MALDI样品制备：超薄层的方法
Summary
这个视频演示的超薄层肽和蛋白质基质辅助激光解吸电离质谱（MALDI – MS的）分析的矩阵/待测的准备。
Abstract
本视频演示了矩阵/分析物的分析肽和蛋白质基质辅助激光解吸电离质谱（MALDI – MS的）1，2层超薄的准备。超薄层的方法，涉及生产样板，作为一个矩阵/分析物的混合物随后结晶播种地面基材层的基质晶体（α-氰基-4 – 羟基苯甲酸）。比其他样本沉积的方法（如干燥液滴）的超薄层的方法的优点是，它提供了（我）更大的宽容，杂质，如盐和洗涤剂，（二）更好的分辨率，（三）更高的空间统一。精确质量测定的蛋白质，这种方法尤其有用。该协议最初是开发和优化膜蛋白的分析，并成功地用于分析离子通道，代谢产物的运输，和受体，含有2和12个跨膜结构域2之间。由于原来的出版物，它也显示出可溶性蛋白的分析同样有用。事实上，我们已经使用了大量的蛋白质的属性的范围很广，包括那些具有高的分子量为380 kDa的3。这是目前我们所有的蛋白质分子质量分析方法的选择。所描述的过程，坚持生产高品质的光谱，和它是敏感的，功能强大，且易于实现。
Protocol
Materials
It is critical that all reagents are of highest-quality (e.g. HPLC-grade).
Powder-free gloves (latex or nitrile)
Stainless steel or gold MALDI sample plate
Methanol (MeOH)
Water
Kimwipes
α-Cyano-4-hydroxycinnamic acid (4-HCCA)
Trifluoroacetic acid (TFA) (final concentration in 0.1% in H2O)
Acetonitrile (ACN)
Formic acid
Isopropanol
Riferimenti
- Xiang, F., Beavis, R. C. A Method to Increase Contaminant Tolerance in Protein Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization by the Fabrication of Thin Protein-Doped Polycrystalline Films. Rapid Communications in Mass Spectrometry. 8, 199-204 (1994).
- Cadene, M., Chait, B. T. A Robust, Detergent-Friendly Method for Mass Spectrometric Analysis of Integral Membrane Proteins. Analytical Chemistry. 72, 5655-5658 (2000).
- Hook, P., Mikami, A., Shafer, B., Chait, B. T., Rosenfeld, S. S., Vallee, R. B. Long-range allosteric control of cytoplasmic dynein ATPase activity by the stalk and C-terminal domains. J Biol Chem. 280, 33045-33054 (2005).
