Un abonnement à JoVE est nécessaire pour voir ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
Chapitres
- 00:05Introduction
- 01:08Cell Culture
- 02:33Cell Transfection
- 03:41Cell Lysis and Immunoprecipitation
- 07:40Results: Specific Polyubiquitylation of UXT-V2-HA Mediated by Fbxo7
- 09:06Conclusion
Мы предоставляем подробный протокол для анализа убиквитилирования конкретного субстрата и убиквитин-лигазы E3 в клетках млекопитающих. Клеточные линии HEK293T использовали для гиперэкспрессии белка, полиубиквитилированный субстрат очищали от клеточных лизатов иммунопреципитацией и разрешали в SDS-PAGE. Иммуноблоттинг использовался для визуализации этой посттрансляционной модификации.
Tags
Keyword Extraction:
Substrate UbiquitylationE3 LigaseMammalian Cell LysatesImmunoprecipitation AssayWestern BlotHuman DiseasesCancerNeurological DisordersE3 Ligase DysregulationHEK293T Cell LineDulbecco’s Modified Eagles MediumFetal Bovine SerumPenicillinStreptomycinL-glutamineTrypsin EDTAPolyethyleneimineOpti-MEM 1 Reduced Serum MediumTransient Transfections
