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Fluorescencia cuantitativa en hibridación situ (FISH) e inmunofluorescencia (IF) de productos genéticos específicos en células infectadas por KSHV
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Immunologie et infection
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Journal JoVE Immunologie et infection
Quantitative Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) and Immunofluorescence (IF) of Specific Gene Products in KSHV-Infected Cells
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Fluorescencia cuantitativa en hibridación situ (FISH) e inmunofluorescencia (IF) de productos genéticos específicos en células infectadas por KSHV

DOI:
10.3791/59697-v

•

00:06 min

•

August 27, 2019

•

,
1Norfolk Academy, 2Department of Molecular Biophysics and Biochemistry, Howard Hughes Medical Institute,Yale School of Medicine

Chapitres

  • 00:04Titre
  • 00:28Cell Fixation, Immunofluorescence, and Hybridization, and Viral RNA Visualization
  • 04:48Results: Representative FISH and IF Kaposi s Sarcoma-Associated Herpesvirus (KSHV) Oligonucleotide Analyses
  • 05:52Conclusion

Summary

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Describimos un protocolo que utiliza la hibridación in situ por fluorescencia (FISH) para visualizar múltiples ARN herpesvirales dentro de células humanas infectadas lyéticamente, ya sea en suspensión o adherente. Este protocolo incluye la cuantificación de la fluorescencia produciendo una relación nucleocitotoplasmática y se puede extender para la visualización simultánea de proteínas huésped y virales con inmunofluorescencia (IF).

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Keywords: Quantitative FISHImmunofluorescenceKSHVHost-virus InteractionsViral Gene ProductsRNAProteinBiochemical AssaysCell CultureFixationPermeabilizationBlockingPrimary AntibodySecondary AntibodyFluorescent LabelingHybridizationOligonucleotidesDenaturation

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