MALDIサンプル調製：超薄層法
Summary
このビデオでは、マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析法（MALDI – MS）でペプチドやタンパク質を解析するための超薄型行列/分析物層の準備を示しています。
Abstract
このビデオでは、マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析法（MALDI – MS）1、2によってペプチドやタンパク質を解析するための超薄型行列/分析物層の準備を示しています。超薄層のメソッドは、行列/分析物混合物のその後の結晶化のための播種の地盤となるサンプルプレート、上のマトリックスの結晶の基材層（α-シアノ-4 – ヒドロキシ桂皮酸）の生産を含む。他のサンプルの成膜方法に比べて超薄層法の利点（例えば乾燥液滴）は、（i）は、提供されているような塩や界面活性剤などの不純物、（ⅱ）優れた分解能、及び（iii）より高い空間的均一性に寛容です。このメソッドは、タンパク質の精密質量測定のために特に便利です。プロトコルは、最初に開発され、最適化された膜タンパク質の分析のためにして正常に2と12の膜貫通ドメイン2の間に含まれている、イオンチャネル、代謝産物輸送体、および受容体を分析するために使用されました。初版発行以来、それはまた、可溶性タンパク質の解析にも同様に有用であることが示された。実際、我々は、380 kDaの高い3の分子量を有するものを含む広範囲の特性を、有するタンパク質の多数のためにそれを使用している。それは現在、全てのタンパク質の分子質量分析のための選択の手法です。説明する手順は、一貫して高品質のスペクトルを生成し、それは、敏感な、堅牢で、導入が容易です。
Protocol
Materials
It is critical that all reagents are of highest-quality (e.g. HPLC-grade).
Powder-free gloves (latex or nitrile)
Stainless steel or gold MALDI sample plate
Methanol (MeOH)
Water
Kimwipes
α-Cyano-4-hydroxycinnamic acid (4-HCCA)
Trifluoroacetic acid (TFA) (final concentration in 0.1% in H2O)
Acetonitrile (ACN)
Formic acid
Isopropanol
Riferimenti
- Xiang, F., Beavis, R. C. A Method to Increase Contaminant Tolerance in Protein Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization by the Fabrication of Thin Protein-Doped Polycrystalline Films. Rapid Communications in Mass Spectrometry. 8, 199-204 (1994).
- Cadene, M., Chait, B. T. A Robust, Detergent-Friendly Method for Mass Spectrometric Analysis of Integral Membrane Proteins. Analytical Chemistry. 72, 5655-5658 (2000).
- Hook, P., Mikami, A., Shafer, B., Chait, B. T., Rosenfeld, S. S., Vallee, R. B. Long-range allosteric control of cytoplasmic dynein ATPase activity by the stalk and C-terminal domains. J Biol Chem. 280, 33045-33054 (2005).
