Le lapin de sang-shunt modèle pour l'étude de aiguë et les séquelles tardives de hémorragie méningée: Aspects techniques

Summary

The experimental intracranial pressure-controlled blood shunt subarachnoid hemorrhage (SAH) model in the rabbit combines the standard procedures — subclavian artery cannulation and transcutaneous cisterna magna puncture, which enables close mimicking of human pathophysiological conditions after SAH. We present step-by-step instructions and discuss key surgical points for successful experimental SAH creation.

Abstract

Lésion cérébrale précoce et le vasospasme cérébral retardé à la fois contribuer à des résultats défavorables après une hémorragie méningée (SAH). Modèles animaux reproductibles et contrôlables qui simulent les conditions sont actuellement rares. Par conséquent, de nouveaux modèles sont nécessaires afin de reproduire les conditions physiopathologiques humaines résultant de SEP.

Ce rapport décrit les nuances techniques d'un modèle de SEP sang-shunt lapin qui permet un contrôle de la pression intracrânienne (PIC). Une dérivation extracorporelle est placée entre le système artériel et l'espace sous-arachnoïdien, ce qui permet examinateur indépendant SAH dans un crâne de fermeture. Étape par étape les instructions de procédure et de l'équipement nécessaire sont décrits, ainsi que les considérations techniques pour produire le modèle de la mortalité et une morbidité minimale. Des détails importants nécessaires pour la création chirurgicale réussie de ce modèle robuste, simple et cohérente SAH lapin ICP-contrôlée sont décrits.

Introduction

Hémorragie hémorragie méningée (HSA) est l'une des plus mortelles conditions neuropathologiques, conduisant souvent à des dommages ou la mort ¹ neurologiques permanentes. Des recherches antérieures ont mis l'accent sur ​​le vasospasme cérébral retardé (DCVS) que l'étiologie primaire des déficits neurologiques associés à la SEP ^2. Cependant, les pauvres en général les résultats cliniques des patients souffrant de SEP après le traitement du vasospasme a conduit à une expansion de l'axe de recherche pour inclure les effets de la petite lésion cérébrale (EBI) après SAH ^3. Une meilleure compréhension de l'importance à la fois de EBI et DCVS en contribuant à de mauvais résultats cliniques après SAH est essentiel pour le développement de stratégies thérapeutiques plus efficaces.

Jusqu'à maintenant, l'injection de sang autologue simple et double dans la grande citerne a été la méthode standard pour SAH induction pour l'étude de DCVS ^2-6. Bien que couramment utilisé dans les études antérieures,ce modèle très probablement ne pas reproduire les principaux changements neuropathologiques de la SEP induit EBI ^7. En revanche, la perforation endovasculaire est connu pour produire des modifications physiopathologiques aiguës sévères qui reproduisent partiellement les symptômes de l'EBI ^7.

Ce rapport décrit un nouveau modèle de lapin de SAH conçu pour permettre une enquête de deux EBI et DCVS, ce qui permet une caractérisation plus précise de la pathologie SEP-induite _^8-10. Avec la technique décrite, modèle standard grande citerne est adapté en connectant le système artériel de l'artère sous-clavière et la grande citerne via un shunt extracorporelle. La circulation du sang est ainsi liée à la physiologie du lapin et entraîné par la différence de pression entre le sang artériel et de la pression intracrânienne. Le saignement s'arrête lorsque la pression intracrânienne (PIC) est égale à la pression artérielle diastolique et le sang dans le système de shunt coagule. Utilisant l'hôte & #8217; s physiologie réduit examinateur dépendant SAH induction, ce qui conduit à un modèle plus cohérent de SEP qui produit de façon fiable à la fois EBI et phénotypes DCVS ^3,8-10.

