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Medicine

Creazione di addominali aderenze nei topi

Published: August 27, 2016 doi: 10.3791/54450

Introduction

aderenze addominali sono una forma di tessuto cicatriziale che si formano nell'addome in risposta all'infiammazione, di solito dopo un intervento chirurgico o infezioni intra-addominale. Le adesioni sono una delle principali cause di dolore addominale cronico ed infertilità, e sono la causa più comune di piccola occlusione intestinale 1. La presenza di aderenze fa eseguire una seconda operazione addominale più difficile e aumenta la probabilità di complicazioni 2.

Nonostante anni di ricerca, i meccanismi alla base della formazione di aderenze sono ancora poco chiare. E 'noto che una lesione iniziale alla superficie peritoneale provoca un essudazione di liquido ricco di fibrina, che quindi forma un coagulo che lega le superfici di intestino e la parete addominale insieme 3. Successivamente, fibroblasti e altre cellule migrano nello spazio adesivo e secernono tessuto connettivo 4. Nel corso di mesi o anni l'adesione matura attraverso lo sviluppo di vasi sanguigni e nervi

Diversi prodotti commerciali esistono che sono progettati per ridurre la formazione di aderenze dopo l'intervento chirurgico addominale (ad esempio, Seprafilm). Tutti questi prodotti agiscono come barriere meccaniche e interrompere la formazione di aderenze impedendo il contatto fisico tra anse intestinali e 6,7 parete addominale. Nonostante le prove da uno studio controllato che una barriera adesione chirurgica riduce la formazione di aderenze 8, molti chirurghi anecdotally sono stati delusi con l'efficacia dei prodotti barriera meccanica.

Attualmente non ci sono terapie anti-adesione a base di droga, che riflette il fatto che i processi precisi coinvolti nella formazione di aderenze sono poco conosciuti. Lo sviluppo di una terapia che si rivolge specificamente agenti cellulari o molecolari coinvolti nella formazione di aderenze richiederà una migliore comprensione degli eventi che sono coinvolti nella formazione di adesione. Diversi gruppos hanno identificato percorsi molecolari che possono essere importanti per la formazione di aderenze 9-11. Modelli animali forniscono un ambiente eccellente per studiare la formazione di aderenze. Molti studi sono stati pubblicati che descrive la creazione chirurgica di adesione in molti animali, soprattutto il ratto e nel topo 6,12-14. Data la nostra esperienza con lo studio della fibrosi nel topo e l'ampia disponibilità di topi transgenici e gli anticorpi di topo-based, abbiamo scelto il topo come modello per lo studio di adesioni. Qui, si segnala la tecnica che abbiamo sviluppato per creare riproducibile e affidabile aderenze addominali nel topo.

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Protocol

Il seguente protocollo è stato approvato dal Comitato Istituzionale Stanford University cura degli animali e Usa (IACUC) e soddisfa tutte le linee guida etiche istituzionali per quanto riguarda l'uso di animali di ricerca.

