Journal
/
Biologie
/
Мониторинг убиквитин-протеасомной активности в живых клетках с помощью Degron (DGN)-дестабилизировали зеленого флуоресцентного белка (GFP)-Reporter на основе белков
Journal JoVE
Biologie
Author Produced
Un abonnement à JoVE est nécessaire pour voir ce contenu.  Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
Journal JoVE Biologie
Monitoring of Ubiquitin-proteasome Activity in Living Cells Using a Degron (dgn)-destabilized Green Fluorescent Protein (GFP)-based Reporter Protein
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Мониторинг убиквитин-протеасомной активности в живых клетках с помощью Degron (DGN)-дестабилизировали зеленого флуоресцентного белка (GFP)-Reporter на основе белков

DOI:
10.3791/3327-v

•

10:25 min

•

November 10, 2012

•

, , , ,
1Molecular and Cell Biology,Institute for Biomedical Aging Research, 2Department of Gerontology and Geriatrics, Netherlands Consortium for Healthy Aging,Leiden University Medical Center

Chapitres

  • 00:00Titre
  • 01:21Virus Production
  • 04:11Titering of Virus
  • 06:13Transduction of Human Diploid Fibroblasts
  • 07:19FACS Experiments
  • 08:50Proteasomal Activity in vivo
  • 10:04Conclusion

Summary

Traduction automatique

Traduction automatique

Метод мониторинга убиквитин-протеасомной активности в живых клетках описано. Degron-дестабилизированный GFP-(GFP-DGN) и стабильный GFP-dgnFS гибридного белка создаются и преобразованных в ячейку с помощью лентивирусов вектор экспрессии. Этот метод позволяет генерировать стабильный GFP-dgn/GFP-dgnFS выражения клеточная линия, в которой убиквитин-протеасомной активности может быть легко оценить, используя эпифлуоресцентной или проточной цитометрии.

Tags

Ubiquitin-proteasome ActivityDegronGreen Fluorescent Protein (GFP)Reporter ProteinProteolysisIntracellular OrganelleAbnormal ProteinsMisfolded ProteinsDamaged ProteinsOxidized ProteinsProteasome MaintenanceCellular ProcessesStress ResponseCell Cycle RegulationCellular DifferentiationImmune System ResponseUbiquitin-proteasome System DysfunctionTumorsNeurodegenerative DiseasesCellular SenescenceOrganismal AgingPrimary CellsLentiviral Expression VectorsTransfection Efficiency

Article

Embed

AJOUTER À LA PLAYLIST

Usage Statistics

Vidéos Connexes

check_url/fr/3327?article_type=v

Окрашивание белков в гелях Кумасси G-250 без органических растворителей и уксусной кислоты
check_url/fr/3327?article_type=v

Использование GELFREE 8100 Фракционирование Система Молекулярный вес основе фракционирования с жидким этапе восстановления
check_url/fr/3327?article_type=v

Бимолекулярные флуоресценции комплементации (BiFC) Пробирной для белок-белковые взаимодействия в Лук ячеек с использованием генной пушки Helios
check_url/fr/3327?article_type=v

Фотообесцвечивания Анализы (FRAP и FLIP), чтобы измерить хроматина Динамика белков в живых эмбриональных стволовых клеток
check_url/fr/3327?article_type=v

В сочетании Анализы для мониторинга рефолдинг Белок в<em> Saccharomyces CEREVISIAE</em
check_url/fr/3327?article_type=v

Исследование белок-белковых взаимодействий в живых клетках с помощью биолюминесценции резонансный перенос энергии
check_url/fr/3327?article_type=v

миРНК Скрининг для идентификации Убиквитин и Убиквитин-подобной системе регуляторов биологических путей в культивируемых клетках млекопитающих
check_url/fr/3327?article_type=v

Репортер основе анализа роста для систематического анализа белка деградации
check_url/fr/3327?article_type=v

Генома белок-белковых Взаимодействие Скрининг белком-фрагментом комплементации анализа (РСА) в живых клетках
check_url/fr/3327?article_type=v

Зеленый флуоресцентный белок на основе Expression Скрининг мембранных белков в<em> Кишечная палочка</em

Read Article