Этот протокол описывает микрожидкостных совместно культуры модель для одновременного и локализованные культуры эпителиальных клеток и бактерий. Эта модель может быть использована для исследования роли различных растворимых молекулярные сигналы на патогенез, а также экран эффективности предполагаемых пробиотические бактериальные штаммы.
Abstract
Человека желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) является уникальной средой, в которой кишечных эпителиальных клеток и непатогенные (синантропных) бактерий сосуществовать. Было высказано предположение, что микроокружение, что возбудитель встречи в синантропных слой играет важную роль в определении степени колонизации. Современные методы исследования культуры возбудителя колонизация не очень хорошо подходит для исследования эту гипотезу, поскольку они не позволяют со-культуры бактерий и эпителиальных клеток, таким образом, что имитирует И. микроокружения-кишечного тракта. Здесь мы опишем микрожидкостных совместно культуры модель, которая позволяет независимым культура клеток эукариот и бактерий, и тестирование влияния микроокружения на синантропных возбудителя колонизации. Совместно культуры модели демонстрируют развивающиеся комменсальной<em> Кишечной палочки</em> Биопленки между клетками HeLa, с последующим введением Энтерогеморрагическая<em> Е. палочки</em> (EHEC) в синантропных острова, в последовательности, которая имитирует последовательность событий в инфекции желудочно-кишечного тракта.
Protocol
1. Производство кремния мастеров с использованием стандартных SU-8 фотолитографии 1 (не показано в этом видео). Используйте стандартные SU-8 методами фотолитографии для создания СУ-8 "мастеров" (SU-8 2050 года, MicroChem, Ньютон, штат Массачусетс) для изготовления различных комп…
Discussion
Обычные анализы для возбудителя привязанности и колонизации использовать монослоя клеток эукариот в виде пластин культуры тканей, в которые добавляются патогенные. Эти модели не соответствующих физиологически так как они не включают бактериальные биопленки комменсальной разработа…
Acknowledgements
Эта работа была выполнена при частичной поддержке Национального научного фонда (конбет 0846453) и Национального института здоровья (1R01GM089999).
Kim, J., Hegde, M., Jayaraman, A. Microfluidic Co-culture of Epithelial Cells and Bacteria for Investigating Soluble Signal-mediated Interactions. J. Vis. Exp. (38), e1749, doi:10.3791/1749 (2010).