Subaigus Microhemorrhages cérébrales induites par l’Injection de lipopolysaccharides chez le rat

Summary

Nous présentons un protocole pour induire et détecter CMHs provoquées par injection de LPS chez le rat Sprague-Dawley, qui peut être utilisé à l’avenir des recherches sur la pathogénie de CMHs.

Abstract

Microhemorrhages cérébrales (CMHs) sont fréquentes chez les patients âgés et sont corrélées aux divers troubles neuropsychiatriques. L’étiologie de CMHs est complexe et neuro-inflammation est souvent observé comme une cooccurrence. Nous décrivons ici une subaiguë CMHs modèle de rat induit par l’injection du lipopolysaccharide (LPS), mais aussi une méthode de détection injection systémique LPS CMHs. est relativement simple, économique et rentable. Un avantage majeur de l’injection du LPS est sa stabilité pour induire une inflammation. CMHs provoquées par injection LPS pouvaient être décelées par l’observation brute, hématoxyline et éosine (HE) coloration, de Perl souillure Prusse, marquage double bleu Evans (EB) et une technologie d’imagerie (MRI-SWI) sensibilité à la résonance magnétique pondérée. Enfin, les autres méthodes d’élaboration de modèles animaux CMHs, y compris leurs avantages ou désavantages, sont également abordées dans ce rapport.

Introduction

Classiques microhemorrhages cérébrales (CMHs) Voir périvasculaires minuscules dépôts de produits de dégradation du sang comme l’hémosidérine de globules rouges dans le cerveau¹. Selon l’étude de Scan de Rotterdam, CMHs figurait dans près de 17,8 % des personnes âgées de 60 à 69 ans et 38,3 % dans ceux de plus de 80 ans². La prévalence de CMHs chez la personne âgée est relativement élevée, et une corrélation entre l’accumulation de CMHs et dysfonctionnement cognitif et neuropsychiatrique a été établi^3,4. Plusieurs modèles animaux de CMHs ont récemment été rapportés, y compris les modèles de rongeurs induites par le type IV collagénase stéréotaxiques injection⁵, APP transgéniques⁶, exposition de β-N-methylamino-L-alanine,⁷et⁸de l’hypertension, avec CMHs induites par l’inflammation systémique comme l’un des choix plus reconnus. Fisher et al. ⁹ d’abord utilisé LPS dérivés de Salmonella typhimurium pour élaborer un modèle de souris CMHs aiguë. Par la suite, le même groupe a signalé l’élaboration d’un modèle de souris CMHs subaiguë en utilisant la même approche².

LPS est considéré comme une stimulus inflammatoire normalisés par injection intrapéritonéale. Des études antérieures ont confirmé qu’injection LPS pourrait causer la neuro-inflammation telle que reflétée par les grandes quantités de cellules microgliales et activation des astrocytes dans les animaux modèles^2,10. En outre, une corrélation positive entre l’activation de l’activation de la neuro-inflammation et le nombre de CMHs a été établie^2,10. Se fondant sur ces études antérieures, nous a invités à élaborer un modèle de rat CMHs par injection intrapéritonéale de LPS.

Les progrès dans la détection technologies ont entraîné une augmentation du nombre de recherches sur CMHs. Le plus largement reconnu de méthodes de détection CMHs incluent la détection de globules rouges par l’hématoxyline et éosine (HE), coloration, détection de fer ferrique de bleu de Prusse coloration⁹, détection des Evans blue des dépôts par immunofluorescence (EB) imagerie et 7,0 Tesla imagerie par résonance magnétique-susceptibilité pondérée d’imagerie (MRI-SWI)¹⁰. La présente étude vise à développer une méthode de dépistage CMHs.

Protocol

Toutes les méthodes décrites ici ont été approuvés par l’utilisation Comité (ACUC) de l’hôpital général d’armée PLA et animalier. 1. les matériaux Préparation de l’injection de la LPS Ajouter 25 mL d’eau distillée à 25 mg de poudre de LPS dérivé de Salmonella typhimurium , à une concentration finale de 1 mg/mL. Stocker l’injection dans un tube stérile à 4 ° C.ATTENTION : LPS est toxique. Préparer une solution EB 2 % da…

Representative Results

CMHs peuvent être détectées en utilisant diverses approches. Les méthodes plus reconnus sont les suivants : (1) brut d’observation et d’évaluation de surfaces CMHs (illustré à la Figure 1, panneau supérieur) ; (2) il a une coloration pour la détection des culots globulaires (illustré à la Figure 2 a, panneau supérieur) ou prussien coloration ferrique détection dérivé de la lyse des globules rouges (<strong cl…

Discussion

Études de recherche sur CMHs ont augmenté au cours des dernières années. Toutefois, le mécanisme de CMHs reste peu clair, ce qui incite les chercheurs à établir des modèles animaux qui simulent cette condition particulière. Par exemple, Hoffmann et al. mis au point un modèle de souris CMHs induite par l’hypoxie qui montre que CMHs sont causées par l’hypoxie et la perturbation de l’autorégulation cérébrovasculaire¹². Reuter et al. ⁵ a é…

Materials

LPS	Sigma-Aldrich	L-2630	for inflammation induction
EB	Sigma-aldrich	E2129	for EB leakage detection
DAPI dying solution	Servicbio	G1012	count medium for IF
Perl’s Prussian staining	Solarbio	G1424	Kit for Prussian staining
HE staining	Solarbio	G1120	Kit for HE staining
chloral hydrate	Sigma-Aldrich	47335U	For anesthesia
phosphate buffer saline (PBS)	Solarbio	P1022	a kind of buffer solution commonly used in experiment
0.9% saline solution	Hainan DonglianChangfu Pharmaceutical Co., Ltd., China		solution for perfusion
paraformaldehyde	Sigma-Aldrich	158127	a kind of solution commonly used for fixation
20% sucrose solution	Solarbio	G2461	a kind of solution commonly used for fixation
30% sucrose solution	Solarbio	G2460	a kind of solution commonly used for fixation
vet ointment	Solcoseryl eye gel, Bacel, Switzerland		for rat's eyes protection