生成的基因 C。线虫通过基因枪转化
Summary
转基因蠕虫常用<em> C。线虫</em>研究。描述的是一个简单而有效，协议引入蠕虫使用DNA包覆的金粒子枪法转基因。参与的努力和轰炸的结果相媲美注射代转基因动物。
Abstract
使用自由生活线虫C.的实验室的数量线虫是迅速增长。这种生物模型的普及是由于快速的一代人的时间和寿命短，维护容易和便宜，完全测序的基因组，和RNAi的资源和突变的动物数组。此外，分析了C.线虫基因组中发现了蠕虫和高等脊椎动物之间极大的相似性，这表明蠕虫病毒的研究可能是一个重要的辅助手段，在整个小鼠培养细胞进行的研究。一个强大的蠕虫病毒的研究和重要组成部分，是利用转基因动物的研究，基因定位和功能的能力。可以创建可以通过蠕虫生殖显微注射，或通过利用基因枪法转基因动物。炮击是一个较新的技术并不太熟悉的实验室。在这里，我们描述了一个简单的协议生成的Bio – Rad公司PDS – 1000系统使用的金粒子枪法转基因蠕虫。到雌雄同体生殖与DNA显微注射法相比，该协议已经不需要特殊技能，从运营商方面识别蠕虫解剖或执行显微注射的优势。通常从一个单一的轰炸进一步多个转基因株系。此外，在对比，以显微注射法，基因枪法染色体外的阵列和集成的转基因与转基因动物。能够获得综合的转基因株系，可避免使用整合外源DNA诱变协议。总之，基因枪法可以代转基因动物的一个极具吸引力的一种方法，尤其是对不感兴趣的投资需要的时间和精力，成为显微注射技术熟练的调查。
Protocol
Discussion
基因枪法是一个简单的的方法，引入外源DNA的许多生物，包括 C。 线虫 1,5,6,7,16。依靠黄金颗粒，形成了一个复杂的DNA 与氯化钙存在。阳离子多胺，如亚精胺，保护核酸在体内降解的DNA。既然精胺是一种不稳定的分子，它是重要的存储在小分装于-20 ° C，并在执行轰击之前做出正确的解决方案。正如我们在轰炸协议描述，鱼精蛋白可以用来代替亚精胺提供外源DNA 1…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是从美国匹兹堡大学和美国国立卫生研究院授予AG028977 ALF的种子资金支持
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Gold particles | Inbio gold | BD021 | 1micron | |
| Midiprep kit | Qiagen | 12143 | ||
| Spermidine | Sigma | S4139 | ||
| Protamine | Sigma | P4505 | ||
| Macrocarriers | Biorad | 165-2335 | ||
| PDS-1000/He Hepta System | Biorad | 165-2257 | ||
| Rupture disk | Biorad | 165-2330 | ||
| Nystatin | Sigma | N1638 | ||
| Streptomycin | MP | 100556 |
Riferimenti
- Evans, T. C. . Wormbook. , 1-15 (2006).
- Berkowitz, L. A., Knight, A. L., Caldwell, G. A., Caldwell, K. A. Generation of stable transgenic C. elegans using microinjection. J Vis Exp. , (2008).
- Mello, C., Fire, A. DNA transformation. Methods Cell Biol. 48, 451-482 (1995).
- Mello, C. C., Kramer, J. M., Stinchcomb, D., Ambros, V. Efficient gene transfer in C.elegans: extrachromosomal maintenance and integration of transforming sequences. EMBO J. 10, 3959-3970 (1991).
- Praitis, V., Casey, E., Collar, D., Austin, J. Creation of low-copy integrated transgenic lines in Caenorhabditis elegans. Genetica. 157, 1217-1226 (2001).
- Wilm, T., Demel, P., Koop, H. U., Schnabel, H., Schnabel, R. Ballistic transformation of Caenorhabditis elegans. Gene. 229, 31-35 (1999).
- Berezikov, E., Bargmann, C. I., Plasterk, R. H. Homologous gene targeting in Caenorhabditis elegans by biolistic transformation. Nucleic Acids Res. 32, e40-e40 (2004).
- Maduro, M., Pilgrim, D. Identification and cloning of unc-119, a gene expressed in the Caenorhabditis elegans nervous system. Genetica. 141, 977-988 (1995).
- Riddle, D. L., Swanson, M. M., Albert, P. S. Interacting genes in nematode dauer larva formation. Nature. 290, 668-671 (1981).
- Maduro, M., Pilgrim, D. Conservation of function and expression of unc-119 from two Caenorhabditis species despite divergence of non-coding DNA. Gene. 183, 77-85 (1996).
- Ferguson, A. A., Fisher, A. L. Retrofitting ampicillin resistant vectors by recombination for use in generating C. elegans transgenic animals by bombardment. Plasmid. 62, 140-145 (2009).
- Zhang, Y., Nash, L., Fisher, A. L. A simplified, robust, and streamlined procedure for the production of C. elegans transgenes via recombineering. BMC Dev Biol. 8, 119-119 (2008).
- Lewis, J. A., Fleming, J. T. Basic culture methods. Methods Cell Biol. 48, 3-30 (1995).
- Sulston, J. E., Horvitz, H. R., Wood, W. B. . The nematode, Caenorhabditis elegans. , 587-606 (1988).
- Sivamani, E., DeLong, R. K., Qu, R. Protamine-mediated DNA coating remarkably improves bombardment transformation efficiency in plant cells. Plant Cell Rep. 28, 213-221 (2009).
- Johnston, S. A. Biolistic transformation: microbes to mice. Nature. 346, 776-777 (1990).