1. Creazione di addominali aderenze

  1. Avviare il mouse sulla dieta chow antibiotico una settimana prima della procedura.
  2. Autoclave gli strumenti chirurgici e pre-caldo la soluzione di irrigazione salina.
  3. Anestetizzare il mouse utilizzando 2% isoflurano per via inalatoria.
  4. Utilizzando un tagliacapelli seguito da un breve applicazione (5 - 10 sec) di agente depilatorio, rimuovere i capelli dalla maggior parte della superficie dell'addome. Rimuovere accuratamente l'agente depilatorio strofinando delicatamente con una garza umida e, opzionalmente, da inzuppare con cura la parte inferiore del mouse in acqua calda. Asciugare accuratamente l'animale.
  5. Posizionare muso dell'animale nel cono del naso anestetico. Durante l'intero intervento chirurgico, monitorare attentamente la rtasso espiratory dell'animale e titolare la portata anestetico, se necessario.
  6. Utilizzare un dispositivo di riscaldamento, come ad esempio una piastra elettrica o una lampada di riscaldamento, per evitare l'ipotermia.
  7. Prima preparando l'addome, fissare il mouse con strisce di nastro posti sopra e sotto l'addome per evitare che il mouse si sposti durante l'intervento chirurgico. Disinfettare l'addome con betadine, poi seguire con il 70% di etanolo. Include tanta zona possibile nella preparazione, compresi i capelli sui bordi della zona rasata. Posizionare un telino sterile sopra il mouse. (Figura 1)
  8. Sottocutanea iniettare 0,1 mg / kg buprenorfina o 3 mg di 30 g mouse.
  9. Rendere l'incisione cutanea.
    1. A partire dalla linea mediana addominale inferiore, afferrare la pelle con una pinza e fare un taglio verticale poco profondo nella pelle usando forbici affilate.
    2. Effettuare il taglio superiormente al xifoidea con le forbici. Fare attenzione a inserire solo la pelle.
  10. Come la muscolatura addominale è nOW visibile che copre le viscere, afferrare la linea mediana della muscolatura con una pinza e con molta attenzione fare un piccolo taglio in esso usando forbici affilate. Assicurarsi di non tagliare accidentalmente in un organo addominale.
  11. Dopo aver inserito spazio peritoneale con un piccolo taglio e vedere strato muscolare allontanarsi dagli organi addominali, estendere il taglio superiormente ed inferiormente inserendo le forbici nell'apertura e accuratamente taglio in entrambe le direzioni. Estendere l'incisione dal xifoidea superiormente al di sopra della vescica inferiormente. (Figura 2)
  12. Ora che gli intestini sono esposti, individuare il cieco e delicatamente esteriorizzare esso. Evitare di afferrare il cieco con una pinza dentata o taglienti. Invece di utilizzare una pinza atraumatica come un Adson pinze dentellate.
  13. Abrasivare il cieco con carta vetrata.
    1. raschiare delicatamente tutta la superficie di entrambi i lati del cieco con 100 carta abrasiva grana per 30-60 secondi fino a quando la superficie diventa meno lucida e petecchie appeaR sulla superficie. Se il chirurgo è destro, aiuta a orientare cieco con la punta rivolta verso destra e drappeggio cieco sopra il dito indice sinistro del chirurgo. (Figura 3)
    2. Eseguire la levigatura dolcemente, come è facile provocare accidentalmente una perforazione della parete cecal sottile. Una piccola quantità di granulosità deve essere sentito come la carta vetrata viene spostato lungo la superficie cecale. Se la carta vetrata è sentita più volte prendendo piede il cieco, questo probabilmente causerà una rottura nel muro del cieco. Guarda con attenzione per assicurare che le particelle di carta vetrata non sloggiare e rimangono nell'addome, in quanto ciò potrebbe causare un eccessivo reazione da corpo estraneo.
    3. Se si verifica una rottura nel muro cecal, chiudere il procedimento e l'eutanasia dell'animale.
