Análise de Expressão Gênica em Emerald Borer Ash ( Agrilus planipennis) Usando Quantitativa em Tempo Real-PCR
Summary
Quantitativas PCR em tempo real (qRT-PCR) é uma ferramenta eficaz para diagnosticar os níveis de mRNA nos tecidos do inseto e estágios diferentes de desenvolvimento. Neste relatório, nós mostramos o uso de qRT-PCR para verificar os níveis de mRNA em diferentes tecidos e estágios de desenvolvimento larval das espécies de insetos invasivos, esmeralda broca cinzas.
Abstract
Emerald broca de cinzas (EAB,<em> Agrilus planipennis</em>) É uma praga exótica invasora, que já matou milhões de árvores de cinzas (<em> Fraxinus</em> Spp) na América do Norte.<strong></strong> EAB continua a se espalhar rapidamente e ataques de cinzas árvores de diferentes idades, a partir de mudas de árvores maduras. No entanto, até à data pouco ou nenhum conhecimento molecular existe para EAB. Estamos interessados em decifrar os processos moleculares baseados fisiológicas ao nível do tecido que EAB ajuda na colonização bem sucedida de freixos. Neste relatório, nós mostramos o uso eficaz dos quantitativos PCR em tempo real (qRT-PCR) para verificar os níveis de mRNA em diferentes tecidos larval (incluindo intestino, gordura corpos e cutícula) e diferentes estágios de desenvolvimento (incluindo 1<sup> St</sup> -, 2<sup> Nd</sup> -, 3<sup> Rd</sup> -, 4<sup> Th</sup>-Prepupas estádios e adultos) da EAB. Como exemplo, um gene peritrophin (doravante,<em> AP-PERI1</em>) É exemplificado como o gene de interesse e uma proteína ribossomal (<em> AP-RP1</em>) Como o controle interno. Peritrophins são componentes importantes da membrana peritrófica / matriz (PM), que é o revestimento do intestino do inseto. A PM tem diversas funções, incluindo a digestão e proteção mecânica ao epitélio do intestino médio.
Protocol
Discussion
Os ciclos de limiar (Ct) valor é obtido para cada amostra na placa de qRT-PCR. Para fazer a curva padrão, o valor de Ct obtidos para cada diluição foi em função do log da sua concentração. Os valores de Ct para as amostras experimentais foram então desenhados para esta curva padrão de diluição em série. Quantidades alvo foram calculados a partir de distintas curvas padrão gerada para cada tecido ou seja, experiência e expressão de desenvolvimento. Os valores de expressão relativa (REVs) foram, então, d…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Reconhecemos a ajuda fornecida por Lourdes Delta Arrueta Antequera (Departamento de Entomologia, Ohio State University / OARDC, Wooster, OH) na instalação dos experimentos. Agradecemos ao Dr. Therese Polónia (USDA, Serviços Florestais, NRS) para enviar amostras EAB larval. Ajuda fornecida pelo Dr. Luis Um Canas e Nuris M Acosta com a configuração do microscópio é apreciado. O financiamento para este projeto foi fornecido pelo Estado e Federal fundos apropriados para o Ohio Agricultural Research e Development Center, The Ohio State University.
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