מכתים אלסטי על פרפין-שקופיות מוטבעות של רקמת סרטן pT3N0M0 קיבה
Summary
כאן, אנו מציגים פרוטוקול של כתמים אלסטיים כדי לזהות סיבים אלסטיים ברקמות סרטן קיבה pT3N0M0 על formalin-קבוע, פרפין חלקים מוטבעים. לאחר מכן, אנו מתארים שיטה כדי לקבוע אם תאים סרטניים לפלוש מעבר ללבינה אלסטי.
Abstract
לאמינה אלסטי, אשר ממוקם בדרך כלל בשכבת sub-mesothelial, בסמוך צפק mesothelial תאים, הוא אמפיפיפילית על המטאוקסילין ואאוזין (H & E) הצביעת אבל יכול להיות מדמיין דרך כתמים אלסטיים. אחד היתרונות החשובים של כתמים אלסטיים הוא שזה מקל לקבוע אם התאים הסרטניים פלשו מעבר לאמינה אלסטי. זה עוזר לבחון את היקף הפלישה משטח הצפק, ובכך להבחין בשלבים pT3 ו pT4 בסרטן העיכול. במחקר זה, אנו מציגים פרוטוקול לזיהוי סיבים אלסטיים ב-formalin קבוע, פרפין-מוטבע pT3N0M0 רקמות סרטן הקיבה סעיפים. אנו מכינים מקטעים פרפין 5-μm שתוקנו בשקופיות, ולאחר מכן כל השקופיות מdeparaffinated ומהתייבשות במהלך הליך הצביעת. לאחר מכן, כל הסעיפים תחמוצת על ידי אשלגן פרמנגנט, מולבן על ידי חומצה אוקסלית, מוכתם על ידי כתמים אלסטיים, ומוכתם על ידי ואן גיסון של. לבסוף, אנו בודקים את השפעת ההכתמים; לאמינה אלסטי הוא סיבים כחול-שחור וקולגן מוכתם אדום, בעוד תאים סרטניים מוכתמים בגוונים שונים של צהוב. כמו כן, אנו מתארים בפרוטרוט את השיטות המשמשות לקביעת מערכת היחסים המקובעת בין תאים סרטניים לבינה אלסטית. שיטה זו פשוטה, בעלות נמוכה, וישימה באופן נרחב בזיהוי של הפלישה משטח הצפק בסרטן העיכול בגלל הסלקטיביות המדהימה שלה לסיבים אלסטיים ותוצאות אותנטיות.
Introduction
לפי הגידול, צומת, ו גרורות (TNM) מערכת האחסון הזמני של סרטן, הפרוגנוזה של סרטן הקיבה בשלב הפתולוגי pT4 הוא גרוע משמעותית מזה ב pT3 (8th UICC/AJCC)1. עם סרטן קיבה, סיווג של הגידול העיקרי (pT) בדרך כלל תלוי בעומק של הפלישה הגידול2. השלב הפתולוגי pT3 סרטן הקיבה מוגדר כמו הפולשים הסרטן דרך המוסקולאריס קינא לתוך רקמות subserosal, בעוד סרטן הקיבה pT4 מוגדר כמו סרטן חודר אל פני השטח של צפק הקרביים. הימצאות של משטח הצפק הינו המפתח להבחנה בין שני השלבים2. עם זאת, מכיוון ששכבת התא mesothelial הצפק היא רזה מאוד, זה יכול להיות ניזוק במהלך הניתוח, טיפול פוסט-פעיל, וקיבוע3. יתר על כן, הקשורות לגידול שינויים דלקתיים פיברוזיס יכול להזיק אנטומיה נורמלית של צפק, מה שהופך את זה קשה מאוד לשפוט את הפלישה משטח הצפק באמצעות רק H & E צביעת4. שיטות אבחון העזר הנוכחיות, כגון ציטולוגיה ואימונוהיסטוכימיה, הן בעלות אבחון מוגבל של5,6 מכיוון שהן מזויפות, או שיש להן עלויות נמוכות.
