Opprettelse av mage Adheranser i Mus

Summary

Abdominal adhesions that form after surgery are a major cause of pain, infertility, and hospitalization and reoperation for small bowel obstruction. Our surgical procedure for creating abdominal adhesions in mice is a reliable tool to study the mechanisms underlying the formation of adhesions.

Abstract

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or intraabdominal infection. The precise mechanisms underlying adhesion formation are poorly understood. Many compounds and physical barriers have been tested for their ability to prevent adhesions after surgery with varying levels of success. The mouse and rat are important models for the study of abdominal adhesions. Several different techniques for the creation of adhesions in the mouse and rat exist in the literature. Here we describe a protocol utilizing abrasion of the cecum with sandpaper and sutures placed in the right abdominal sidewall. The mouse is anesthetized and the abdomen is prepped. A midline laparotomy is created and the cecum is identified. Sandpaper is used to gently abrade the surface of the cecum. Next, several figure-of-eight sutures are placed into the peritoneum of the right abdominal sidewall. The abdominal cavity is irrigated, a small amount of starch is applied, and the incision is closed. We have found that this technique produces the most consistent adhesions with the lowest mortality rate.

Introduction

Abdominal adhesjoner er et skjema av arrvev som dannes i magen som respons på inflammasjon, typisk etter kirurgi eller intraabdominal infeksjon. Voksninger er en viktig årsak til kroniske magesmerter og infertilitet, og er den vanligste årsaken til tynntarmsobstruksjon ^en. Tilstedeværelsen av adhesjon gjør å utføre en andre bukoperasjon vanskeligere og øker sannsynligheten for komplikasjoner ^2.

Til tross for mange års forskning, forblir mekanismene bak dannelsen av sammenvoksn dårlig forstått. Det er kjent at en første skade på peritoneal overflaten bevirker en utsondring av fibrin-rik væske, som deretter danner en propp som binder overflatene av tarm og bukveggen sammen ^tre. Senere, fibroblaster og andre celler vandrer inn i klebemidlet plass og utsondre bindevev ^4. Over måneder til år vedheft modnes ved å utvikle blodårer og nerver <sup> 5.

Flere kommersielle produkter finnes som er designet for å redusere dannelsen av sammenvoksninger etter abdominal kirurgi (f.eks Seprafilm). Alle disse produkter virke som mekaniske barrierer og stoppe adhesjonsdannelse ved å hindre fysisk kontakt mellom sløyfer av tarm og bukveggen ^6,7. Til tross for bevis fra en kontrollert studie som en kirurgisk adhesjonsbarriere reduserer dannelsen av sammenvoksn ^8, mange kirurger anekdotisk har vært fornøyd med effekten av mekanisk barriere produkter.

Foreløpig er det ingen legemiddelbasert anti-vedheft terapier, som gjenspeiler det faktum at de nøyaktige prosesser involvert i heft formasjon er dårlig forstått. Utvikling av en behandling som er spesielt rettet mot mobilnettet eller molekylære agenter involvert i dannelsen av sammenvoksninger vil kreve en bedre forståelse av de hendelser som er involvert i dannelsen av vedheft. flere gruppes har identifisert molekylære stier som kan være viktige for vedheft dannelse ^9-11. Dyremodeller gir et flott miljø for å studere dannelsen av sammenvoksninger. Mange studier har blitt publisert som beskriver den kirurgiske etableringen av vedheft i flere dyr, særlig rotter og mus ^6,12-14. Gitt vår erfaring med å studere fibrose hos mus og den store tilgjengeligheten av transgene mus og musebaserte antistoffer, valgte vi den musen som vår modell for studiet av sammenvoksninger. Heri, rapporterer vi den teknikken som vi har utviklet til reproduserbart og pålitelig skape abdominal sammenvoksninger i musen.

Protocol

Følgende protokoll er godkjent av Stanford University Institutional Animal Care og bruk Committee (IACUC) og er i samsvar med alle institusjonelle etiske retningslinjer om bruk av forsøksdyr. 1. Opprettelse av mage Adheranser Start mus på antibiotika grøtdiett en uke før prosedyren. Autoklav kirurgiske instrumenter og pre-varm saltvann vanning løsning. Anesthetize musen med 2% inhalert isofluran. Ved hjelp av en hårklipper etterfulgt av en rask…

Representative Results

På syv dager etter operasjonen, cecum og eventuelt stigende tykktarm, lever, og ledd av tynntarm bør være tilhenger til høyresidig bukveggen. (Figur 8) skåret vev kan bygges og seksjonert og vil gi gode histologiske lysbilder. (Figur 11, 12) Når prosedyren er utført på riktig måte, bør 100% av musene har betydelige sammenvoksninger på syv dager. Dødelighet bør være mindre e…

Discussion

De kritiske trinnene i denne fremgangsmåten er: grundig sliping cecum uten å forårsake perforering, plassere sting i mageveggen, og bruke riktig mengde stivelse. Bare gjelder sandpapir til cecum, eller til en liten bestemt del av tarmen. Bred bruk av sandpapir på store mengder tynntarm tendens til å forårsake betydelig ileus. Vær nøye med å slipes Blindtarm med nok kraft at overflaten blir ru, men ikke så mye at vegg tårer. Å finne denne balansen kan ta litt tid. Alltid håndtere tarmen forsiktig og unngå ?…

Materials

Fisherbrand Absorbent Underpads, 20" x 24"	Fisher Scientific	14-206-62
Polylined Sterile Field, 18" x 24"	Busse Hospital Disposables	696	Cut a rectangular hole of the appropriate size
Isothesia isoflurane	Henry Schein	050033
Fisherbrand Sterile cotton gauze pad, 4" x 4"	Fisher Scientific	22-415-469
Puralube petrolatum ophthalmic ointment, 1/8 oz. tube	Dechra Veterinary Products	NDC 17033-211-38
Nair depilatory cream	Church & Dwight Co.	22339-05
Buprenex buprenorphine  0.3 mg/mL	Reckitt Benckiser Pharmaceuticals Inc.	NDC 12496-0757-5
1 cc insulin syringe, 27G	Becton  Dickinson	329412
Povidone Iodine Prep Solution	Medline	MDS093944H
Webcol alcohol prep swabs	Covidien	6818
General-Purpose Labarotory Labeling tape	VWR	89097-912
BioGel PI surgical gloves	Mölnlycke Health Care	ALA42675Z
Micro Forceps with teeth	Roboz	RS-5150
Fine scissors- sharp	Fine Science Tools	14060-09
Straight serrated forceps	Fine Science Tools	11050-10
Castro-Viejo needle driver	Fine Science Tools	12565-14
100 grit 1/4 sheet sandpaper	ACE Hardware	1010446	Cut into strips
4-0 silk suture, 30", SH needle	Ethicon	K831
7-0 PDS II absorbable monofilament suture, 30", BV-1 needle	Ethicon	Z135	Usually comes double-armed. Cut the suture at the midway point to generate two usable sutures.
Rice starch	MP Biomedicals	102955
0.9% Sodium Chloride Irrigation	Baxter	BHL2F7121	Warm to 37° C prior to use
10 mL syringe	Becton Dickinson	309604
6-0 Vicryl absorbable braided suture, 18", RB-1 taper needle	Ethicon	J212H
6-0 Ethilon nylon monofilament  suture, 18", P-3 needle,	Ethicon	1698G
Tegaderm Transparent Film Dressing Frame Style, 6 cm x 7 cm	3M	1624W	Cut in half lengthwise