pT3N0M0胃癌組織のパラフィン埋め込みスライド上の弾性染色
Summary
ここでは、ホルマリン固定、パラフィン埋め込みセクション上のpT3N0M0胃癌組織における弾性繊維を同定するための弾性染色のプロトコルを提示する。続いて、腫瘍細胞が弾性ラミナを越えて侵入するかどうかを決定する方法について説明する。
Abstract
通常、下中皮層に位置する弾性層は、中皮細胞に隣接し、ヘマトキシリンおよびエオシン(H&E)染色に対して両生性であるが、弾性染色を通じて可視化することができる。弾性染色の重要な利点の1つは、腫瘍細胞が弾性ラミナを越えて侵入したかどうかを容易に判断できることです。これは、腸内炎上の侵襲の程度を調べるのに役立ち、それによって消化管癌におけるpT3およびpT4段階を区別する。本研究では、ホルマリン固定パラフィン埋め込みpT3N0M0胃癌組織部における弾性繊維を同定するプロトコルを提示する。スライドに固定された5μmパラフィンセクションを準備し、すべてのスライドが染色手順中に脱パラフィン化および水分補給されます。その後、すべてのセクションは過マンガン酸カリウムによって酸化され、シュウ酸によって漂白され、弾性染色によって染色され、ヴァン・ギーソンによって逆染色される。最後に、染色の効果を調べます。弾性ラミナは青黒色に染まり、コラーゲン繊維は赤色に染まり、癌細胞は黄色の様々な色合いで染色されます。また、癌細胞と弾性ラミナとの位置関係を決定するために用いられる方法についても詳しく述べる。この方法は、弾性繊維と本物の結果のための優れた選択性のために、消化管癌における腹膜表面の侵入の同定に、シンプルで低コストで広く適用可能です。
Introduction
腫瘍、ノード、および転移(TNM)癌ステージングシステムに起因して、病理学期pT4における胃癌の予後はpT3(第8UICC/AJCC)1よりも有意に悪化している。胃癌では、原発性腫瘍(pT)の分類は、通常、腫瘍侵来2の深さに依存する。病理学的段階pT3胃癌は、筋肉のプロプリアを介して皮下組織に侵入する癌として定義され、一方、pT4胃癌は、内臓頭膜の表面に浸透する癌として定義される。両座面侵襲性の存在は、2つの段階2を区別するための鍵である。しかし、間膜中皮細胞層は非常に薄いため、手術、術後治療、および固定3の間に損傷を受ける可能性がある。さらに、腫瘍関連の炎症性変化および線維症は、両腸骨の正常な解剖学を損傷する可能性があり、H&E染色4のみを用いて腸膜表面の侵来を正確に判断することは非常に困難である。細胞学や免疫組織化学などの現在の補助診断方法は、偽陽性であるか、または低い費用対効果を有するため、限られた診断値5、6である。
血清膜は、胸膜、胸膜、および心膜を含み、中皮、基板膜、および中皮下層7から構成される。血清膜の一般的な組織学的特徴の1つは、中皮細胞8,9に隣接する中皮層中皮中層における弾性層の存在である。弾性ラミナは強い抗損傷能力を有し、中皮細胞が重度の腫瘍関連炎症または線維症3によって破壊された場合、代替予後マーカーとして役立つことができる。弾性ラミナは、主にエラスチンおよびマイクロフィブリル10からなり、弾性染色によって可視化することができる。弾性染色の使用の主な理由は、エラスチンがエラスチン溶液中のレソルシノールのフェノール群と水素結合を形成し、弾性繊維が青黒色に染色されることである。ヴァン・ギーソン(VG)対比染色後、コラーゲン繊維は赤色および筋線維および赤血球を染色することができ、黄色8、11、12、13を染色することができる。
肺癌のTNMステージングの第8版は、内膜胸膜侵開(T2)を弾性ラミナを越えた腫瘍の侵入または内臓胸膜2の表面への侵入として定義する。大腸癌に関する研究は、pT3大腸癌における弾性ラミナ侵食が予後不良の原因である可能性があることを示している。大腸癌の5年間の無病および全体的な生存率はまたpT4a13、14、15のようなものであることが証明されている。弾性染色に関する我々の以前の研究に基づいて、弾性ラミナ侵食はpT3胃癌の予後に有意な悪影響を及ぼすことが判明しており、pT4a胃癌12と同様に治療されるべきである。したがって、このシンプルで費用対効果の高い方法は、H&E染色によって得られた結果の不確実性を排除し、細胞学や免疫組織化学を含む他の補助的な診断方法に関連する他の一般的な制限を排除するのに役立ちます。他。この方法は、特にいくつかのあいまいな場合に、消化管癌の根膜表面の侵入を診断するために効率的に使用することができる。H&Eの汚れやその他の汚れが、通常、このような侵入を識別することが困難にするので便利です。この方法はまた、特に弾性繊維に対して非常に選択的であるため、結果の信頼性を保証する。ここでは、pT3N0M0胃癌12において腫瘍細胞が弾性ラミナに侵入したかどうかを判定するために弾性染色を行う。
この方法は、ホルマリン固定、パラフィン埋め込みセクション上の組織内の弾性繊維を識別するために使用され、同様に凍結セクションに使用することができます。ここでは、細胞および組織形態の最高の維持のためのパラフィン埋め込みセクションを選択します。このプロトコルのすべてのステップは室温で行われます。過マンガン酸カリウム溶液、シュウ酸溶液、エラスチン溶液、およびヴァンギーソンの溶液を含む市販の染色キットを提示された研究で使用する。
Protocol
Representative Results
Discussion
ここで提案されるこの方法は、皮下弾性ラミナを同定するための正確なアプローチを提供する。この方法は、腫瘍細胞がpT3N0M0胃癌12において弾性ラミナに侵入したかどうかを評価するために使用することができる。弾性ラミナは、コラーゲン繊維と容易に区別できないH&E染色部で赤みを帯びており、細胞学や免疫組織化学などの既存の補助診断方法も、限られた診断値を発?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者らは、国立自然科学財団(NO.81401902およびNO.81501992)と湖南自然科学財団(NO.2017SK2134、NO.2018JJ2238)からの支援に感謝しています。原稿はグアン・レイによって書かれています。全体の実験は、グアンレイとハイヤンヤンによって行われます。著者らは、病理学者と患者のデータをフォローアップする仲間の支援に感謝します。
Materials
| Elastin-Van Gieson staining kit | Baso | BA4083B | Used for staining of elastic fibers, collagen fibers and myofibers |
| Permount TM Mounting Medium | MXB Biotechnologies | DAB-0033 | Used for mounting |
| Ethanol | LMAI Bio | LM64-17-5 | 100% |
| Xylene | LMAI Bio | LX820585 |
References
- Jiang, C. G., et al. Clinicopathologic characteristics and prognosis of gastric cancer invading the subserosa. Journal of Surgical Oncology. 102 (7), 737-741 (2010).
