המצאה של אלקטרודות Amperometric
Summary
פרוטוקול זה מתאר כיצד ליצור סיבים אלקטרודות פחמן. אלקטרודות משמשות לאחר מכן כדי לזהות שחרור קטכולאמינים מתוך שלפוחית עם amperometry סיבי פחמן.
Abstract
סיבים אלקטרודות פחמן הם קריטיים לצורך זיהוי של שחרור קטכולאמינים מתוך שלפוחית בתאי יחיד עבור מדידות amperometry. כאן, אנו מתארים את טכניקות הדרושה כדי לייצר רעש נמוך (<0.5 רש"פ) אלקטרודות. הטכניקות שונו מן התיאורים שפורסם על ידי חוקרים קודמים (1,2). אלקטרודות מבוצעים על ידי הכנת סיבי הפחמן משחילה אותם בנפרד לתוך הצינור בכל נימי באמצעות ואקום עם מסנן כדי לשאוב את סיב. בשלב הבא, צינור נימי עם סיבים נמשך חולץ על ידי אלקטרודה, יצירת שני חצאים, כל אחד עם קצה עדין הצביע. האלקטרודות הן טבול אפוקסי, חם נוזלי מעורבב עם hardener ליצור חותם אפוקסי זכוכית. לבסוף, האלקטרודות ממוקמות בתנור כדי לרפא את אפוקסי. טיפול זהיר של אלקטרודות הוא קריטי על מנת להבטיח כי הם עשויים בעקביות וללא נזק. פרוטוקול זה מראה כיצד לפברק וחותכים אלקטרודות amperometric הקלטה של תאים בודדים.
Protocol
Discussion
פרוטוקול זה מתאר כיצד ליצור חתך אלקטרודות amperometric. במהלך ההקלטות amperometric, אלקטרודה סיבי פחמן ממוקם מול פני השטח של תא הפרשה. פעילות Exocytotic הוא ציין כמו קוצים amperometric, אשר מציין הנוכחית אלקטרוכימיים הנגרמת על ידי העברת האלקטרונים לאחר חמצון catecholamines. בעזרת תרגול ביצוע חית?…
Acknowledgements
אנו מודים לד"ר אהרן פ פוקס באוניברסיטת שיקאגו, שעל המעבדה פרוטוקול זה תוכנן במקור, וויליאם רודן (אוניברסיטת סנט לואיס), להמשך הפיתוח של פרוטוקול.
אנו מודים לקרן וייטהול ואת הקרן הלאומית למדע על התמיכה.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Epoxy Hardener 1,3-phenylene-diamene flakes | Reagent | Sigma Aldrich | P23954-100G04 716AJ | Aliquots are stored in a dessicator and should not be exposed to light. |
| Carbon Fibers | Material | Goodfellow | C005725 | |
| Micro-Hematocrit Capillary Tubes | Material | Fisher | NC9836768 | |
| Epoxy Resin | Reagent | Miller-Stephenson | Epon Resin 828 | |
| Dissecting Microscope | Instrument | |||
| Electrode Puller | Instrument | Narishige Japan | PP-830 | 1st pull = 24.8 degrees C; 2nd pull = 62.7 degrees C |
| Oven | Instrument | set to 100 degrees F. | ||
| Hot plate | Instrument | set to 55 degrees C |
Riferimenti
- Mundorf, M. L., Wightman, R. M. Amperometry and cyclic voltammetry with carbon fiber microelectrodes at single cells. Curr Protocols in Neurosci. 6 (14), 1-6 (2002).
- Machado, D. J., Montesinos, M. S., Borges, R. Good practices in single-cell amperometry. Methods in Molec. Biol. 440, 297-313 (2008).
