Isolement et animale expansion sans sérum du cordon ombilical humain dérivé cellules stromales mésenchymateuses (CSM) et des cellules endothéliales progénitrices Colony Forming (CPEF)
Summary
Ce protocole décrit l'isolement et à l'expansion ultérieure des cellules stromales mésenchymateuses et les cellules endothéliales formant colonie sans l'utilisation de sérum animal pour générer des paires autologues à des fins de transplantation expérimentale.
Abstract
Le cordon ombilical est une source riche pour les cellules progénitrices avec un potentiel prolifératif élevé, y compris les cellules stromales mésenchymateuses (appelé aussi les cellules souches mésenchymateuses, cellules souches mésenchymateuses) et des cellules endothéliales progénitrices formant colonie (CPEF). Les deux types de cellules sont des acteurs clés dans le maintien de l'intégrité des tissus et sont probablement également impliqués dans les processus de régénération et de la formation de tumeurs.
Pour étudier leur biologie et leur fonction de manière comparative, il est important d'avoir les deux types de cellules disponibles à partir du même donneur. Il peut également être bénéfique à des fins de régénération pour dériver MSC et CPEF du même tissu.
Parce thérapies cellulaires devrait finalement trouver leur chemin à partir du laboratoire au chevet, nous avons établi une nouvelle méthode pour isoler et d'élargir les cellules progénitrices sans l'utilisation de protéines animales. Pooled lysat plaquettaire humain (pHPL) a remplacé le sérum fœtal bovin dans toutes les étapes de notre protocole d'éviter complètement de contact des cellules aux protéines xénogéniques.
Cette vidéo montre une méthode pour l'isolement et l'expansion des cellules souches d'un cordon ombilical.
Tous les matériaux et les procédures seront décrites.
Protocol
Discussion
Il ya une variété de sources à partir duquel obtenir MSCS ou CPEF notamment la moelle osseuse, le tissu adipeux, le sang de cordon, etc
Il est nécessaire d'obtenir deux types de progéniteurs de la même source de comparer directement l'implication des différents types de cellules dans des procédés tels tissus et la régénération des navires ou de contribution à la progression tumorale.
La facilité avec laquelle d'isoler et d'étudier l…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs remercient Katharina Schallmoser pour fournir pHPL, Eva Rohde et Nicole Hofmann pour les commentaires utiles pour le manuscrit, Daniela Thaler et Margaretha Fr hwirth d'assistance technique, Monica Farrell pour révision linguistique, Uwe Lang, Margit Holzapfel et Sandra Eppich au Département d'obstétrique pour fournir les cordes.
Ce travail a été soutenu par l'Austrian Research Foundation (FWF, accorder N211-NAN à la DS), l'Agence autrichienne de promotion de la recherche (FFG, accorder N200 à DS) et par les cellules souches adultes de la Fondation de recherches (AR). AR est un membre de la Médecine Moléculaire programme de doctorat de l'Université médicale de Graz.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| alpha modified MEM | Sigma | |||
| L-GLutamin | Sigma | |||
| Penicillin/Streptomycin | Sigma | |||
| EBM | Lonza | |||
| Single cytokine quots | Lonza | |||
| 75 cm2 flasks | Corning | |||
| 150 cm2 plates | Corning | |||
| Cell scraper | Corning | |||
| Trypsin/EDTA | Sigma | |||
| Monoclonal antibodies | Becton Dickenson | |||
| PBS | ||||
| 50 ml tubes | Falcon | |||
| 500 mL filter 20 μm pore size |
Millipore | |||
| Preservative free heparin | Biochrom |
Riferimenti
- Schallmoser, K. Human platelet lysate can replace fetal bovine serum for clinical-scale expansion of functional mesenchymal stromal cells. Transfusion. 47, 1436-1446 (2007).
- Reinisch, A. Humanized system to propagate cord blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells for clinical application. Regen Med. 2, 371-382 (2007).
- Reinisch, A. Humanized large-scale expanded endothelial colony-forming cells function in vitro and in vivo. Blood. 113, 6716-6725 (2009).
- Strunk, D. Phenotypic characterization and preclinical production of human lineage-negative cells for regenerative stem cell therapy. Transfusion. 45, 315-326 (2005).
