Encyclopedia of Experiments: Biology
Un abonnement à JoVE est nécessaire pour afficher ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- קסנוגרפט הוא איבר או רקמה שנלקחו ממין אחד והושתלו למין אחר. או PDX, הוא מודל סרטני שבו רקמה מהגידול של המטופל מושתלת לחיה אימונודפית, כגון זחל זברה שמערכת החיסון שלו אינה מפותחת במלואה, כדי לחקור התקדמות הגידול או יעילות התרופה. ראשית, להרדים זחלי הפריה שלאחר 48 שעות בתמיסת טריקאין, ולהעביר זחל לצלחת הזרקה המכילה agarose עשה עם E3 בינוני.
לאחר מכן, לטעון את ההשעיה של תאי השתל החולה ולהעביר לתוך מחט microcapillary. תחת מיקרוסקופ להזריק את התאים לתוך שק החלמון של הזחל באמצעות מחט microcapillary. עכשיו, תרבות הזחלים מוזרק בתמיסת E3 המכיל גלוקוז ו L גלוטמין, אשר תומך בדרישות האנרגיה הגבוהות של תאים xenograft.
לטיפול תרופתי להעביר את הזחלים xenografted לצלחת היטב, לחלק את בארות לקבוצות בהתבסס על מספר ומינונים של תרכובות כי צריך להיבדק, ולהוסיף את התרכובות.
בפרוטוקול הבא, נלמד את התרופות gemcitabine ו navitoclax במודל zPDX של סרטן הלבלב.
- לאחר הרדמה זחלי זברה, להעביר אותם לתוך צלחת ההזרקה, אשר מלא E3. קח את 25 microliters של השעיית התא המעורב לתוך המחט microcapillary, ולהכניס את המחט לתוך המניפולטור microinjection. הגדר את לחץ ההזרקה ואת הזמן, ולהזריק 50 עד 80 תאים לתוך שק החלמון של 48 שעות לאחר הפריה זברה
להעביר את זחלי זברה קסנוגרפט פוסט לתוך 40 מיליליטר של פתרון לערבב ב 32 מעלות צלזיוס.
לטפל בקבוצת הביקורת עם E3 המכיל 0.1% DMSO, ולטפל בקבוצות האחרות עם gemcitabine ו / או navitoclax. דגירה כל הזחלים ב 32 מעלות צלזיוס במשך יומיים.
השתמש במיקרוסקופ פלואורסצנטי או קונפוקלי כדי לדמות את הזחלים מהתצוגה לרוחב. לאחר מכן, השתמש בתוכנת Image J ו- Graph Pad כדי לכמת את עוצמת האותות הפלואורסצנטיים האדומים והירוקים.
