Ligadura da Artéria Coronária Descendente Anterior para Pesquisa de Isquemia-Reperfusão: Aprimoramento do Modelo via Modificações Técnicas e Controle de Qualidade

Summary

Neste trabalho, apresentamos um protocolo com foco no controle de qualidade da ligadura da artéria coronária descendente anterior, modificando tecnicamente o procedimento tradicional em ratos para pesquisa de isquemia-reperfusão miocárdica aguda.

Abstract

A doença coronariana é a principal causa de morte no mundo. A cessação completa do fluxo sanguíneo nas artérias coronárias causa infarto agudo do miocárdio com supradesnivelamento do segmento ST (IAMCSST), resultando em choque cardiogênico e arritmia fatal, que estão associados a alta mortalidade. A intervenção coronária primária (ICP) para recanalização da artéria coronária melhora significativamente os desfechos do IAMCSST, mas os avanços obtidos na redução do tempo porta-balão não conseguiram reduzir a mortalidade hospitalar, sugerindo que estratégias terapêuticas adicionais são necessárias. A ligadura da artéria coronária descendente anterior (DA) em ratos é um modelo animal para pesquisa de IR miocárdica aguda comparável ao cenário clínico em que a recanalização coronariana rápida por ICP é usada para IAMCSST; no entanto, o IAMCSST induzido por ICP é uma operação tecnicamente desafiadora e complicada, associada a alta mortalidade e grande variação no tamanho do infarto. Identificamos a posição ideal para a ligadura da ADA, criamos um gadget para controlar uma alça de laço e apoiamos uma manobra cirúrgica modificada, reduzindo o dano tecidual, para estabelecer um protocolo de pesquisa de isquemia-reperfusão (RI) miocárdica aguda confiável e reprodutível para ratos. Trata-se de uma cirurgia sem sobrevida. Também propomos um método para validar a qualidade dos resultados dos estudos, que é uma etapa crítica para determinar a acurácia de análises bioquímicas subsequentes.

Introduction

A doença isquêmica do coração é uma das principais causas de morte no^mundo1,2. Além do controle dos fatores de risco modificáveis para prevenir o desenvolvimento da doença coronariana, estratégias terapêuticas são crucialmente necessárias para a síndrome coronariana^aguda3,4. Choque cardiogênico e arritmia fatal no infarto agudo do miocárdio com supradesnivelamento do segmento ST (IAMCSST) aumentam a probabilidade de mortalidade hospitalar 5,6,7,8. A intervenção coronária percutânea (ICP) primária é o tratamento de escolha para IAMCSST 9,10,11; entretanto, os efeitos terapêuticos têm teto quando o tempo porta-balão é de <90 min^12,13. Estratégias adicionais são necessárias para melhorar ainda mais os desfechos clínicos da doença 14,15,16,17,18,19.

Um experimento de isquemia-reperfusão (IR) miocárdica aguda envolvendo ligadura da artéria descendente anterior (DA) em ratos é um dos modelos animais comparáveis ao cenário clínico em que tempos curtos porta-balão são necessários para pacientes com IAMCSST para resgatar o coração de dano isquêmico. No entanto, o IAMCSST induzido por cirurgia em pequenos animais é frequentemente um desafio técnico, pois é uma operação complexa associada à alta mortalidade e alta variação no tamanho do infarto20,21,22,23,24. Para superar o desafio técnico, o presente estudo desenvolveu um modelo animal abrangente e eficaz em ratos (por serem maiores que camundongos) para estabelecer um protocolo confiável e reprodutível de pesquisa de RI miocárdica aguda por meio de modificação técnica. O protocolo proposto resulta em menos complicações cirúrgicas, menor dano tecidual e menor probabilidade de mortalidade durante a cirurgia. Além disso, foi utilizado um procedimento para medir o tamanho do infarto e a área de risco (RAA) e, assim, verificar a qualidade dos resultados do estudo. O protocolo proposto pode ser utilizado para investigar os processos fisiopatológicos do estresse agudo de IR miocárdica para desenvolver novas estratégias terapêuticas contra o dano.

Protocol

Todos os experimentos com animais foram conduzidos de acordo com o Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, publicado pelo National Institutes of Health dos EUA (publicação NIH no. 85-23, revisada em 1996). O protocolo do estudo foi aprovado e de acordo com as diretrizes do Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade Católica de Fu-Jen. 1. Preparo antes da cirurgia Preparo de bolas de algodão úmidas salinasColoque uma más…

Representative Results

Ao final da isquemia e reperfusão miocárdica, a qualidade da ligadura da DAE deve ser avaliada antes de análises bioquímicas ou moleculares adicionais. A suficiência da oclusão da DAE através da ligadura foi determinada injetando-se 1 mL de corante azul de Evan a 2% através do cateter venoso central. Em seguida, o miocárdio com perfusão coronariana foi corado de azul em relação à região não perfundida, que permaneceu vermelha (Figura 1A). A região …

Discussion

O protocolo proposto tem várias características distintas, como identificar a posição exata para a ligadura da ADA, criar um dispositivo para controlar uma alça de laço em uma única sutura e apoiar uma manobra cirúrgica modificada para reduzir o dano tecidual, permitindo que os pesquisadores liguem a LAD com precisão, segurança e consistência, bem como controlem o estado da alça de laço instantaneamente para pesquisa de IR miocárdica aguda.

A localização da ligadura da DA influ…

Materials

Evan’s blue	Sigma Aldrich	E2129
Forceps	Shinva
Pentobarbital	Sigma Aldrich	1507002
Scalpel blades	Shinva	s2646
Scalpel handles	Shinva
Silk sutures	SharpointTM	DC-2150N
Surgical needle	AnchorTM
Triphenyltetrazolium chloride (TTC) solution	Solarbio	T8170-1
Ventilator	Harvard Rodent Ventilator