- Amin, M. B., et al. . AJCC Cancer Staging Manual. 8th ed. , (2017).
- Kojima, M., et al. Elastic laminal invasion in colon cancer: diagnostic utility and histological features. Frontiers in Oncology. 2, 179 (2012).
- Ludeman, L., Shepherd, N. A. Serosal involvement7 in gastrointestinal cancer: its assessment and significance. Histopathology. 47 (2), 123-131 (2005).
- Shepherd, N. A., Baxter, K. J., Love, S. B. The prognostic importance of peritoneal involvement in colonic cancer: a prospective evaluation. Gastroenterology. 112 (4), 1096-1102 (1997).
- Liang, W. Y. Retrospective evaluation of elastic stain in the assessment of serosal invasion of pT3N0 colorectal cancers. American Journal of Surgical Pathology. 37 (10), 1565-1570 (2013).
- Carter, D., True, L., Otis, C. N., Mills, S. E. Serosal membranes. Histology for Pathologists. 3rd ed. , 547-562 (2007).
- Knudsen, P. J. The peritoneal elastic lamina. Journal of Anatomy. 177, 41-46 (1991).
- Shepherd, N. A., Baxter, K. J., Love, S. B. Influence of local peritoneal involvement on pelvic recurrence and prognosis in rectal cancer. Journal of Clinical Pathology. 48 (9), 849-855 (1995).
- Uitto, J., Li, Q., Urban, Z. The complexity of elastic fibre biogenesis in the skin–a perspective to the clinical heterogeneity of cutis laxa. Experimental Dermatology. 22 (2), 88-92 (2013).
- Kazlouskaya, V., et al. The utility of elastic Verhoeff-Van Gieson staining in dermatopathology. Journal of Cutaneous Pathology. 40 (2), 211-225 (2013).
- Lei, G., et al. Elastic staining-a rejuvenated method to reassess prognosis and serosal invasion in patients with pT3N0M0 gastric cancer. Human Pathology. 65, 79-84 (2017).
- Hernández-Morera, P., Travieso-González, C. M., Castaño-González, I., Mompeó-Corredera, B., Ortega-Santana, F. Segmentation of elastic fibres in images of vessel wall sections stained with Weigert’s resorcin-fuchsin. Computer Methods and Programs in Biomedicine. 142, 43-54 (2017).
- Kojima, M., Nakajima, K., Ishii, G., Saito, N., Ochiai, A. Peritoneal elastic laminal invasion of colorectal cancer: the diagnostic utility and clinicopathologic relationship. American Journal of Surgical Pathology. 34 (9), 1351-1360 (2010).
- Nakanishi, Y., et al. Reappraisal of Serosal Invasion in Patients With T3 Colorectal Cancer by Elastic Stain. ARCHIVES OF PATHOLOGY & LABORATORY MEDICINE. 140 (1), 81-85 (2016).
- Grin, A., et al. Peritoneal elastic lamina invasion: limitations in its use as a prognostic marker in stage II colorectal cancer. Human Pathology. 44 (12), 2696-2705 (2013).
- Stewart, C. J., Brennan, B. A., Crook, M. L., Russell, P. Value of elastin staining in the assessment of peritoneal implants associated with ovarian serous borderline tumours. Histopathology. 51 (3), 313-321 (2007).
- Kojima, M., et al. Pathological diagnostic criterion of blood and lymphatic vessel invasion in colorectal cancer: a framework for developing an objective pathological diagnostic system using the Delphi method, from the Pathology Working Group of the Japanese Society for Cancer of the Colon and Rectum. Journal of Clinical Pathology. 66 (7), 551-558 (2013).
- Elston, C. A., Kazlouskaya, V., Elston, D. M. Elastic staining versus. fluorescent and polarized microscopy in the diagnosis of alopecia. Journal of the American Academy of Dermatology. 69 (2), 288-293 (2013).
- Vos, A., et al. Predominance of Nonatherosclerotic Internal Elastic Lamina Calcification in the Intracranial Internal Carotid Artery. Stroke. 47 (1), 221-223 (2016).