    4. Se un vaso sanguigno del cieco viene tagliato dalla carta vetrata e provoca emorragie, mantenere la pressione per un massimo di due minuti con una garza. Tuttavia, se il sanguinamento persiste dopo questo tempo, mettere una figura di otto 7-0 monofilamento di sutura intorno alpunto di sanguinamento. Ciò affidabile fermare l'emorragia in quasi tutti i casi. Fare attenzione a non incorporare una grande quantità di parete cecal nella sutura, in quanto questo rischia di provocare necrosi della parte interessata del muro.
  14. Ferire il diritto fianco addominale.
    1. Utilizzare una striscia di carta vetrata per abradere la superficie peritoneale del muscolo della parete laterale destra addominale. Sia più aggressivo con la levigatura qui che il cieco e continuare fino l'intera superficie della parete laterale destra addominale appare malmenato. Evitare di levigatura così forte che la pelle è visibile attraverso le aperture nello strato muscolare. (Figura 4)
    2. Utilizzando un driver ago Castro-Viejo, posto tra due e quattro otto figure-of-4-0 punti di sutura di seta nello strato muscolare della parete laterale addominale destra. Lasciare le code lunghe circa 5 mm. Fare attenzione a non catturare accidentalmente parete intestinale nella sutura. (Figura 5)
  15. Usando una siringa da 10 ml riempita wesimo riscaldato soluzione salina, irrigare gli intestini più volte. Dirigere il flusso di soluzione salina nella cavità addominale per irrigare l'interno pure. Se la superficie sotto il mouse viene bagnato, spostare il mouse o sostituire la superficie, al fine di evitare l'ipotermia.
  16. Utilizzare una garza sterile posto sopra l'incisione per assorbire l'irrigazione in eccesso.
  17. Prendere una presa di amido e cospargerlo sulla superficie della parete laterale addominale destra e su entrambi i lati del cieco. (Figura 6)
  18. Assicurarsi che non vi è alcun sanguinamento attivo. Se esiste, utilizzare una garza per applicare pressione direttamente sul punto di sanguinamento fino all'arresto. Se l'emorragia non si ferma immediatamente, posizionare una sutura emostatica come descritto sopra.
  19. Con l'estremità smussata della pinza e un dito, spingere delicatamente l'intestino nella cavità addominale. Posizionare il cieco accanto alle suture nella parete laterale addominale destra al fine di massimizzare la formazione di aderenze.
  20. Cperdere l'incisione addominale.
    1. Utilizzando 6-0 assorbibile sutura intrecciata, posizionare un punto in esecuzione nello strato muscolare nella parte superiore dell'incisione.
    2. Eseguire la sutura verso la parte inferiore dell'incisione, riunendo strato muscolare. Viaggiare in circa 3 mm e prendere 3 morsi mm con ogni nuovo punto. Fare attenzione a non prendere accidentalmente un morso di intestino pur ponendo suture.
    3. In fondo dell'incisione, lasciare un loop sutura dal morso precedente e utilizzare questo per strumento legare la sutura. Tagliare la sutura lasciando 5 mm code.
    4. Ripetere quanto sopra tre gradini con 6-0 monofilo di nylon di sutura per chiudere la pelle.
  21. Somministrare un 20 ml / kg per via sottocutanea soluzione fisiologica in bolo (circa 0,5 ml per 30 g del mouse).
  22. Usando una garza asciutta, asciugare accuratamente l'intero animale, come la pelliccia dorsale tende a bagnarsi durante l'irrigazione.
  23. Liberamente avvolgere un adesivo vestire intorno all'addome per coprire l'incisione. Fare attenzione a non vincolare la unaLe gambe di Nimal o la meccanica di respirazione con il condimento.
  24. Monitorare attentamente l'animale in quanto recupera da anestesia. Somministrare buprenorfina ogni 12 ore per 2-3 giorni dopo la procedura per il controllo del dolore.

