ブラックウィドウスパイダーシルクを生産腺の顕微解剖
Summary
ここでは、女性の黒い未亡人のクモの腹部から、絹を生産腺を除去する効率的な戦略について説明します。この手順では、高度に精製されたファッションの7つの別のシルク生産腺、クモの糸生産と繊維集合体を研究する研究者のための重要なプロセスの迅速な分離が可能になります。
Abstract
現代のスパイダーは、子孫の1,2の開発の運動、餌捕獲と保護を含む生物学的機能の広い範囲で高性能な絹繊維をスピン。スパイダーは、多様な機械的性質を持っているいくつかの異なるファイバータイプを紡糸して、これらのタスクを完了する。繊維の種類のそのような専門化は、小さなbiofactoriesとして機能する別のシルク生産腺、の進化を通じて発生しています。これらbiofactoriesの製造と繊維の生産のための絹タンパク質を大量に保管してください。生化学的な一連の複雑なイベントを通じ、これらの絹タンパク質は、押し出し時に固体材料に液体から変換されます。
機械的な研究は、クモの糸は、高張力鋼3より強いことが実証されている。クモの糸糸の構造と機能の関係を理解するために分析は、クモの糸は、主としてそれらのタンパク質配列4内のブロックの繰り返しを持つタンパク質、またはフィブロイン、から成ることが明らかになっている。信じられないほどの引張強さとクモの糸の拡張性に貢献する共通の分子の署名は、翻訳絹のcDNAの解析によって解明されています。クモ絹の特別な材料特性を考えると、世界中の研究所では、商業用、軍事および産業用アプリケーションのための合成絹の繊維を製造する紡糸プロセスを理解し、模倣するために争って。研究室で人工的なクモの糸を紡績する主な課題の一つは、シルク生産腺からの繊維の押出し時に発生する生化学的プロセスの完全な理解を伴います。
ここでは、7種類のシルク生産のメジャーとマイナーampullate腺を含むcobweavingクロゴケグモ、から腺を5,6、小管状の[合成の卵のケースのシルク] [ドラグラインと足場絹を製造している] 7の単離のための方法を提示、8、鞭毛状の[COB -織工の未知の機能]、集計[接着剤の糸を作る]、房状の[合成の獲物のラッピングと卵のケーススレッド] 9と梨状10 [アタッチメントディスクの絹を作り出す]。このアプローチは、二酸化炭素ガス、腹部から頭胸部のその後の分離、およびシルク生産腺を得るために腹部のマイクロダイセクションでクモを麻酔に基づいています。別のシルク生産腺の分離に続いて、これらの組織は、質量分析（MSまたはMS / MS）分析を識別するために、北部、およびウェスタンブロット法、定量的リアルタイムPCRを含む別個の生化学的解析、のために異なる高分子を取得するために使用することができます新しい絹タンパク質配列、絹のアセンブリの経路に関与する、または細胞培養または組織学的実験のために無傷の組織を使用するタンパク質の検索。
Protocol
Discussion
クロゴケグモから絹糸を生産腺のマイクロダイセクションのための私たちの方法論は、高度に精製されたシルク生産腺を得るために効果的な手段を提供しています。解剖は、7つの別の完全なセットシルク生産cobweaversから腺をもたらして、1.5〜3時間で完了することができます。高度に精製されたシルク腺のサンプルを得ることが選択的に別の腺で発現する遺伝子のmRNAレベルの分析、研究者の…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、ブラックウィドウのクモの糸の分子特性と題されたNSF RUIグラントMCB – 0950372によってサポートされていました。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sodium chloride | EM Science | SX0420-1 | 0.1 M in water | |
| Diethyl pyrocarbonate | Sigma | D-5758 – 5 ml | 0.1% v/v | |
| Sodium citrate | Sigma | S1804 – 1 kg | 0.015 M in water | |
| Dissecting microscope | Leica Microsystems | Leica MZ16 | ||
| Digital microscope camera | Leica Microsystems | DFC320 | Software – Leica Application Suite v2.8.1 | |
| Vannas scissors | World Precision Instruments | 500260 | ||
| Stainless steel forceps | World Precision Instruments | 501764 | Mini Dumont #M5S | |
| Insect pins | Indigo Instruments | 33414-2 | Insect pins #2 | |
| Small or large dissection dishes | Living Systems Instrumentation | DD-50-S or DD-90-S | 52 mm diameter x 18 mm H (Sylgard Depth ~6mm) or 93 mm x 22 mm | |
| Drosophila culture vials | Carolina Biological Supply Company | FR-17-3076 | Size is 31.75 mm diameter x 101.6 mm |
Riferimenti
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