Α-testi: Tüm Tükürük Kullanarak Hızlı Hücre içermeyen CD4 sayımı
Summary
A CD4 numaralandırma yöntemi, α-testi, hızlı ve doğru CD4 sayımları sağlamak üzere tam tükürük kullanan tarif edilmektedir. Α-test maliyetleri pennies ve bu monoklonal antikorlar, enstrümantasyon, soğutma, numunelerin taşınması gibi toplama ve kan işleme gibi teknik eğitim, pahalı reaktifler için gereksinimini ortadan kaldırır.
Abstract
HIV hastalığı izlemek için uygun fiyatlı CD4 sayımı için acil bir ihtiyaç vardır. CD4 sayımı kan hücreleri, sadece şu anda kabul edilebilir bir yöntem üzerinde CD4 ölçmek için özellikle monoklonal antikorlar zaman ve sıcaklık sınırlamaları, teknik gelişmişliği ve reaktiflerin maliyeti nedeniyle kaynak sınırlı bölgelerde, ulaşamayacağı. Yaygın olarak kullanılan bir maliyet tasarrufu ve zaman tasarrufu sağlayan laboratuvar stratejisi yerine tedbir bazı kan değerlerinin daha hesaplamaktır. Örneğin, LDL düzeyleri total kolesterol, HDL, trigliseritler ve 1 ölçülen seviyeleri kullanılarak hesaplanır. Bu nedenle, doğrudan CD4 + T hücre sayısı CD4 hesaplanması için doğru bir yöntem sağlayabilir regüle hücre içermeyen ögelerinden tanımlama ögelerinden fizyolojik ilgisi nedeniyle sayılır.
Kan girin ve CD4 + T hücreleri dolaşımdaki olmaya yazgılı olan kök hücrelerin sayısı bir kemokin CXCL12 tarafından belirlenirnd reseptörü lokomosyon 2 üzerindeki etkisi nedeniyle CXCR4. Kana kök hücre hareketin süreci ayrıca hücre yüzeyinde insan lökosit elastaz (HLE CS) ve HLE CS-reaktif aktif α 1 proteinaz inhibitörü (α 1 PI, α 1 antitripsin, SerpinA1) 3 ile düzenlenir. HIV-1 hastalığı, α 1 PI hastalığı süreçler 4 gerçekleşmemesinden dolayı inaktive edilir. HIV-1 hastalığının erken asemptomatik kategoride, aktif α 1 PI arıtılmamış, HIV-1 hasta (medyan = 12 uM ve semptomatik kategoriye 4, 5 sırasında normal düzeyinin elde edilmesi için% 100 olarak normalin altında olduğu bulunmuştur. Bu desen değil yetersiz sentezi, proteolitik inaktivasyon veya oksijenasyonu, bağışıklık inaktivasyon atfedilmiştir. Biz> 220 CD4 hücre / ul HIV-1 kişilerde, CD4 sayısı (r 2 aktif α 1 PI serum düzeyleri ile ilişkili olduğu görüldü = 0.93, p < 0.0001, n = 26) ve inaktif α 1 PI (r 2 = 0.91, p <0.0001, n = 26) 5. HIV-1 enfekte olan ve olmayan konulara α 1 PI İdaresi α 1 PI CD4 sayısının düzenleyen katılır + T hücreleri kan 3 düşündüren CD4 sayısı dramatik artış ile sonuçlanmıştır.
Stimülasyon ile, tüm tükürük aktif α 1 PI ve bu ölçüm korelasyon ölçümü bunu CD4 sayıları hesaplamak doğru bir yöntem olduğunu kanıtlayan izin vermek için yeterli seröz eksuda (plazma tükürük içine kan damarı duvarlarının geçer proteinli madde içeren) içerir. Kısaca, bu sakız veya sitrik asit gibi sialogogues tüm ağız tükürük içine serum eksudasyon uyarır. Serum eksudasyon uyararak sonra, tükürük serum α 1 PI aktivitesi elastaz aktivitesini inhibe etme kapasitesi ile ölçülür. Domuz pankreatik elastaz (KKE)elastaz bir hazır ucuz bir kaynağıdır. PPE kendine özgü substratlar, kolorimetrik peptid bir tanesi, sukinil-L-Ala-Ala-L-L-Ala-p-nitroanilid (SA yarma gelen PPE önleyen bir bire-bir kompleks oluşturarak α 1 PI bağlanır 3 NA). Oda sıcaklığında 10 dakika boyunca PPE bir satüre konsantrasyonu ile kuluçkaya tükürük tükürük tüm aktif α 1 PI için KKD'nin bağlayıcı sağlar. Aktif α 1 PI KKD'nin edilen inhibisyon PPE substrat SA 3 NA. (Şekil 1) eklenmesi ile ölçülebilir. CD4 sayımları kan hacmi (CD4 hücre / ul) cinsinden ölçülür rağmen, tükürük α 1 Pİ konsantrasyonu hacmi gün ve kişi süresince önemli ölçüde değişebilir değil tükürük hacmi beri, tükrük serum konsantrasyonu ile ilgilidir 6 kişi için. Ancak, tükürük neredeyse tüm protein serum içeriği nedeniyle ve tükürük protein içeriği mea olduğunu7 surable. Böylece, tükürük aktif α 1 PI tükürük protein içeriği bir oranı olarak hesaplanır ve α 1 PI Endeksi denir. Sonuçlar burada α 1 PI Endeksi CD4 sayıları hesaplamak için doğru ve kesin fizyolojik bir yöntem sağladığını göstermiştir sundu.
