Una sola célula grabaciones de succión de los conos del ratón
Summary
Le mostraremos cómo registrar las respuestas de flash de conos ratón utilizando un electrodo de succión.
Abstract
Fotorreceptores de los bastones y conos en la retina es responsable de la detección de la luz. En la oscuridad, los nucleótidos cíclicos-cerrada (CNG) de canales en el segmento externo están abiertos y permiten el flujo de cationes a ritmo constante hacia el interior a través de la membrana, despolarización de la célula. Exposición a la luz desencadena el cierre de los canales de GNC, bloquea el flujo de cationes corriente de entrada, por lo que resulta en la hiperpolarización de la célula. Con base en la polaridad de los fotorreceptores, un método de grabación de succión se desarrolló en 1970 que, a diferencia de la clásica técnica de patch-clamp, no requiere penetrar en la membrana plasmática<sup> 1</sup>. Dibujar el segmento externo en una pipeta de vidrio bien instalados llena con solución extracelular permite registrar los cambios actuales en las células individuales a la exposición de pruebas flash. Sin embargo, esta bien establecido "exterior del segmento en el (OS-in)" de grabación de succión no es adecuado para las grabaciones de cono del ratón, por el bajo porcentaje de conos en la retina del ratón (3%) y las dificultades para identificar el cono segmentos exteriores. Recientemente, un segmento interno-en (IS-in) de registro de configuración ha sido desarrollado para dibujar el segmento de interior / región nuclear de los fotorreceptores en la pipeta de grabación<sup> 2,3</sup>. En este video, vamos a mostrar cómo grabar desde cada photoresponses ratón cono con una sola célula de electrodos de succión.
Protocol
Discussion
Una sola célula de grabación de aspiración de las células fotorreceptoras se desarrolló hace 3 décadas. Que nos permite grabar través de la membrana cambio de corriente inducida por la estimulación de la luz, sin penetrar la membrana celular. Debido a la alta adhesión célula-célula, es difícil aislar la barra saludable único y el cono de la retina del ratón, como la retina de anfibios y es difícil de encontrar conos individuales debido al bajo porcentaje (3%) y pequeño tamaño. El segmento de interior-en…
Acknowledgements
Apoyado por el Premio de Desarrollo Profesional de Investigación para Prevención de la Ceguera, NIH EY 019312, y subvención sin restricciones de Investigación para Prevención de la Ceguera y EY 02687 (Departamento de Oftalmología y Ciencias Visuales en la Universidad de Washington).
Riferimenti
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- Nikonov, S. S., Kholodenko, R., Lem, J., Pugh, E. N. Physiological features of the S- and M-cone photoreceptors of wild-type mice from single-cell recordings. J Gen Physiol. 127, 359-374 (2006).
- Applebury, M. L. The murine cone photoreceptor: a single cone type expresses both S and M opsins with retinal spatial patterning. Neuron. 27, 513-523 (2000).
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