Analisi dell'espressione genica in Borer Emerald Ash ( Agrilus planipennis) Utilizzando quantitativa Real Time-PCR
Summary
Quantitativa real-time PCR (QRT-PCR) è un efficace strumento per diagnosticare i livelli di mRNA nei tessuti degli insetti diversi e fasi di sviluppo. In questo rapporto si mostra l'uso di qRT-PCR per accertare i livelli di mRNA in diversi tessuti larvali e gli stadi di sviluppo delle specie di insetti invasivi, smeraldo piralide cenere.
Abstract
Emerald cenere piralide (EAB,<em> Agrilus planipennis</em>) È un parassita esotico invasiva, che ha ucciso milioni di alberi di frassino (<em> Fraxinus</em> Spp) in Nord America.<strong></strong> EAB continua a diffondersi rapidamente e attacchi cenere alberi di diverse età, da alberelli di alberi maturi. Tuttavia, ad oggi poco o nessuna conoscenza molecolare esiste per EAB. Siamo interessati a decifrare i processi fisiologici molecolari basati a livello di tessuto che EAB aiuto nella colonizzazione di successo di frassini. In questo rapporto si mostra l'uso efficace delle quantitativa real-time PCR (QRT-PCR) per accertare i livelli di mRNA in diversi tessuti larvali (compresi midgut, grasso corpi e cuticola) e varie fasi di sviluppo (di cui 1<sup> St</sup> -, 2<sup> Nd</sup> -, 3<sup> Rd</sup> -, 4<sup> °</sup>-Stadi, prepupae e adulti) di EAB. A titolo di esempio, un gene peritrophin (di seguito chiamato,<em> AP-PERI1</em>) È esemplificata come il gene di interesse e una proteina ribosomiale (<em> AP-RP1</em>) Come controllo interno. Peritrophins sono componenti importanti della membrana peritrophic / matrice (PM), che è il rivestimento dell'intestino degli insetti. Il PM ha diverse funzioni tra cui la digestione e la protezione meccanica per l'epitelio midgut.
Protocol
Discussion
I cicli soglia (Ct) il valore si ottiene per ogni campione in qRT-PCR piatto. Per fare la curva standard, il valore Ct ottenuti per ogni diluizione è stato in funzione del log della sua concentrazione. I valori Ct per i campioni sperimentali sono stati poi riportati su questa curva standard di diluizione della serie. Quantità obiettivo sono stati calcolati da separare le curve standard generato per ogni tessuto cioè esperimento e l'espressione dello sviluppo. I valori di espressione relativa (giri) sono stati poi…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Riconosciamo l'aiuto fornito da Lourdes Delta Arrueta Antequera (Dipartimento di Entomologia, Ohio State University / OARDC, Wooster, OH) nella configurazione degli esperimenti. Ringraziamo il Dott. Teresa Polonia (USDA, Servizi forestali, NRS) per inviare i campioni EAB larvale. Aiuto fornito dal Dr. Luis A Canas e Nuris M Acosta con la configurazione microscopio è apprezzato. Il finanziamento per questo progetto è stato fornito da fondi statali e federali assegnare alle agricola dell'Ohio Centro Ricerca e Sviluppo, The Ohio State University.
Riferimenti
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