2. La raccolta Adesione Tissue

  1. Aspetta un minimo di sette giorni dopo l'intervento iniziale. Anche in questo caso, autoclave strumenti chirurgici e anestetizzare il mouse con isoflurano.
  2. Sterilizzare l'addome con betadine seguito da 70% di etanolo. Shave e depilare capelli supplementari dal lato destro dell'addome in modo che il campione di adesione contenenti pelle non saranno coperti in capelli, che rende più difficile l'istologia.
  3. Utilizzare una incisione paramediana sinistra, dal momento intestinale è spesso bloccato per l'incisione originale. Partendo all'estremità inferiore dell'addome, circa 5 mm a sinistra del fondo dell'incisione originale, afferrare la pelle con piccole pinze dentate e tagliare nella pelle con forbici affilate. Estendere questo taglio superiorely alla cassa toracica. (Figura 7)
  4. Utilizzando le forbici, tagliare nello strato muscolare e dopo l'inserimento nello spazio peritoneale, estendere il taglio alla parte superiore e inferiore della incisione. Ci saranno tessuto adesivo causando cieco e nel piccolo intestino di aderire alla parete laterale destra dell'addome ed eventualmente anche per l'incisione originale. (Figura 8)
  5. Utilizzando le forbici e iniziare sul bordo di incisione, di sopra del livello del cieco, inizia a tagliare nella parete addominale in cerchio attorno all'area in cui l'intestino è aderente.
  6. Alternando sopra e sotto il livello del cieco, ridurre gradualmente tutto intorno l'adesione e completare il cerchio, ottenendo un "isola" della pelle e aderente parete addominale per l'intestino. (Figura 9)
  7. Sempre con le forbici, tagliare nell'intestino e separare la parte aderente dal resto delle viscere, ottenendo un sandwich di tessuto che consiste di pelle e parete addominaleda un lato, intestino sull'altro lato, e il tessuto adesivo che li collega tra. (Figura 10)
  8. Facoltativamente, utilizzare un paio di forbici a punta di separare nettamente la pelle dal muscolo parete addominale. Per l'istologia considerare lasciando la pelle allegata, ma per la digestione e l'isolamento delle cellule della pelle può essere rimosso. Se verrà utilizzato il tessuto per esame istologico, assicurarsi di rimuovere il materiale di sutura, per quanto possibile, senza disturbare troppo l'interfaccia adesivo. Per la digestione e l'isolamento di cellule è accettabile lasciare le suture in posizione fino a quando il tessuto digest viene filtrato.
  9. Dopo ablazione del tessuto adesione, eutanasia il mouse mediante metodo umanitario approvati dal comitato istituzionale uso animale.

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Representative Results

A sette giorni dopo l'intervento, il cieco e, eventualmente, colon ascendente, il fegato, e loop di piccolo intestino dovrebbe essere aderente alla parete addominale lato destro. (Figura 8) tessuto asportato può essere integrato e sezionato e produrrà ottimi vetrini istologici. (Figura 11, 12)

Quando la procedura viene eseguita correttamente, il 100% dei topi dovrebbe avere adesioni consistenti a sette giorni. La mortalità dovrebbe essere inferiore al 5%.

Figura 1
Figura 1: Preparazione per la chirurgia (a) L'animale è stato fissato con nastro adesivo e l'addome preparata con Betadine (b) Il betadine è stata cancellata con un tampone imbevuto di alcool e un telino sterile è stato posto...om / files / ftp_upload / 54450 / 54450fig1large.jpg "target =" _ blank "> Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.

figura 2
Figura 2:.. Incisione L'incisione dovrebbe estendersi dal livello della vescica al xifoidea prega di cliccare qui per vedere una versione più grande di questa figura.

Figura 3
Figura 3:. Abrasione del cieco (a) coprente il cieco sopra il dito indice sinistro con la punta rivolta verso destra permette alla base del cieco da stabilizzare il pollice sinistro (b) un livello adeguato di levigatura lascia il. cieco con una superficie ruvida che è meno lucido rispetto a prima, e con diversi punti petecchiali di sanguinamento. La cura supplementare dovrebbe essere presa durante la smerigliatura vicino al lato mesenterica, come i vasi qui sanguineranno il più vivacemente. Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.

Figura 4
Figura 4:. Abrasione della parete addominale I visceri vengono spazzati via e la superficie peritoneale della parete muscolare è levigato fino a quando non appare ruvida. Il vaso sanguigno visto appena sopra la carta vetrata nella parete addominale è frequente, ma non sanguinerà sostanzialmente. Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.

1 "> Figura 5
Figura 5:.. Posizionamento della sutura Figura di otto A seta cifra di otto suture collocato nella parete muscolare, prima di essere legato Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.

Figura 6
Figura 6:. Applicazione di amido un leggero strato di amido è spruzzato sopra la parete laterale addominale e dell'intestino. Due figure di otto punti di sutura sono visti nella parete muscolare. Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.

Figura 7
Figura 7: Incisione per il secondo intervento (a) L'incisione è iniziato appena a sinistra dell'incisione originale (b) La nuova incisione dovrebbe estendersi dal livello della vescica alla cassa toracica... Cliccate qui per vedere una versione più grande questa figura.

Figura 8
Figura 8:. L'Adesione Loops di piccolo intestino (SB) sono aderenti alla parete laterale destra e l'altro. L'incisione originale linea mediana, ora guarita, si vede (Inc). Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.