קרום serosal כולל את צפק, pleura, ואת קרום הלב, והוא מורכב מmesothelium, קרום המרתף, ו-sub-mesothelial שכבה7. אחת התכונות היסטולוגית נפוצות של קרום serosal היא הנוכחות של לאמנה אלסטי בשכבת sub-mesothelial, בסמוך mesothelial תאים8,9. לאמה אלסטי יש יכולת אנטי מזיק חזק והוא יכול לשמש סמן אלטרנטיבי התחזיות כאשר התאים הmesothelial נהרסים על ידי דלקת חמורה הקשורות לגידול או פיברוזיס3. לאמנה אלסטי בעיקר כוללת אלסטין ומיקרופיבריל10, אשר ניתן לדמיין על ידי כתמים אלסטיים. הסיבה העיקרית מאחורי השימוש של הכתמים האלסטיים היא כי האלסטין יוצר קשר מימן עם הקבוצה פנופילית של ריסיניול בתמיסה אלסטין, גרימת סיבים אלסטיים להיות מוכתם כחול-שחור. לאחר Van gieson (VG) מנוגדים כתמים, סיבי קולגן יכול להיות מוכתם סיבי אדום ושריר ותאי דם אדומים יכול להיות צהוב מוכתם8,11,12,13.
המהדורה השמינית של ההיערכות tnm של סרטן הריאות מגדיר הפלישה הקרביים פלאורלי (T2) כפלישה הגידול מעבר לטרף אלסטי או פלישה על פני השטח של pleura הקרביים2. מחקרים על סרטן המעי הגס הראו כי הפלישה לאמינה אלסטי בסרטן המעי הגס pT3 עשוי להיות הסיבה לתחזיות המסכן. המחלה של 5 שנים ללא שיעור ההישרדות הכוללת של סרטן המעי הגס גם הוכחו להיות כמו pT4a13,14,15. בהתבסס על המחקרים הקודמים שלנו על כתמים אלסטיים, הפלישה לאמנה אלסטי נמצא יש השפעה שלילית משמעותית על הפרוגנוזה של סרטן קיבה pT3 וצריך להיות מטופלים באותו אופן כמו סרטן קיבה pT4a12. מכאן, זו שיטה פשוטה וחסכונית יכול לעזור למנוע חוסר ודאות בתוצאות שהתקבלו באמצעות כתמים H & E, ומגבלות נפוצות אחרות הקשורות לשיטות אחרות לאבחון עזר, כולל ציטולוגיה ואימונוהיסטוכימיה, בין אחרים. שיטה זו ניתן להשתמש ביעילות כדי לאבחן פלישות הקרקע הצפק של סרטן העיכול, במיוחד במקרים מסוימים רב-משמעיים. זה נוח מאז הכתם H & E וכתמים אחרים בדרך כלל להקשות לזהות פלישות כאלה. שיטה זו גם מבטיחה מהימנות של תוצאות מכיוון שהיא סלקטיבית מאוד, במיוחד לסיבים אלסטיים. כאן, אנו מבצעים כתמים אלסטיים כדי לקבוע אם התאים הסרטניים פלשו לאמינה אלסטי בסרטן קיבה pT3N0M012.
שיטה זו משמשת לזיהוי סיבים אלסטיים ברקמות על מקטעים של formalin-קבוע, פרפין, וניתן להשתמש בהם גם עבור מקטעים קפואים. כאן, אנו בוחרים פרפין-מקטעים מוטבעים עבור התחזוקה הטובה ביותר של מורפולוגיה תאית ורקמות. כל השלבים בפרוטוקול זה מתקיימים בטמפרטורת החדר. ערכת כתמים מסחרית הכוללת הפתרון אשלגן הפרמנגנט, פתרון חומצה אוקסלית, פתרון אלסטין, והפתרון של ואן גיסון משמש במחקר המוצג.
Protocol
Representative Results
Discussion
שיטה זו המוצעת כאן מספקת גישה מדויקת לזיהוי האלסטית הגמישה של subserosal. השיטה יכולה לשמש כדי להעריך אם התאים הסרטניים פלשו לאמה אלסטי בסרטן קיבה pT3N0M012. גומי אלסטי הוא אדמדם בסעיפים H & E-ויטראז ‘, אשר לא ניתן להבדיל בקלות מסיבי קולגן, ושיטות אחרות אבחון עזר נוסף, כגון ציטולוגיה ו אימ?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
המחברים מודים לתמיכה בחלק מן הקרן הלאומית למדע הטבע (NO. 81401902 ו-NO. 81501992) וקרן הונאן למדעי הטבע (NO 2017SK2134, NO. 2018JJ2238). כתב היד נכתב על ידי גואנג ליי. הניסוי כולו מבוצע על ידי גואנג-ליי והיאן יאנג. המחברים מודים לעזרתם של הפתולוגים ושל הבחורים העוקבים אחר נתוני המטופלים.
