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Article de méthode

Étude de l’immunité héréditaire dans un modèle d’infection à Microsporidia à Caenorhabditis elegans

2.3K vues

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DOI :

10.3791/63636

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6 avril 2022

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Dans cet article

Résumé

L’infection de Caenorhabditis elegans par le parasite microsporidien Nematocida parisii permet aux vers de produire une progéniture très résistante au même agent pathogène. C’est un exemple d’immunité héréditaire, un phénomène épigénétique mal compris. Le présent protocole décrit l’étude de l’immunité héréditaire dans un modèle de ver génétiquement traitable.

Résumé

L’immunité héréditaire décrit comment certains animaux peuvent transmettre la « mémoire » d’une infection antérieure à leur progéniture. Cela peut augmenter la résistance aux agents pathogènes dans leur progéniture et favoriser la survie. Bien que l’immunité héréditaire ait été rapportée chez de nombreux invertébrés, les mécanismes sous-jacents à ce phénomène épigénétique sont largement inconnus. L’infection de Caenorhabditis elegans par l’agent pathogène microsporidien naturel Nematocida parisii entraîne la production d’une progéniture robuste aux microsporidies. Le présent protocole décrit l’étude de l’immunité intergénérationnelle dans le modèle d’infection simple et génétiquement traitable de N. parisii -C. elegans . L’article actuel décrit les méthodes permettant d’infecter C. elegans et de générer une progéniture immuno-amorcée. Des méthodes sont également données pour mesurer la résistance à l’infection par microsporidies en colorant les microsporidies et en visualisant l’infection par microscopie. En particulier, l’immunité héréditaire empêche l’invasion des cellules hôtes par les microsporidies, et l’hybridation in situ par fluorescence (FISH) peut être utilisée pour quantifier les événements d’invasion. La quantité relative de spores de microsporidies produites dans la progéniture immuno-amorcée peut être quantifiée en colorant les spores avec un colorant liant la chitine. À ce jour, ces méthodes ont mis en lumière la cinétique et la spécificité pathogène de l’immunité héréditaire, ainsi que les mécanismes moléculaires qui la sous-tendent. Ces techniques, ainsi que les nombreux outils disponibles pour la recherche sur C. elegans , permettront d’importantes découvertes dans le domaine de l’immunité héréditaire.

Introduction

L’immunité héréditaire est un phénomène épigénétique par lequel l’exposition parentale à des agents pathogènes peut permettre la production d’une progéniture résistante aux infections. Ce type de mémoire immunitaire a été démontré chez de nombreux invertébrés qui manquent de système immunitaire adaptatif et peuvent protéger contre les maladies virales, bactériennes etfongiques 1. Bien que l’immunité héréditaire ait des implications importantes pour la compréhension de la santé et de l’évolution, les mécanismes moléculaires sous-jacents à cette protection sont largement inconnus. Cela s’explique en partie par le fait que bon nombre des animaux c....

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Protocole

La présente étude utilise la souche N2 bristol de type sauvage C. elegans cultivée à 21 °C.

1. Préparation des supports

  1. Préparer les médias M9 conformément au rapport précédent21,22.
  2. Préparer le milieu de croissance des nématodes (NGM) conformément au rapport précédent21,22. Versez 12 mL de NGM par plaque de 6 cm ou 30 mL par plaque de 10 cm.
  3. Préparer la souche OP50-1 d’Escherichia coli selon un rapport précédent23.
  4. Préparez le....

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Résultats

Dans la présente étude, les populations parentales de C. elegans (P0) ont été infectées au stade L1 par une faible dose de spores de N. parisii . Ces conditions d’infection sont généralement utilisées pour obtenir un nombre élevé de descendants F1 résistants aux microsporidies par blanchiment des parents. Les populations parentales infectées et les témoins non infectés ont été fixés à 72 HPI et colorés avec DY96 pour visualiser les embryons de vers et les spores de microsporidies (F.......

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Discussion

Le présent protocole décrit l’étude des microsporidies et de l’immunité héréditaire dans un modèle d’infection à N. parisii-C. elegans simple et génétiquement traitable.

La préparation des spores est un protocole intensif qui produit généralement suffisamment de spores pour 6 mois d’expériences, en fonction de la productivité24. Il est important de noter que l’infectiosité doit être déterminée pour chaque nouveau « lot » de spores avant de l’utiliser p.......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

Nous sommes reconnaissants à Winnie Zhao et Yin Chen Wan d’avoir fourni des commentaires utiles sur le manuscrit. Ces travaux ont été appuyés par le Conseil de recherches en sciences naturelles et en génie du Canada (subvention no 522691522691).

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Perles de zircone de 2,0 mmBiospec Products Inc.11079124ZX
Seringue de 10 mLFisher Scientific1482613
5 &mu ; SLSV025LSMicroscope
Zeisspourl’imagerie des vers colorés DY96 et FISH sur des lames de microscope
Axio Zoom V.16 Microscope à zoom stéréo à fluorescenceZeisspour l’imagerie en direct d’animaux transgéniques fluorescents afin de visualiser le
DPI Baked EdgeGARD Horizontal FlowBench Baker-
Disrupteur à billes, Genie SI-D238 Analog Disruptor Genie Cell Disruptor, 120 VGlobal IndustrialT9FB893150
Cell-VU slide, Millennium Sciences Cytomètres jetables pour numération des spermatozoïdesFisher ScientificDRM600
Direct Yellow 96Sigma-AldrichS472409-1G
EverBrite Medium de montage avec DAPIBiotium23001
EverBrite Milieu de montage sans DAPIBiotium23002
Fidji/ImageJ ImageJhttps://imagej.net/software/fiji/downloads
Rotor mécaniqueThermo Sceintific415110 / 1834090806873Utilisé pour faire tourner des tubes d’embryons blanchis pour l’éclosion pendant la nuit
Sonde MicroB FISHBiosearch Technologies Inc.-Syntheized avec une modification Quasar 570 (Cy3) 5' et HPLC purifié, CTCTCGGCACTCCTTCCTG
N2Type sauvage, souche BristolSouche par défautCaenorhabditis Genetics Center (CGC)
Dodécylsulfate de sodium (SDS)Sigma-AldrichL3771-100G
Solution d’hydroxyde de sodium (5 N)Fisher ChemicalFLSS256500
Solution d’hypochlorite de sodium (6 % )Fisher ChemicalSS290-1
Stemi 508 StéréomicroscopeZeiss-Pourl’entretien quotidien des vers et le comptage des vers L1 pour les configurations de test
Tween-20Sigma-AldrichP1379-100ML
Vectashield + A16BiolynxVECTH1500
fluorescent Clean

Références

  1. Tetreau, G., Dhinaut, J., Gourbal, B., Moret, Y. Trans-generational immune priming in invertebrates: current knowledge and future prospects. Frontiers in Immunology. 10, 1938(2019).
  2. Au, V., et al.

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Réimpressions et autorisations

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