Figura 9
Trong> Figura 9: Ablazione adesione tissutale. (a) e (b) un ' "isola" della pelle e aderente parete addominale per l'intestino sottostante viene liberato tagliando in un cerchio completo intorno alla zona aderente. Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.

Figura 10
Figura 10:. Il campione di taglio attraverso l'intestino produrrà un sandwich di tessuto con dell'intestino su un lato (a) e la pelle sull'altro lato (b). I pezzi di sutura visibile dovrebbero essere rimossi se il campione deve essere utilizzato per l'esame istologico. Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.

jove_content "fo: keep-together.within-page =" 1 "> Figura 11
Figura 11:. Istologia A ematossilina e eosina (H & E) macchiato sezione di una adesione a sette giorni dopo l'intervento chirurgico che mostra la pelle e la parete addominale (in basso) collegato tramite l'interfaccia adesiva al cieco (in alto). A questo punto di tempo in anticipo il cieco è probabile aderire alla parete addominale principalmente attraverso la fibrina e altre molecole, e tessuto cicatriziale sostanziale non si è ancora formata. Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.

Figura 12
Figura 12: Imaging immunofluorescente Una sezione di adesione a sette giorni dopo l'intervento immunofluorescently macchiato di α-smooth ac muscolare.stagno, mostrando vera colorazione dei follicoli piliferi della pelle (a sinistra) e la parete muscolare del cieco (al centro), e la colorazione non specifica della superficie luminale del cieco (a destra). Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.

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Discussion

I passaggi critici di questa procedura sono: accuratamente abrasione cieco senza provocare la perforazione, suture nella parete laterale addominale, e applicando la giusta quantità di amido. applica carta vetrata Solo al cieco, o per una piccola porzione specifica dell'intestino. Ampio uso di carta vetrata su grandi quantità di piccolo intestino tende a causare una significativa ileo. Fare attenzione a raschiare il cieco con forza sufficiente che la superficie diventa ruvida, ma non così tanto che le lacrime a muro. Trovare questo equilibrio può richiedere un certo tempo. Maneggiare con cura l'intestino ed evitare di usare pinze taglienti o dentate di manipolare intestinale. E 'facile da causare accidentalmente sanguinamento afferrando la piccola mesentere intestino con una pinza o tirando l'intestino troppo con forza.

Se si verifica una rottura nel muro cecal, la procedura deve essere chiuso e l'animale eutanasia. Nella nostra esperienza, i risultati strappo cecale a morte dell'animale dopo pochi giorni, anche se lo strappo è REPAired bene. Inoltre, strappo della parete cecale provoca la fuoriuscita di feci che influenzerà la risposta infiammatoria in modo imprevedibile.

Emostasi deve essere completa al termine della procedura. Alcune navi sanguinamento riaprire e cominciare a sanguinare dopo essere comparso essersi fermato. In caso di dubbio, effettuare un assorbibile sutura monofilamento figura di otto attorno al punto di sanguinamento. Questo tipo di sutura è preferibile seta o intrecciati sutura riassorbibile perché può essere tirato se il tessuto con una resistenza minima. Tuttavia abbiamo trovato che la seta o intrecciati sutura assorbibile è più efficace nella parete laterale addominale per indurre aderenze, come monofilamento è meno infiammatoria.

Applicazione di amido al termine della procedura contribuisce ad aumentare la formazione di aderenze, ma abbiamo scoperto che una quantità eccessiva di amido provoca una reazione infiammatoria che provoca la morte. L'amido deve essere spruzzato su lightly. Non ci dovrebbe essere così tanto che si forma uno strato solido.

La prima volta che l'apprendimento di questa procedura, è comune a perdere parecchi topi. Nella nostra esperienza le più comuni cause di morte sono la disidratazione a causa di ileo causata da abrasione eccessivamente vigorosa dell'intestino, e sepsi a causa di perforazione intestinale. La morte causata da sanguinamento può verificarsi se completa emostasi non si raggiunge alla fine della chirurgia.

