يصف هذا البروتوكول ميكروفلويديك شارك في ثقافة نموذج للثقافة في وقت واحد ومترجم من الخلايا الظهارية والبكتيريا. ويمكن استخدام هذا النموذج للتحقيق في دور الاشارات الجزيئية للذوبان في مختلف المرضية فضلا عن الشاشة فعالية من السلالات البكتيرية بروبيوتيك المفترضة.
Abstract
الإنسان الجهاز الهضمي (غي) المسالك هي بيئة فريدة من نوعها في الخلايا الظهارية التي المعوية وغير الممرضة – (المتعايشة) البكتيريا تتعايش. وقد اقترح أن المكروية أن واجه الممرض في طبقة المتعايشة مهم في تحديد مدى الاستعمار. الثقافة ليست الأساليب الحالية لتحقيق الاستعمار الممرض مناسب تماما عن التحقيق في هذه الفرضية لأنها لا تشارك في تمكين الثقافة من البكتيريا والخلايا الظهارية في بأسلوب يحاكي المكروية الجهاز الهضمي. نحن هنا وصف ميكروفلويديك شارك في ثقافة نموذج تمكن ثقافة مستقلة من الخلايا حقيقية النواة والبكتيريا ، واختبار تأثير الاستعمار المكروية المتعايشة على الممرض. ويتجلى النموذج المشترك من خلال تطوير ثقافة المتعايشة<em> القولونية</em> بيوفيلم بين خلايا هيلا ، تليها مقدمة من enterohemorrhagic<em> E. القولونية</em> (EHEC) في جزيرة المتعايشة ، في تسلسل الذي يحاكي تسلسل الأحداث في عدوى الجهاز الهضمي.
Protocol
1. تصنيع السيليكون سادة باستخدام معيار SU – 8 ضوئيه 1 (لا يظهر في هذا الفيديو). استخدام الأساليب القياسية SU – 8 ضوئيه لإنشاء SU – 8 "سادة" (SU – 8 2050 ، MicroChem ، نيوتن ، MA) لانتاج مكونات مختلفة (سمك الأغشية PDMS مختلفة ، و…
Discussion
المقايسات التقليدية للمرفق الممرض والاستعمار الاستفادة من أحادي الطبقة من الخلايا حقيقية النواة في لوحات زراعة الأنسجة التي تضاف إلى مسببات الأمراض. هذه النماذج ليست ذات صلة من الناحية الفسيولوجية لأنها لا تشتمل على البكتيريا المتعايشة بيوفيلم المتقدمة على خلايا …
Acknowledgements
وأيد هذا العمل في جزء من مؤسسة العلوم الوطنية (CBET 0846453) ، والمعاهد الوطنية للصحة (1R01GM089999).
Kim, J., Hegde, M., Jayaraman, A. Microfluidic Co-culture of Epithelial Cells and Bacteria for Investigating Soluble Signal-mediated Interactions. J. Vis. Exp. (38), e1749, doi:10.3791/1749 (2010).