Isolamento e di espansione degli animali siero gratuito di cordone ombelicale umano derivato cellule stromali mesenchimali (MSC) e cellule endoteliali progenitrici formanti colonia (ECFCs)
Questo protocollo descrive l'isolamento e la successiva espansione delle cellule stromali mesenchimali e le cellule endoteliali che formano colonie senza l'uso di siero animale per generare le coppie a fini di trapianto autologo sperimentali.
Abstract
Il cordone ombelicale è una ricca fonte di cellule progenitrici con alto potenziale proliferativo delle cellule stromali mesenchimali compreso (designato anche le cellule staminali mesenchimali, MSC) e cellule progenitrici endoteliali formanti colonia (ECFCs). Entrambi i tipi di cellule hanno un ruolo chiave nel mantenere l'integrità dei tessuti e sono probabilmente coinvolti nei processi di rigenerazione e formazione di tumori.
Per studiare la loro biologia e la funzione in termini comparativi, è importante avere entrambi i tipi di cellule a disposizione dallo stesso donatore. Può anche essere utile per scopi rigenerativi per derivare cellule staminali mesenchimali e ECFCs dal tessuto stesso.
Poiché la terapia cellulare dovrebbe finalmente trovare la loro strada dal laboratorio al letto abbiamo stabilito un nuovo metodo per isolare ed espandere ulteriormente le cellule progenitrici senza l'uso di proteine animali. Pool di lisato piastrinico umano (pHPL) sostituito siero fetale bovino in tutte le fasi del nostro protocollo al fine di evitare completamente il contatto delle cellule alle proteine xenogene.
Questo video dimostra una metodologia per l'isolamento e l'espansione delle cellule progenitrici da un cordone ombelicale.
Tutti i materiali e le procedure saranno descritte.
Protocol
Parte 1: Installazione 1. Preparazione del terreno di coltura Prima di iniziare la preparazione media di raccogliere tutti i materiali e gli strumenti di cui avrete bisogno. Scongelare 2 x 56 ml di lisato pool delle piastrine umane (pHPL, self-made: riferimento 1 & JOVE # 1523), 10 ml di una penicillina 100x / soluzione di streptomicina, 2 x 5 mL di L-Glutammina (entrambi Sigma). Scongelare la citochina e aliquote fattore di cre…
Discussion
C'è una varietà di fonti da cui ottenere cellule staminali mesenchimali o ECFCs compreso il midollo osseo, tessuto adiposo, sangue del cordone ombelicale, ecc
E 'necessario per ottenere entrambi i tipi di progenitori dalla stessa fonte di confrontare direttamente il coinvolgimento dei diversi tipi di cellule in processi come tessuti e la rigenerazione nave o contributo alla progressione del tumore.
La facilità con cui isolare e successivamente studiare…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gli autori ringraziano per la fornitura di Katharina Schallmoser pHPL, Eva Rohde e Nicole Hofmann per gli utili commenti al manoscritto, Daniela Thaler e Margaretha P. hwirth di assistenza tecnica, Monica Farrell per la modifica linguistica, Uwe Lang, Margit Holzapfel e Sandra Eppich al Dipartimento di Ostetricia per fornire le corde.
Questo lavoro è stato sostenuto dalla Fondazione per la ricerca austriaco (FWF, concedere N211-NAN per DS), l'Agenzia austriaca per la promozione della ricerca (FFG, concedere N200 per DS) e da The Adult Stem Cell Research Foundation (AR). AR è un collega della Medicina Molecolare del programma di dottorato dell'Università Medica di Graz.
Reinisch, A., Strunk, D. Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs). J. Vis. Exp. (32), e1525, doi:10.3791/1525 (2009).