Se la formazione di aderenze è inadeguata, considerare l'utilizzo di abrasione più aggressiva del cieco e parete laterale destra, lasciando più amido, o l'immissione più suture sul fianco addominale. Nella nostra esperienza, in attesa di meno di una settimana prima di riaprire i risultati addome in meno di adeguata formazione di aderenze. D'altro canto, se il tasso di mortalità dei topi dopo l'intervento chirurgico è elevato, è consigliabile utilizzare abrasione meno aggressiva del cieco, ispezionare più strettamente per l'emostasi, e applicando meno amido. E 'anche importante monitorare attentamentela frequenza respiratoria del mouse durante l'intervento chirurgico. Una volta che il chirurgo guadagni esperienza con questo procedimento, la mortalità dovrebbe essere inferiore al 10%.

Questa tecnica è progettato per formare principalmente aderenze tra il cieco e la parete laterale destra addominale. Le adesioni saranno anche spesso formano tra piccolo intestino, il fegato, e l'incisione sulla linea mediana. Utilizzando questa tecnica di solito non causare aderenze sul lato sinistro dell'addome. Una limitazione di questa tecnica è che aderenze tra intestino e la parete addominale è più probabile che forma di aderenze tra anse intestinali. Inoltre, non è suscettibile di provocare una totalmente congelata addome pieno di tessuto adesivo, che viene spesso visto negli esseri umani che hanno avuto più interventi chirurgici.

Come accennato nell'introduzione, molte tecniche per produrre aderenze addominali in topi e altre specie, in particolare di ratto, sono stati descritti in letteratura 6,12-14. Ci sono molti meno protoco pubblicata ls per la creazione di aderenze nei topi. Noi ipotizziamo che perché la creazione di aderenze nei topi è più difficile che nei ratti, la maggior parte dei ricercatori ha scelto di sviluppare la loro tecnica nel ratto. Tuttavia, a causa della maggiore disponibilità di topi transgenici e anticorpi anti-topo, riteniamo che sia utile avere un modello robusto per la creazione adesione nei topi, nonostante la maggiore difficoltà tecnica. Abbiamo sviluppato questo protocollo dopo aver provato molti dei protocolli di ratto pubblicato. Abbiamo trovato che i metodi per creare aderenze nel ratto, come l'uso di elettrocauterizzazione sulla cieco, spesso causa di topi a morire. Non siamo stati soddisfatti con la densità di aderenze prodotti con tecniche che utilizzano un unico intervento, come immissione laterali pulsanti ischemici solo, oppure solo abrasione cieco. La tecnica che presentiamo qui rappresenta una combinazione di interventi che abbiamo trovato, attraverso tentativi ed errori, per produrre aderenze costantemente riducendo al minimo la mortalità.

content "> Poiché questa tecnica provoca costantemente il tessuto adesivo a formare tra il cieco e la parete laterale, crediamo che sia ideale per interventi di test progettati per ridurre la formazione di aderenze. Anche questa tecnica può essere usata per esplorare i percorsi molecolari e tipi di cellule che sono coinvolti nella formazione di aderenze. Il tessuto adesione può essere facilmente asportato e preparati per l'istologia, e rendimenti eccellenti immagini istologiche (figure 11, 12).

Alcuni ricercatori possono desiderare un modello in cui adesioni costituiscono meno del 100% del tempo. Tralasciando l'applicazione di amido ridurrà il tasso di adesione a circa 80%. Diminuendo il numero di punti di sutura in seta collocati nella parete laterale destra addominale ridurrà ulteriormente il tasso di adesione.

