Unicellulari registrazioni di aspirazione da Fotorecettori Cone mouse
Summary
Mostreremo come registrare le risposte flash da coni del mouse utilizzando un elettrodo di aspirazione.
Abstract
Bastoncelli e coni della retina sono responsabili per la rilevazione della luce. Nel buio, nucleotidi ciclici-dipendenti (CNG) canali nel segmento esterno sono aperte e permettono il flusso di cationi costantemente verso l'interno attraverso la membrana, la cellula depolarizzanti. Esposizione alla luce provoca la chiusura dei canali CNG, blocca il flusso di corrente verso l'interno zione e, quindi, si traduce in iperpolarizzazione delle cellule. Sulla base della polarità di fotorecettori, un metodo di registrazione di aspirazione è stato sviluppato nel 1970 che, a differenza del classico patch-clamp, non necessita di penetrare la membrana plasmatica<sup> 1</sup>. Disegnare il segmento esterno in una pipetta di vetro stretto raccordo riempito con soluzione extracellulare permette la registrazione dei cambiamenti in atto nelle singole cellule su test-esposizione flash. Tuttavia, questa ben consolidata "esterno-in-segmento (OS-in)" registrazione di aspirazione non è adatto per le registrazioni del cono del mouse, a causa della bassa percentuale di coni nella retina del mouse (3%) e le difficoltà nell'identificare il cono segmenti esterni. Recentemente, un interno-in-segmento (IS-in) la registrazione di configurazione è stato sviluppato per disegnare il segmento interno / regione nucleare del fotorecettore nella pipetta di registrazione<sup> 2,3</sup>. In questo video, ci mostrerà come registrare da fotorisposte singoli cono del mouse utilizzando una singola cella di elettrodi di aspirazione.
Protocol
Discussion
Cella singola registrazione di aspirazione da fotorecettori è stato sviluppato 3 decenni fa. Essa ci permette di registrare trans-membrana variazione di corrente indotta dalla stimolazione luminosa senza penetrare la membrana cellulare. A causa della elevata adesione cellula-cellula, è difficile isolare sano singola asta e il cono di retina del mouse come retina anfibi ed è difficile trovare coni singoli a causa della bassa percentuale (3%) e piccole dimensioni. L'interno-in-segmento (IS-in) metodo di registrazio…
Acknowledgements
Supportato da Career Development Award da ricerca per prevenire la cecità, NIH concedere EY 019312, e sovvenzione illimitata di ricerca per prevenire la cecità e EY 02687 (Department of Ophthalmology & Visual Sciences alla Washington University).
Riferimenti
- Yau, K. W., Lamb, T. D., Baylor, D. A. Light-induced fluctuations in membrane current of single toad rod outer segments. Nature. 269, 78-80 (1977).
- Nikonov, S. S. Photoreceptors of Nrl -/- mice coexpress functional S- and M-cone opsins having distinct inactivation mechanisms. J Gen Physiol. 125, 287-304 (2005).
- Nikonov, S. S., Kholodenko, R., Lem, J., Pugh, E. N. Physiological features of the S- and M-cone photoreceptors of wild-type mice from single-cell recordings. J Gen Physiol. 127, 359-374 (2006).
- Applebury, M. L. The murine cone photoreceptor: a single cone type expresses both S and M opsins with retinal spatial patterning. Neuron. 27, 513-523 (2000).
- Cornwall, M. C., Fein, A., MacNichol, E. F. Cellular mechanisms that underlie bleaching and background adaptation. J Gen Physiol. 96, 345-372 (1990).
- Calvert, P. D. Phototransduction in transgenic mice after targeted deletion of the rod transducin alpha -subunit. Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 13913-13918 (2000).
