Análisis de la expresión génica en el barrenador esmeralda del fresno ( Agrilus planipennis) Utilizando Real-PCR cuantitativa en tiempo
Summary
Cuantitativa en tiempo real PCR (QRT-PCR) es una herramienta eficaz para el diagnóstico de los niveles de mRNA en tejidos de insectos y diferentes etapas de desarrollo. En este informe se muestra el uso de QRT-PCR para determinar los niveles de ARNm en diferentes tejidos y estadios de desarrollo larvario de las especies de insectos invasores, el barrenador esmeralda del fresno.
Abstract
Barrenador esmeralda del fresno (EAB,<em> Agrilus planipennis</em>) Es una plaga exótica invasiva, que ha matado millones de fresnos (<em> Fraxinus</em> Spp) en América del Norte.<strong></strong> EAB continúa propagándose con rapidez y los ataques de cenizas árboles de diferentes edades, a partir de árboles jóvenes de los árboles maduros. Sin embargo, hasta la fecha muy poco o ningún conocimiento molecular existe para EAB. Estamos interesados en descifrar los procesos fisiológicos de base molecular a nivel de tejido que ayuda EAB en la colonización exitosa de los fresnos. En este informe se muestra el uso eficaz de indicadores cuantitativos PCR en tiempo real (QRT-PCR) para determinar los niveles de ARNm en diferentes tejidos larvarios (incluido el intestino medio cuerpo, la grasa y la cutícula) y las diferentes etapas de desarrollo (incluido un<sup> St</sup> -, 2<sup> Nd</sup> -, 3<sup> Rd</sup> -, 4<sup> °</sup>-Estadios, prepupas y adultos) de esta plaga. A modo de ejemplo, un gen peritrophin (aquí nombrados,<em> AP-PERI1</em>) Se ejemplifica como el gen de interés y una proteína ribosomal (<em> AP-RP1</em>) Como el control interno. Peritrophins son componentes importantes de la membrana peritrófica / matriz (PM), que es el revestimiento del intestino del insecto. La PM tiene diversas funciones como la digestión y la protección mecánica del epitelio del intestino medio.
Protocol
Discussion
Los ciclos de umbral (Ct) se obtiene el valor de cada muestra en la placa de QRT-PCR. Para la toma de la curva estándar, el valor de Ct obtenidos para cada dilución se traza contra el registro de su concentración. Los valores de Ct de las muestras experimentales se trazaron en esta curva de dilución estándar de la serie. Cantidades de destino se calcula a partir de separar las curvas de calibración generadas para cada tejido es decir, la experimentación y expresión del desarrollo. Los valores relativos de expres…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Reconocemos la ayuda proporcionada por Lourdes Delta Arrueta Antequera (Departamento de Entomología, Universidad Estatal de Ohio / OARDC, Wooster, OH) en la configuración de los experimentos. Agradecemos a la Dra. Teresa Polonia (USDA, Servicios Forestales, NRS) para enviar muestras de larvas de EAB. Ayuda proporcionada por el Dr. Luis A. Cañas y Nuris M Acosta con la configuración de microscopio se aprecia. La financiación de este proyecto fue proporcionado por fondos estatales y federales asignados a la Ohio Investigación y Desarrollo Agrícola del Centro, The Ohio State University.
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