Protocol

Trois mois vieilles femelles lapins néo-zélandais pesant 2.5-3.5 kg ont été utilisés pour cette procédure. L'étude a été réalisée en conformité avec les Instituts nationaux de la santé des lignes directrices pour les soins et l'utilisation des animaux de laboratoire et avec l'approbation du Comité du canton de Berne, Suisse (approbation n ° 105/13) de protection des animaux. Toutes les interventions chirurgicales ont été réalisées dans des conditions stériles à l'Institut de chirurgi…

Representative Results

Le modèle de shunt de sang de lapin de SAH décrit dans ce rapport produit EBI dans l'hippocampe (figure 2A, B), le cortex basale (Figure 2A, B), et le système vasculaire cérébral (figure 2C) dès 24 h après la blessure et représente une caractéristique distribution du sang (figure 2D) 8. En outre, le modèle déclenche modérée à des degrés sévères de DCVS sur trois jours après SAH induction (figure 3)…

Discussion

Le modèle de dérivation produit pathologie similaire à celle observée chez l'homme après aiguë SAH ^3,8,10. Il a été suggéré que EBI peut exacerber, maintenir et même déclencher DCVS ^12, et que ce tel modèle peut aider à enquêter sur les phases précoces et tardives DCVS, y compris les interactions EBI et DCVS suivantes SAH. En particulier, reproductible in vivo DCVS techniques de surveillance, y compris DSA ^13, calculé angiographie par tomographie ^14,</s…

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments/Description
Equipment
operation microscope	Zeiss, Jena, Germany	Zeiss, OPMI-MD surgical microscope
surgical equipment	B. Braun, Germany	forceps medical n°5, vessel sciccors 8cm, microclip 4mm
respirator	Hugo Sachs
hair clipper	3M Surgical Clipper	Starter Kit 9667A
body warm plate	FHC
blood gas analyzer	Radiometer, Copenhagen, Denmark	ABL 725
cardiac monitoring	Camino Multi-Parameter Monitor, Integra, Plainsboro, NJ, US	AP-05
software analysis	BIOPAC Systems, Inc., Goleta, CA, USA	Biopac MP100 and acqKnowledge software,version 3.8.1
software analysis	ImagePro Discovery, MediaCybernetics, Silver Spring, MD, USA	image-Pro Plus version
angiography apparatus	DFP 2000 A-Toshiba	MIIXR0001EAA
ICP monitor	Camino Laboratories, San Diego, CA, USA	ICP monitor, Model 110-4B
blood flow monitor	Oxford Optronix Ltd., Oxford, UK	CAL KIT microsphere solution
laser-Doppler flowmetry fine needle probes	Oxford Optronix Ltd., Oxford, UK	MNP110XP, 0.48 mm diameter
pressure tube	B. Braun, Germay	PE 1.0 mm × 2.0 mm
anesthesia monitor	GE Medical Systems, Switzerland	Datex S5 Monitor
Material
20 G vascular catheter	Smiths Medical	Jelco i.v. catheter, REF 4057
5.5F three-lumen central venous catheter	Connectors, Tagelswangen, Switzerland	silicone catheter STH-C040
22Gx40mm needle	Emergo Group Inc., Netherlands
high-speed microdrill	Stryker, Solothurn, Switzerland	5400-15
bone wax	Ethicon, Johnson & Johnson,NJ, USA	ETHW31G
bipolar forceps	Aesculap, Inc., PA, US	US349SP
Ketamin			Any generic product
Xylazine			Any generic product
Buprenorphine			Any generic product
Fentanyl			Any generic product
transdermal fentanyl matrix patches			Any generic product
Lidocaine 1%			Any generic product
4% papaverin HCl			Any generic product
Neomycin sulfate	Research Organics Inc., OH, USA		Any generic product
Povidone-iodine			Any generic product
0.9% sodium chloride			Any generic product
Iopamidol	Abott Laboratories, IL, USA		Any generic product
3-0 resorbable suture	Ethicon Inc., USA	VCP824G
5-0 non absorbable suture	Ethicon Inc., USA	8618G
4-0 polyfilament sutures	Ethicon Inc., USA	VCP284G