Protocol
Discussion
Seyreltilmemiş Serum median 36 mM içeren α 1 PI ve 3.6 mM α 2 makroglobulin (α 2 M) 10 kat farkı 8. Her iki protein KKD bağlanmak için yarışırlar. Bu iki özellik, konsantrasyon ve PPE yakınlığı, özellikle α 2 M 8 rakip varlığında, normal serum α 1 PI ölçebilen bir yöntem geliştirmek için istismar edilmiştir. Bu yöntem,% 0.3 serum az 50 nM μ 1 PI algılayabilir. % 2,5 serum dilüsyonunda, KKD'ler içi…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Araştırma Harry Winston Araştırma Vakfı tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Sialogogue, 0.05M citric acid | Eda’s Sugarfree Candies, 4900 Rear N.20th Street, Philadelphia, PA 19144 | Sugar-Free Lemon dropS |
| Porcine pancreatic elastase, type 1 (EC 3.4.21.36) | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63103 | E1250 |
| Succinyl-L-Ala-L-Ala-L-Ala-p-nitroanilide | Sigma-Aldrich | S4760 |
| Coomassie Brilliant Blue R-250 | Sigma-Aldrich | B7920 |
| Tissue culture-treated, 96 well microplates | Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ 07417-1886 | 35-3072 |
| Microplate Reader with filters for 405 nm and 595 nm | MTX Lab Systems, 8456 Tyco Road, Building D, Vienna, Virginia 22182 | Dynex P97277 |
Riferimenti
- Friedlander, Y., Kark, J. D., Eisenberg, S., Stein, Y. Calculation of LDL-cholesterol from total cholesterol, triglyceride and HDL-cholesterol: a comparison of methods in the Jerusalem Lipid Research Clinic Prevalence Study. Isr. J. Med. Sci. 18, 1242-1252 (1982).
- Lapidot, T., Petit, I. Current understanding of stem cell mobilization: The roles of chemokines, proteolytic enzymes, adhesion molecules, cytokines, and stromal cells. Exp. Hematol. 30, 973-981 (2002).
- Bristow, C. L., Alfano, M. α1Antitrypsin therapy increases CD4+ lymphocytes to normal values in HIV-1 patients. Soluble factors mediating innate immune responses to HIV infection. , (2010).
- Bristow, C. L., Patel, H., Arnold, R. R. Self antigen prognostic for human immunodeficiency virus disease progression. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 8, 937-942 (2001).
- Bristow, C. L., Babayeva, M. A., LaBrunda, M., Mullen, M. P., Winston, R. α1Proteinase Inhibitor regulates CD4+ lymphocyte levels and is rate limiting in HIV-1 disease. PLoS One. , (2011).
- de Almeida, P. D. V., Gregio, A. M. T., Machado, M. A. N., de Lima, A. A. S., Azevedo, L. R. Saliva Composition and Functions: A Comprehensive Review. J. Contemp. Dent. Pract. 9, 72-80 (2008).
- Edgar, W. M. Saliva: its secretion, composition and funcitons. Br. Dent. J. , 172-305 (1992).
- Bristow, C. L., Meo, F. d. i., Arnold, R. R. Specific activity of α1proteinase inhibitor and 2macroglobulin in human serum: Application to insulin-dependent diabetes mellitus. Clin. Immunol. Immunopathol. 89, 247-259 (1998).
- Pederson, E. D. Salivary levels of α2-macroglobulin, α1-antitrypsin, C-reactive protein, cathepsin G and elastase in humans with or without destructive periodontal disease. Arch. Oral Biol. 40, 1151-1155 (1995).
- Shak, S., Capon, D. J., Hellmiss, R., Marsters, S. A., Baker, C. L. Recombinant human DNase I reduces the viscosity of cystic fibrosis sputum. PNAS. 87, 9188-9192 (1990).
- LeVeque, F. G. A multicenter, randomized, double-blind, placebo-controlled, dose- titration study of oral pilocarpine for treatment of radiation-induced xerostomia in head and neck cancer patients. J. Clin. Oncol. 11, 1124-1131 (1993).
- Stevens, W. Evaluating new CD4 enumeration technologies for resource-constrained countries. Nat. Rev. Microbiol. 6, S29-S38 (2008).
- WHO. . 2010 ART guidelines for adults and adolescents – evidence map. , (2010).
