腫瘍の4DライブセルイメージングのためのMAMEモデル：微小環境の相互作用に影響を与える悪性進行
Summary
我々は侵襲的な表現型への微小環境に影響を与える進行中の乳房の腫瘍細胞と他の細胞間の相互作用をリアルタイムでライブセルイメージングのための3D共培養モデルを開発しました。これらのモデルは、パラクリン誘起分解、ケモカイン/サイトカインと侵襲性に関与するキナーゼ経路を標的とする薬剤の臨床画面として使用できます。
Abstract
我々は長期的MAME（M ammary rchitecture と m icroenvironment eの ngineering）3D共培養モデルを開発し、細胞のリアルタイムで生細胞イメージングのためにそれらを使用している：細胞の相互作用。私たちの全体的な目標は、侵襲的な表現型への進行を勉強するために侵入前の乳房病変のアーキテクチャを要約するモデルを開発することでした。具体的には、浸潤性乳管癌の上皮内乳房上皮細胞の進行を増強または低減に関与している腫瘍微小環境のプレ悪性の乳房上皮細胞の変異体および他の細胞型の間の相互作用を分析するモデルを開発しました。現在までに研究された他の細胞型は、上皮細胞、線維芽細胞、マクロファージ、血液とリンパの微小血管内皮細胞である。中に乳房内の細胞の相互作用を再現するように設計されているMAMEのモデルに加えて、癌の進行は、我々は前立腺癌の進行に匹敵するモデルを開発しました。
ここでは、ライブセルイメージングやin situで乳管癌（DCIS）時間の経過とともに浸潤表現型の細胞と線維芽細胞の共培養の推移をフォローするための機能タンパク質分解アッセイを使用するとともに、3次元共培養を確立するための手順を説明する文化の中で23日間以上このような場合。 MAME共培養では、複数のレイヤーで構成されています。線維芽細胞をI型コラーゲンの一番下の層に埋め込まれています。その上DCIS細胞が播種されている再構成基底膜（RBM）の層を配置されます。 2％のRBMの最後の最上位層が含まれており、メディアの変更があるたびに補充されています。侵襲的な表現型への進行に関連付けられたイメージのタンパク質分解には、私がRBの中間層と混合し、コラーゲンIとDQ-IV型コラーゲンの層と混合染料急冷（DQ）蛍光マトリックスタンパク質（DQ-コラーゲンを使用しM）と共焦点顕微鏡を使用して、ライブの文化を守ってください。光のセクションは、キャプチャされ処理され、Volocity可視化ソフトウェアと3Dで再構築されます。 MAME共培養23日間で、DCIS細胞が増殖し、大規模な侵襲的な構造に合体する。線維芽細胞が移行し、これらの侵襲的な構造に組み込まれになります。コラーゲンの蛍光タンパク質分解断片が細胞内に、DCISの構造の表面に関連して発見され、また周囲のマトリックス全体に分散されています。ターゲットタンパク分解、ケモカイン/サイトカインとキナーゼ経路または共培養の細胞組成の変更はMAMEモデルが新たな治療アプローチの臨床画面として使用することができることを示唆し、侵襲性を減らすことができる薬。
Protocol
Discussion
示したように、MAME共培養は、乳房の腫瘍とその微小環境を構成するさまざまな細胞成分間の相互作用のリアルタイムでライブセルイメージングに使用することができます。我々の研究室で進行中の研究では、我々は、タンパク質分解DCISから浸潤性乳管癌への移行に関連付けられた経路と同様に、このようなケモカイン/サイトカイン/増殖因子経路として、この移行に関与するタンパク質分解…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、厚生R01 CA131990（BFSとRRM）の国立研究所によって、部分的には、サポートされていました。ライブセルイメージングは、コアがカルマノスがん研究所、ウェイン州立大学にNIHセンターの助成金によって、部分的には、P30 CA22453をサポートして顕微鏡、イメージングサイトメトリーリソースで実行され、母子保健と開発の国立研究所の出産期医学研究支部されました、ウェイン州立大学。
Materials
| Reagent/Equipment | Company | Catalogue Number | Comments |
| Reconstituted basement membrane (Cultrex) | Trevigen | 3445-005-01 | Comparable to Matrigel (BD Biosciences) |
| Collagen I | Cohesion Laboratories | 5005-B | |
| DQ-substrates (collagen I, IV) |
Invitrogen | DQ-col I-D12060 DQ-col IV D12052 |
|
| 22-mm plastic coverslips | Fisher Scientific Co. | 12-547 | Cut in half, leave in 70% ethanol for 10 min and air-dry before use. |
| Cell culture medium | Lonza | MEBM-PRF CC-3153 MEGM CC-4136 |
Phenol red–free |
| ibiTreat μ-Dish | Ibidi | 80136 | |
| Volocity software | Perkin-Elmer | Version 5.5 | Other brands of imaging software can be used to generate 3D reconstructions and movies. |
Riferimenti
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