतराल है । इसलिए, विज्ञापन की रोकथाम के लिए एक महत्वपूर्ण रणनीति Aβ विषाक्तता विज्ञापन के प्रारंभिक दौर के दौरान संकेत, स्मृति घाटे के विकास से पहले अवरुद्ध है । Aβ जमाव axon अध: पतन7,8,9,10,11,12,13है, जो एक व्यवधान के लिए नेतृत्व कर सकते है लाती है तंत्रिका नेटवर्क और स्मृति समारोह के स्थाई हानि । कई अध्ययनों से Aβ विषाक्तता के तंत्र की जांच की है; उदाहरण के लिए, विज्ञापन चूहों दिमाग के पतित axons14autophagy वृद्धि हुई है दिखाया गया है । Calcineurin सक्रियण Aβ-प्रेरित axonal अध15के एक संभावित तंत्र के रूप में सूचित किया गया है; हालांकि, axonal अध कि सीधा ट्रिगर अज्ञात रहता है ।
इस अध्ययन axonal अंत विकास शंकु कहा जाता है के पतन पर केंद्रित है । axonal विकास शंकु के पतन जैसे semaphorin-3 ए और ephrin-A516,17,18,19,20के रूप में axonal विकास से बचाने वाली क्रीम की वजह से हो सकता है । पतन अपक्षयी axonal अंत की तरह विज्ञापन रोगियों21,22के दिमाग में मनाया गया है । इसके अतिरिक्त, विकास शंकु कार्य की विफलता axonal अध23भड़काने कर सकते हैं । हालांकि, यह अज्ञात है कि क्या Aβ विकास शंकु पतन लाती है । इसलिए, इस अध्ययन के एक उपंयास प्रोटोकॉल प्रस्तुत करने के लिए Aβ के प्रारंभिक प्रभाव का निरीक्षण करने के लिए प्रसंस्कृत ंयूरॉंस में और Aβ-प्रेरित विकास शंकु पतन की जांच ।
इस अध्ययन में वर्णित प्रोटोकॉल aβ 1-42 उपचार के बाद axonal विकास शंकु में जल्दी घटना के अवलोकन सक्षम होना चाहिए । aβ 1-42 20 मिनट के भीतर axonal विकास शंकु में प्रेरित endocytosis, और विकास शंकु पतन उपचार के 1 ज के भीतर मनाया गया । …
The authors have nothing to disclose.
यह काम आंशिक रूप से JSPS (KAKENHI 18K07389), जापान, टाकेडा विज्ञान फाउंडेशन, जापान, और इस्सा फार्मास्युटिकल कं, लिमिटेड, जापान से अनुसंधान अनुदान द्वारा समर्थित किया गया ।
ddY mice | SLC | ||
Eight-well culture slide | Falcon | 354108 | |
poly D lysine | Wako | 168-19041 | |
Culture medium, Neurobasal medium | Gibco | 21103-049 | |
house serum | Gibco | 26050-088 | |
glucose | Wako | 049-31165 | |
L-glutamine | Wako | 074-00522 | |
0.05% trypsin | Gibco | 25300-054 | |
DNase I | Worthington | DP | |
soybean trypsin inhibitor | Gibco | 17075-029 | |
Filter with 70 µm mesh size, cell strainer | Falcon | 352350 | |
B-27 supplement | Gibco | 17504-044 | |
CO2 incubator | Astec | SCA-165DS | |
Amyloid β1-42 | Sigma-Aldrich | A9810 | |
paraformaldehyde | Wako | 162-16065 | |
sucrose | Wako | 196-00015 | |
Aqueous mounting medium, Aqua-Poly/Mount | polysciences | 18606-20 | |
Inverted microscope A | Carl Zeiss | Axio Observer Z1 | Connected with AxioCam MRm, Heating Unit XL S, CO2 Module S1, and TempModule S1 |
Objective Plan-Apochromat 20x | Carl Zeiss | 420650-9901 | |
Objective Plan-Apochromat 63x | Carl Zeiss | 440762-9904 | |
Objective, CFI Plan Apo Lambda 40X | Nikon | ||
anti-MAP2 IgG | Abcam | ab32454 | |
anti-tau-1 IgG | Chemicon | MAB3420 | |
anti-amyloid β antibody | IBL | 10379 | clone 11A1 |
normal goat serum | Wako | 143-06561 | |
bovine serum albumin | Wako | 010-25783 | |
t-octylphenoxypolyethoxyethanol | Wako | 169-21105 | |
goat anti-mouse IgG conjugated with AlexaFluor 594 | Invitrogen | A11032 | |
goat anti-rabbit IgG conjugated with AlexaFluor 488 | Invitrogen | A11029 | |
hot plate | NISSIN | NHP-M30N | |
cover glass | Fisher Scientific | 12-545-85 | |
35 mm dish | IWAKI | 1000-035 | |
Silicone RTV | Shin-Etsu | KE42T | |
hand punch | Roper Whitney | No. XX | |
Fluorescence membrane probe, FM1-43FX | Invitrogen | F35355 | |
Ca2+– and Mg2+-free Hanks' balanced salt solution | Gibco | 14175-095 | |
Transfection solution, Nucleofector solution | Lonza | VPG-1001 | |
Electroporator, Nucleofector I | Amaxa | ||
Inverted microscope B | Keyence | BZ-X710 | |
Image software, ImageJ | NIH | https://imagej.nih.gov/ij/ |