Nella nostra esperienza, settimo giorno dopo l'intervento chirurgico è il primo punto temporale in cui l'intestino è costantemente aderente alla parete addominale. Tuttavia, altri punti di tempo possono essere più rilevanti a secondail focus del progetto. Ad esempio, i ricercatori interessati alla migrazione dei neutrofili e macrofagi nello spazio adesione potrebbero voler raccogliere il tessuto nei primi cinque giorni dopo l'intervento chirurgico. D'altra parte, la deposizione di collagene da parte dei fibroblasti avviene per settimane dopo la lesione iniziale, e per questo sarà opportuno considerare tessuto in momenti intervallati per diverse settimane dopo l'intervento.

occhialini chirurgiche sono molto utili per l'ingrandimento del campo operatorio durante l'esecuzione di questa procedura. Un microscopio operatorio può anche essere utilizzato, ma limita la capacità del chirurgo per ispezionare il campo operatorio da diverse angolazioni. La procedura può anche essere eseguita senza ingrandimento affatto.

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Disclosures

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.

Acknowledgments

CDM è stata sostenuta dalla American College of Surgeons (ACS) Borsa di studio Resident Research. MSH è stato sostenuto dal California Institute for Regenerative Medicine (CIRM) formazione Fellow clinica concessione TG2-01159. MSH, HPL, e MTL sono stati sostenuti dalla società americana di chirurghi maxillo-facciale (ASMS) / maxillofacciale Chirurghi Foundation (MSF) Research Grant Award. HPL è stato sostenuto da NIH concedere R01 GM087609 e un dono di Ingrid Lai e Bill Shu in onore di Anthony Shu. HPL e MTL sono stati sostenuti dal Laboratorio Hagey Pediatrica Medicina rigenerativa e la Fondazione Oak. MTL è stato sostenuto dal / Fondo Olivier Gunn.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Fisherbrand Absorbent Underpads, 20" x 24" Fisher Scientific 14-206-62
Polylined Sterile Field, 18" x 24" Busse Hospital Disposables 696 Cut a rectangular hole of the appropriate size
Isothesia isoflurane Henry Schein  050033
Fisherbrand Sterile cotton gauze pad, 4" x 4" Fisher Scientific 22-415-469
Puralube petrolatum ophthalmic ointment, 1/8 oz. tube Dechra Veterinary Products NDC 17033-211-38
Nair depilatory cream Church & Dwight Co. 22339-05
Buprenex buprenorphine  0.3 mg/ml Reckitt Benckiser Pharmaceuticals Inc. NDC 12496-0757-5
1 cc insulin syringe, 27 G Becton Dickinson 329412
Povidone Iodine Prep Solution Medline MDS093944H
Webcol alcohol prep swabs Covidien 6818
General-Purpose Labarotory Labeling tape VWR 89097-912
BioGel PI surgical gloves Mölnlycke Health Care ALA42675Z
Micro Forceps with teeth Roboz RS-5150
Fine scissors- sharp Fine Science Tools 14060-09
Straight serrated forceps Fine Science Tools 11050-10
Castro-Viejo needle driver Fine Science Tools 12565-14
100 grit 1/4 sheet sandpaper ACE Hardware 1010446 Cut into strips
4-0 silk suture, 30", SH needle Ethicon K831
7-0 PDS II absorbable monofilament suture, 30", BV-1 needle Ethicon Z135 Usually comes double-armed. Cut the suture at the midway point to generate two usable sutures.
Rice starch MP Biomedicals 102955
0.9% Sodium Chloride Irrigation Baxter BHL2F7121 Warm to 37 °C prior to use
10 ml syringe Becton Dickinson 309604
6-0 Vicryl absorbable braided suture, 18", RB-1 taper needle Ethicon J212H
6-0 Ethilon nylon monofilament  suture, 18", P-3 needle,  Ethicon 1698G
Tegaderm Transparent Film Dressing Frame Style, 6 cm x 7 cm 3M 1624W Cut in half lengthwise

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Medicina anatomia chirurgia mouse adesione addominale ostruzione del piccolo intestino la fibrosi cicatrici
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Marshall, C. D., Hu, M. S., Leavitt, More

Marshall, C. D., Hu, M. S., Leavitt, T., Barnes, L. A., Cheung, A. T. M., Malhotra, S., Lorenz, H. P., Longaker, M. T. Creation of Abdominal Adhesions in Mice. J. Vis. Exp. (114), e54450, doi:10.3791/54450 (2016).

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