든 샘플 준비 : 울트라 씬 레이어 방법

Summary

이 비디오는 매트릭스를 이용한 레이저 탈착 이온화 질량 분석법 (든 – MS)에 의해 펩티드와 단백질 분석을위한 울트라 얇은 매트릭스 / analyte 레이어의 준비를 보여줍니다.

Abstract

이 비디오는 매트릭스를 이용한 레이저 탈착 이온화 질량 분석법 (든 – MS) ^{1, 2에} 의해 펩티드와 단백질 분석을위한 울트라 얇은 매트릭스 / analyte 레이어의 준비를 보여줍니다. 울트라 씬 레이어 방법은 매트릭스 / analyte 혼합물의 후속 결정을위한 시딩 접지 역할을 샘플 접시에 매트릭스 결정의 기판 레이어의 생산 (알파 – cyano – 4 – hydroxycinnamic 산성)을 포함합니다. 다른 샘플 증착 방식 (예 : 말린 소적)을 통해 울트라 얇은 레이어 방식의 장점은 (I)과 같은 소금 및 세제, (2) 더 나은 해상도, 그리고 (iii) 이상의 공간적 균일 같은 불순물에 큰 관용을 제공하고 있습니다. 이 방법은 단백질의 정확한 질량 결정에 특히 유용합니다. 프로토콜은 초기 개발하고 막 단백질의 분석에 최적화된 성공적으로 이온 채널, 신진 대사 전송기 및 수용체를 분석하는 데 사용, 2, 12 transmembrane 도메인 ² 사이 포함되었습니다. 원래 출판 이후, 그것은 또한 가용성 단백질의 분석을 위해 동등하게 유용하게 표시하고 있습니다. 사실, 우리는 380 KDA ^3만큼 높은 분자 민중 포함 속성의 넓은 범위를 가지고 단백질의 다수를 위해 사용 해왔다. 그것은 현재 모든 단백질의 분자 질량 분석을 위해 선택의 방법입니다. 설명 절차는 지속적으로 고품질의 스펙트럼을 생산하고, 그것은 민감한 강력하고 쉽게 구현할 수 있습니다.

Protocol

그것은 얇은 레이어의 준비 기간 동안 가루없는 장갑을 착용하는 것은 매우 중요합니다. 샘플 판의 청소 스테인리스 스틸 또는 금색 든 샘플 판을 사용하십시오. MeOH로 세척하고 Kimwipe로 부드럽게 닦으십시오. 표면 긁힘 방지하기 위해, Kimwipe로 표면을 문질러거나 문지르지 마십시오. H 2 O로 씻고 Kimwipe로 부드럽게 닦으십시오. MeOH로 세척?…

Materials

It is critical that all reagents are of highest-quality (e.g. HPLC-grade).

Powder-free gloves (latex or nitrile)
Stainless steel or gold MALDI sample plate
Methanol (MeOH)
Water
Kimwipes
α-Cyano-4-hydroxycinnamic acid (4-HCCA)
Trifluoroacetic acid (TFA) (final concentration in 0.1% in H₂O)
Acetonitrile (ACN)
Formic acid
Isopropanol