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Chapitres
- 00:05Introduction
- 01:08Cell Culture
- 02:33Cell Transfection
- 03:41Cell Lysis and Immunoprecipitation
- 07:40Results: Specific Polyubiquitylation of UXT-V2-HA Mediated by Fbxo7
- 09:06Conclusion
Proporcionamos un protocolo detallado para un ensayo de ubiquitilación de un sustrato específico y una ubiquitina ligasa E3 en células de mamíferos. Se utilizaron líneas celulares HEK293T para la sobreexpresión de proteínas, el sustrato poliubiquitilado se purificó a partir de lisados celulares por inmunoprecipitación y se resolvió en SDS-PAGE. Se utilizó immunoblotting para visualizar esta modificación post-traduccional.
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