蛍光その場でハイブリダイゼーション（FISH）プロトコル
Summary
このビデオの記事では、良質の蛍光を達成するために精液のサンプルを処理する方法を順を追って、説明します<em>その場で</em人間の精子で>ハイブリダイゼーション。得られた製剤は、臨床診断のコンテキストで異数スクリーニングに用いることができる。
Abstract
Aneuploidiesは、ヒトで最も頻繁に染色体異常です。これらの異常のほとんどは、両親のgametogenic過程で減数分裂のエラーに起因する。人間の男性では、これらのエラーは、子孫にこれらの異常を送信するリスクの増加を表す数値染色体異常を持つ精子の生産につながることができます。
このような理由から、精子の核のin situハイブリダイゼーション（FISH） の蛍光の技法は、広く臨床診断のコンテキストに組み込まプロトコルになっています。この練習では、遺伝的生殖アドバイスを求める患者の配偶子の数値染色体異常の頻度の推定値を提供します。
日付に、最も頻繁に精子のFISH分析に含まれる染色体は染色体X、Y、13、18および21です。
このビデオの記事は、順を追って説明し、人間の精液のサンプルを処理し、解決する方法、精子のクロマチンをdecondenseと変性する方法、どのように精子FISHの準備を取得するために進むために、そして顕微鏡での結果を可視化する方法。最も関連性の高い手順の特記事項は、最高の結果を達成するために与えられている。
Protocol
Discussion
このプロトコルは、精子のFISHの準備を取得するために人間の精液のサンプルを処理する方法について説明します。それがこのプロトコルを使用すると、雄の配偶子の染色体異常を分析することが可能です。精子異数性のスクリーニングは、基礎研究の文脈でと不妊男性に与えられた生殖アドバイスのいずれかのアプリケーションを持っています。臨床診断に最も広く研究されている染色体は…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品はのGeneralitat de Catalunyaの（2005 – SGR00437）によってサポートされていました。著者は、彼の技術支援のためにJ.ブランコとF.ヴィダルその監督と励ましのため、およびJ.ルーカスに感謝。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1,4-Dithiothreitol (DTT) | Material | Roche | 10197777001 | |
| 2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol | Material | Roche | 10708976001 | |
| Acetic acid | Material | Merck | 100.063 | |
AneuVysion® Multicolor DNA Probe Kit
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Material | Vysis Inc. | 32-161075
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| Centrifuge 5804R | Tool | Eppendorf | ||
| Centrifuge tube | Material | Nunc | 347856 | |
| Coplin jar (glass) | Material | Barloworld Scientific | Hellendahl (ZCT278) | |
| Coplin jar (plastic) | Material | Deltalab | 191087 | |
| Cover slips (15×15) | Material | Knittel gläser | 4600115 | |
| Cover slips (18×18) | Material | Knittel gläser | 4600118 | |
| Diamond pencil | Material | Hammacher | 335117010 | |
| Ethanol | Material | Merck | 100.983 | |
| Formamide | Material | Roche | 11814320001 | |
| Freezer | Tool | Zanussi | ||
| Gloves | Material | Sanyc | 101/3300 | |
| HYBrite™ | Tool | Vysis Inc. | ||
| Immersion Oil | Material | Olympus | 35505 | |
| Incubator | Tool | Heraeus | ||
| Methanol | Material | Merck | 106.009 | |
| Micropipette | Material | Labsystems | Finnpipette (4500000) | |
| Micropipette replacement tip | Material | Daslab | 16-2001 | |
| Nail varnish | Material | Quo-cosmetics | ||
| Olympus BX60 epifluorescence microscope | Tool | Olympus | Equipped with a triple-band filter for DAPI/Texas Red/FITC and single-band filters for Aqua, FITC and Texas Red. | |
| Pasteur Pipette | Material | Rubilabor | 211.0230 | |
| Phase contrast microscope | Tool | Nikon Diaphot | ||
| Plastic pipette (3ml) | Material | Deltalab | 200007 | |
| Potassium chloride (KCl) | Material | Fluka | 60128 | |
| Rubber cement | Material | Best-test | ||
| Slides | Material | Knittel gläser | 4520022 | |
| Slide Saver Boxes | Material | Deltalab | 19276.1 | |
| Sterile container | Material | Deltalab | 409726 | |
| Syringe | Material | PentaFerte | 002022300 | |
| Thermometer | Material | Comark Instruments, Inc | KM12 | |
| Tri-distilled water | Material | |||
| Triton X-100 | Material | Sigma | 9002-93-1 | |
| Tweezers | Material | B/Braun | Aesculap (BD224R) | |
| Vertical laminar flow hood | Tool | Burdinola | OR-ST 1500 | |
| Vortex mixer | Tool | Fisher Scientific | FB15012 | |
| Water bath | Tool | Raypa® |
Riferimenti
- Blanco, J., Egozcue, J., Vidal, F. Incidence of chromosome 21 disomy in human spermatozoa as determined by fluorescent in-situ hybridization. Hum. Reprod. 11, 722-726 (1996).
