Здесь описан протокол создания центральной эпителиальной абразивной раны роговицы у мыши с помощью трефина и тупой клюшки для гольфа. Эта модель заживления ран роговицы обладает высокой воспроизводимостью и в настоящее время используется для оценки скомпрометированного заживления ран роговицы в контексте заболеваний.
Роговица имеет решающее значение для зрения, составляя около двух третей преломляющей силы глаза. Решающее значение для роли роговицы в видении имеет ее прозрачность. Однако из-за своего внешнего положения роговица очень восприимчива к широкому спектру травм, которые могут привести к потере прозрачности роговицы и возможной слепоте. Эффективное заживление ран роговицы в ответ на эти травмы имеет решающее значение для поддержания гомеостаза роговицы и сохранения прозрачности роговицы и преломляющей способности. В случаях скомпрометированного заживления раны роговицы роговица становится уязвимой для инфекций, изъязвлений и рубцевания. Учитывая фундаментальную важность заживления ран роговицы для сохранения прозрачности и зрения роговицы, лучшее понимание нормального процесса заживления ран роговицы является необходимым условием для понимания нарушения заживления ран роговицы, связанного с инфекцией и болезнями. Для достижения этой цели мышиные модели ранения роговицы оказались полезными для дальнейшего понимания механизмов заживления ран роговицы, работающих в нормальных физиологических условиях. Здесь описан протокол создания центрального эпителия роговицы у мыши с помощью трефина и тупого клюшки для гольфа. В этой модели круглый трефин диаметром 2 мм, центрированный над роговицей, используется для разграничения области раны. Клюшка для гольфа используется с осторожностью для дебриции эпителия и создания круговой раны, не повреждая эпителиальную базальную мембрану роговицы. Результирующая воспалительная реакция протекает как хорошо охарактеризованный каскад клеточных и молекулярных событий, которые имеют решающее значение для эффективного заживления ран. Эта простая модель заживления ран роговицы обладает высокой воспроизводимостью и хорошо публикуется и в настоящее время используется для оценки скомпрометированного заживления ран роговицы в контексте заболевания.
Роговица представляет собой прозрачную переднюю треть глаза. Роговица выполняет несколько функций, включая защиту внутренних структур глаза и формирование структурного барьера, который защищает глаз от инфекций1. Что еще более важно, роговица имеет решающее значение для зрения, обеспечивая около двух третей преломляющей силы глаза 2,3. Решающее значение для роли роговицы в видении имеет ее прозрачность. Однако из-за своего внешнего положения роговица ежедневно подвергается широкому спектру травм, которые могут привести к нарушению ее барьерной функции, потере прозрачности и возможной слепоте. Потеря прозрачности роговицы является основной причиной нарушения зрения во всем мире 4,5. Ссадины роговицы являются распространенной причиной посещений отделения неотложной помощи (ER), на которые приходится половина случаев, связанных с глазами, представленных в ER6. По оценкам, более 1 миллиона человек ежегодно страдают от травм глаз в Соединенных Штатах7. Эффективное заживление ран роговицы в ответ на эти травмы имеет решающее значение для поддержания гомеостаза роговицы и сохранения ее прозрачности и преломляющих способностей. В случае скомпрометированного заживления раны роговицы роговица становится уязвимой для инфекций, изъязвлений и рубцевания 8,9. Кроме того, растущая популярность рефракционных операций ставит уникальную травматическую проблему на роговицу10. Учитывая фундаментальную важность заживления ран роговицы для сохранения прозрачности и зрения роговицы, лучшее понимание нормального процесса заживления ран роговицы является необходимым условием для понимания нарушения заживления ран роговицы, связанного с инфекцией и болезнями.
С этой целью было разработано несколько животных моделей заживления ран роговицы 11,12,13,14,15. Мышиные модели заживления ран роговицы оказались полезными в дальнейшем понимании механизмов заживления ран роговицы, работающих в нормальных физиологических условиях. Различные типы ран роговицы были использованы при изучении заживления ран роговицы, каждый из которых подходит для изучения различных аспектов процесса заживления ран. Наиболее распространенными типами моделей ран, используемых в исследованиях заживления ран роговицы, являются механические и химические модели ран. Химические раны роговицы, в основном связанные с созданием щелочных ожогов на роговице, полезны для изучения язв роговицы, помутнения и неоваскуляризации13. Механические раны роговицы включают санацию (истирание) ран и кератэктомию ран 14,15,16. Неповрежденная или нарушенная эпителиальная базальная мембрана роговицы определяет санацию и кератэктомию ран соответственно. В санационных ранах эпителиальная базальная мембрана остается неповрежденной, в то время как при кератэктомии раны базальная мембрана нарушается с проникновением в основном в переднюю строму. Раны санации наиболее полезны для изучения реэпителизации, пролиферации эпителиальных клеток, иммунного ответа и регенерации нервов после ранения роговицы. Раны кератэктомии, с другой стороны, наиболее полезны для изучения рубцевания роговицы14,15.
Здесь описан протокол создания центральной эпителиальной абразивной раны роговицы у мыши с помощью трефина и тупой клюшки для гольфа. Эта простая модель заживления ран роговицы обладает высокой воспроизводимостью и хорошо публикуется и в настоящее время используется для оценки скомпрометированного заживления ран роговицы в контексте заболевания17.
Целью данной работы по методам было описание протокола создания центральной эпителиальной абразивной раны роговицы у мыши с использованием трефина и тупой клюшки для гольфа. Эта мышиная модель была использована для изучения воспаления роговицы и его вклада в заживление ран. Данный ти…
The authors have nothing to disclose.
Финансирование: При поддержке: NIH EY018239 (A.R.B., C.W.S. и R.E.R.), P30EY007551 (A.R.B.) и Sigma Xi Grant in Aid of Research (P.K.A.). Содержание является исключительной ответственностью авторов и не представляет официальную точку зрения Национальных институтов здравоохранения или Sigma Xi.
Anti-CD31 antibody | BD Bioscience, Pharmingen | 550274 | |
Anti-CD41 antibody | BD Bioscience, Pharmingen | 553847 | |
Anti-Ly6G antibody | BD Bioscience, Pharmingen | 551459 | |
Bovine serum albumin (BSA) | ThermoFisher scientific | B14 | |
C57BL/6 mice | Jackson Laboratories | 664 | |
DAPI | Sigma Aldrich | D8417 | |
DeltaVision wide-field deconvolution fluorescence microscope | GE Life Sciences | ||
Dissecting microscope | Leica microsystems | ||
Electronic Toploading Balances (Weighing scale) | Fisher Scientific | ||
Ethanol | ThermoFisher scientific | T038181000CS | |
Golf-club spud | Stephens instruments | S2-1135 | |
Iris curve scissors | Fisher Scientific | 31212 | |
Isoflurane | Patterson veterinary | 07-893-1389 | |
Ketamine | Patterson veterinary | 07-890-8598 | |
Phospate buffered saline (PBS) | ThermoFisher scientific | AM9624 | |
Sodium fluorescein salt | Sigma Aldrich | 46970 | |
Surgical blade (scapel blade) | Fine Science tools | 10022-00 | |
Trephine | Integra Miltex | 33-31 | |
TritonX -100 | Fisher Scientific | 50-295-34 | |
Forcep | Fine Science tools | 11923-13 | |
Xylazine | Patterson veterinary | 07-808-1947 |