아 급성 대뇌 Microhemorrhages 쥐에서 Lipopolysaccharide 주입에 의해 유도 된

Summary

선물이 유도 하 고 탐지 LPS 주입 수 있습니다 Sprague-Dawley 쥐에 의해 발생 하는 CMHs CMHs의 병 인에 대 한 연구 조사 미래에 활용 하는 프로토콜.

Abstract

대뇌 microhemorrhages (CMHs) 노인된 환자에서 일반적 이며 다양 한 정신병 무질서에 상관. CMHs의 병 인은 복잡 한, 그리고 neuroinflammation 동시 발생으로 자주 관찰 됩니다. 여기, 우리가 설명 하위 급성 lipopolysaccharide (LPS) 주입, 조직 CMHs. LPS 주입을 탐지 하기 위한 방법에 의해 유도 된 CMHs 쥐 모델은 상대적으로 경제적, 간단 하 고 비용 효율적인. LPS 주입의 주요 장점 중 하나는 염증을 유발 하는 안정성입니다. CMHs LPS 주입으로 인 한 총 관찰, 되며 (그) 오신 얼룩, Perl의 프러시안 얼룩, 에반스 블루 (EB) 더블 라벨 및 자기 공명 영상-민감성 가중치 이미징 (MRI-SWI) 기술 검출 될 수 있었다. 마지막으로, 그들의 이점 및 단점를 포함 하 여 CMHs 동물 모델 개발의 다른 방법 또한이 보고서에 설명 되어 있습니다.

Introduction

클래식 대뇌 microhemorrhages (CMHs) 뇌¹적혈구에서 작은 혈관 주위 예금 hemosiderin 같은 혈액 저하 제품의를 참조 하십시오. 로테르 담 스캔 연구, CMHs 60-69 년 세의 거의 17.8%와 80 년²에 그들에 38.3%에 찾아낼 수 있었다. 노인에서 CMHs의 보급은 상대적으로 높은, 그리고 CMHs의 축적과 인지 및 정신병 장애 사이의 상관 관계 설립된^3,4되었습니다. 여러 동물 모델 CMHs의 최근 보고 된, 유형 IV 콜라 stereotaxic 주입⁵, APP 유전자 변형⁶, β-N-methylamino-L-알라닌 노출⁷, 및⁸, 고혈압 유발 설치류 모델을 포함 한 와 함께 가장 잘 허용된 선택의 하나로 서 조직의 염증에 의해 유도 된 CMHs. 피셔 외. ⁹ 처음 급성 CMHs 마우스 모델을 개발 살 모 넬 라 typhimurium 에서 파생 된 LPS를 사용. 그 후, 같은 그룹 같은 방법을²를 사용 하 여 하위 급성 CMHs 마우스 모델의 개발을 보도 했다.

LPS는 복 주입을 통해 표준화 된 염증 성 자극으로 간주 됩니다. 이전 연구는 많은 양의 microglia 반영 LPS 주입 neuroinflammation 일으킬 수 및 동물에 사이토 활성화 모델^2,10확인 했습니다. 또한, neuroinflammation 활성화의 활성화 및 CMHs의 수 사이 긍정적인 상관 관계가 설립된^2,10되었습니다. 이러한 이전 연구를 바탕으로, 우리 있었다 하 라는 메시지가 CMHs 쥐 모델 개발 LPS의 복 주사.

검색 기술 CMHs에 대 한 연구 조사에의 증가 귀착되 었 이동 합니다. 가장 널리 인정 hematoxylin와 얼룩, 프러시안 블루⁹, 착 색 제 2 철 철 감지 (그는) 오신 붉은 혈액 세포의 탐지를 포함 하는 검색 하는 CMHs 에반스의 블루 면역 형광에 의해 증 착 (EB) 이미징, 그리고 7.0 테슬라 자기 공명 영상-민감성 가중치 이미징 (MRI-SWI)¹⁰. 현재 연구의 CMHs에 대 한 심사 방법을 개발 하는 것을 목표로.

Protocol

여기에 설명 된 모든 메서드는 동물 관리 및 사용 위원회 (ACUC) PLA 육군 종합 병원에 의해 승인 되었습니다. 1입니다. 자료 LPS 주입의 준비 LPS 분말 1 mg/mL의 최종 농도에 S. typhimurium 에서 파생 된의 25 mg을 증류수 25 mL를 추가 합니다. 저장소 4 ° c.에 무 균 튜브에 주입주의: LPS 독성이 있다. EB 주입 작업 농도에서 계속 정상적인 0.9% 소금물에 2 솔?…

Representative Results

CMHs는 다양 한 방법을 사용 하 여 검색할 수 있습니다. 가장 잘 받아들여 메서드는 다음과 같습니다: (1) 총 관찰 및 평가의 표면 CMHs ( 그림 1, 위쪽 패널에에서 표시 된); (2) 그는 적혈구 ( 그림 2A에 표시 된, 상단 패널) 또는 프러시안 얼룩 검출 제 2 철 철의 검출에 대 한 얼룩 적혈구 (그림 2A, 하단 패널);의 ?…

Discussion

CMHs에 대 한 조사 연구는 지난 몇 년 동안에서 증가 하고있다. 그러나, CMHs의 메커니즘 불분명, 과학자 들이 특정 조건을 시뮬레이션 하는 동물 모델을 확립 하 라는 남아 있습니다. 예를 들어 호프만 외. 개발 hypoxia 유발 CMHs 마우스 모델 CMHs 저 산소 증 및 뇌혈관 autoregulation¹²의 중단에 의해 발생 보여줍니다. 로이터 외. ⁵ 보여준 그 대뇌 아 밀 로이?…

Materials

LPS	Sigma-Aldrich	L-2630	for inflammation induction
EB	Sigma-aldrich	E2129	for EB leakage detection
DAPI dying solution	Servicbio	G1012	count medium for IF
Perl’s Prussian staining	Solarbio	G1424	Kit for Prussian staining
HE staining	Solarbio	G1120	Kit for HE staining
chloral hydrate	Sigma-Aldrich	47335U	For anesthesia
phosphate buffer saline (PBS)	Solarbio	P1022	a kind of buffer solution commonly used in experiment
0.9% saline solution	Hainan DonglianChangfu Pharmaceutical Co., Ltd., China		solution for perfusion
paraformaldehyde	Sigma-Aldrich	158127	a kind of solution commonly used for fixation
20% sucrose solution	Solarbio	G2461	a kind of solution commonly used for fixation
30% sucrose solution	Solarbio	G2460	a kind of solution commonly used for fixation
vet ointment	Solcoseryl eye gel, Bacel, Switzerland		for rat's eyes protection