Materials
| Elastin-Van Gieson staining kit | Baso | BA4083B | Used for staining of elastic fibers, collagen fibers and myofibers |
| Permount TM Mounting Medium | MXB Biotechnologies | DAB-0033 | Used for mounting |
| Ethanol | LMAI Bio | LM64-17-5 | 100% |
| Xylene | LMAI Bio | LX820585 |
References
- Jiang, C. G., et al. Clinicopathologic characteristics and prognosis of gastric cancer invading the subserosa. Journal of Surgical Oncology. 102 (7), 737-741 (2010).
- Amin, M. B., et al. . AJCC Cancer Staging Manual. 8th ed. , (2017).
- Kojima, M., et al. Elastic laminal invasion in colon cancer: diagnostic utility and histological features. Frontiers in Oncology. 2, 179 (2012).
- Ludeman, L., Shepherd, N. A. Serosal involvement7 in gastrointestinal cancer: its assessment and significance. Histopathology. 47 (2), 123-131 (2005).
- Shepherd, N. A., Baxter, K. J., Love, S. B. The prognostic importance of peritoneal involvement in colonic cancer: a prospective evaluation. Gastroenterology. 112 (4), 1096-1102 (1997).
- Liang, W. Y. Retrospective evaluation of elastic stain in the assessment of serosal invasion of pT3N0 colorectal cancers. American Journal of Surgical Pathology. 37 (10), 1565-1570 (2013).
- Carter, D., True, L., Otis, C. N., Mills, S. E. Serosal membranes. Histology for Pathologists. 3rd ed. , 547-562 (2007).
- Knudsen, P. J. The peritoneal elastic lamina. Journal of Anatomy. 177, 41-46 (1991).
- Shepherd, N. A., Baxter, K. J., Love, S. B. Influence of local peritoneal involvement on pelvic recurrence and prognosis in rectal cancer. Journal of Clinical Pathology. 48 (9), 849-855 (1995).
- Uitto, J., Li, Q., Urban, Z. The complexity of elastic fibre biogenesis in the skin–a perspective to the clinical heterogeneity of cutis laxa. Experimental Dermatology. 22 (2), 88-92 (2013).
- Kazlouskaya, V., et al. The utility of elastic Verhoeff-Van Gieson staining in dermatopathology. Journal of Cutaneous Pathology. 40 (2), 211-225 (2013).
- Lei, G., et al. Elastic staining-a rejuvenated method to reassess prognosis and serosal invasion in patients with pT3N0M0 gastric cancer. Human Pathology. 65, 79-84 (2017).
- Hernández-Morera, P., Travieso-González, C. M., Castaño-González, I., Mompeó-Corredera, B., Ortega-Santana, F. Segmentation of elastic fibres in images of vessel wall sections stained with Weigert’s resorcin-fuchsin. Computer Methods and Programs in Biomedicine. 142, 43-54 (2017).
- Kojima, M., Nakajima, K., Ishii, G., Saito, N., Ochiai, A. Peritoneal elastic laminal invasion of colorectal cancer: the diagnostic utility and clinicopathologic relationship. American Journal of Surgical Pathology. 34 (9), 1351-1360 (2010).
- Nakanishi, Y., et al. Reappraisal of Serosal Invasion in Patients With T3 Colorectal Cancer by Elastic Stain. ARCHIVES OF PATHOLOGY & LABORATORY MEDICINE. 140 (1), 81-85 (2016).
- Grin, A., et al. Peritoneal elastic lamina invasion: limitations in its use as a prognostic marker in stage II colorectal cancer. Human Pathology. 44 (12), 2696-2705 (2013).
- Stewart, C. J., Brennan, B. A., Crook, M. L., Russell, P. Value of elastin staining in the assessment of peritoneal implants associated with ovarian serous borderline tumours. Histopathology. 51 (3), 313-321 (2007).
- Kojima, M., et al. Pathological diagnostic criterion of blood and lymphatic vessel invasion in colorectal cancer: a framework for developing an objective pathological diagnostic system using the Delphi method, from the Pathology Working Group of the Japanese Society for Cancer of the Colon and Rectum. Journal of Clinical Pathology. 66 (7), 551-558 (2013).
- Elston, C. A., Kazlouskaya, V., Elston, D. M. Elastic staining versus. fluorescent and polarized microscopy in the diagnosis of alopecia. Journal of the American Academy of Dermatology. 69 (2), 288-293 (2013).
- Vos, A., et al. Predominance of Nonatherosclerotic Internal Elastic Lamina Calcification in the Intracranial Internal Carotid Artery. Stroke. 47 (1), 221-223 (2016).
