Isolamento e animais de Expansão de soro livre de cordão umbilical humano Derivado células mesenquimais estromais (MSCs) e endoteliais Células Progenitoras Colony Forming (ECFCs)
Summary
Este protocolo descreve o isolamento ea subsequente expansão de células mesenquimais estromais e as células endoteliais que formam colônias sem o uso de animais soro autólogo para gerar pares para fins de transplante experimental.
Abstract
O cordão umbilical é uma fonte rica de células progenitoras com alto potencial proliferativo, incluindo células mesenquimais estromais (também chamadas de células-tronco mesenquimais, MSCs) e endoteliais colônia formando células progenitoras (ECFCs). Ambos os tipos de células são atores-chave na manutenção da integridade dos tecidos e são, provavelmente, também envolvidos nos processos de regeneração e formação de tumor.
Para estudar a sua biologia e funcionam de uma forma comparativa, é importante ter os dois tipos de células disponíveis a partir do mesmo doador. Também pode ser benéfico para fins regenerativos para derivar MSCs e ECFCs do mesmo tecido.
Porque terapias celulares deve eventualmente encontrar seu caminho de laboratório para o leito que estabeleceu um novo método para isolar e ampliar ainda mais as células progenitoras sem o uso de proteína animal. Lisado de plaquetas agrupadas humano (pHPL) substituiu soro fetal bovino em todas as etapas do nosso protocolo para evitar completamente contacto das células com proteínas xenogénicos.
Este vídeo demonstra uma metodologia para o isolamento e expansão de células progenitoras de um cordão umbilical.
Todos os materiais e procedimentos serão descritos.
Protocol
Discussion
Há uma variedade de fontes de onde começar ou MSCs ECFCs incluindo a medula óssea, tecido adiposo, sangue do cordão umbilical, etc
É necessário ter ambos os tipos de progenitores da mesma fonte para comparar diretamente o envolvimento dos diferentes tipos de células em processos como tecidos e regeneração de navio ou de contribuição para a progressão do tumor.
A facilidade com que a isolar e, posteriormente, estudar pares autólogo de ECFCs e MSCs do …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores agradecem Katharina Schallmoser para fornecer pHPL, Eva Rohde e Nicole Hofmann por seus úteis comentários ao manuscrito, Daniela Thaler e Margaretha Fr hwirth para assistência técnica, Monica Farrell para edição linguística, Uwe Lang, Margit Holzapfel e Sandra Eppich no Departamento de Obstetrícia para fornecer os cabos.
Este trabalho tem sido apoiada pelo austríaco Research Foundation (FWF, conceder N211-NAN para DS), a Agência de Promoção austríaco Research (FFG, conceder N200 para DS) e pelo adulto Stem Cell Research Foundation (AR). AR é um companheiro da Medicina Molecular programa de doutorado da Universidade Médica de Graz.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| alpha modified MEM | Sigma | |||
| L-GLutamin | Sigma | |||
| Penicillin/Streptomycin | Sigma | |||
| EBM | Lonza | |||
| Single cytokine quots | Lonza | |||
| 75 cm2 flasks | Corning | |||
| 150 cm2 plates | Corning | |||
| Cell scraper | Corning | |||
| Trypsin/EDTA | Sigma | |||
| Monoclonal antibodies | Becton Dickenson | |||
| PBS | ||||
| 50 ml tubes | Falcon | |||
| 500 mL filter 20 μm pore size |
Millipore | |||
| Preservative free heparin | Biochrom |
Riferimenti
- Schallmoser, K. Human platelet lysate can replace fetal bovine serum for clinical-scale expansion of functional mesenchymal stromal cells. Transfusion. 47, 1436-1446 (2007).
- Reinisch, A. Humanized system to propagate cord blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells for clinical application. Regen Med. 2, 371-382 (2007).
- Reinisch, A. Humanized large-scale expanded endothelial colony-forming cells function in vitro and in vivo. Blood. 113, 6716-6725 (2009).
- Strunk, D. Phenotypic characterization and preclinical production of human lineage-negative cells for regenerative stem cell therapy. Transfusion. 45, 315-326 (2005).
