Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Oprichting van abdominale verklevingen in Muizen

Published: August 27, 2016 doi: 10.3791/54450

Introduction

Abdominale adhesies zijn een vorm van littekenweefsel die zich in de buik in reactie op ontsteking, gewoonlijk na een operatie of intraabdominal infectie. Verklevingen zijn een belangrijke oorzaak van chronische buikpijn en onvruchtbaarheid, en zijn de meest voorkomende oorzaak van kleine darmobstructie 1. De aanwezigheid van adhesies maakt het uitvoeren van een tweede buikoperatie moeilijker en vergroot de kans op complicaties 2.

Ondanks jaren van onderzoek, blijven de mechanismen die ten grondslag liggen aan de vorming van verklevingen slecht begrepen. Het is bekend dat een initiële verwonding aan het peritoneale oppervlak veroorzaakt een afscheiding van fibrine-rijke vloeistof, die vervolgens vormt een stolsel dat het oppervlak van de darm en de buikwand elkaar 3 bindt. Later, fibroblasten en andere cellen migreren in de lijm ruimte en uitscheiden bindweefsel 4. Gedurende maanden tot jaren de hechting rijpt door het ontwikkelen bloedvaten en zenuwen

Verschillende commerciële producten bestaan ​​die zijn ontworpen om de vorming van verklevingen na een buikoperatie (bijvoorbeeld Seprafilm) verminderen. Al deze producten dienen als mechanische barrières en stop adhesies door het voorkomen van fysiek contact tussen de lussen van de darm en de buikwand 6,7. Ondanks aanwijzingen bij een gecontroleerd onderzoek met een chirurgische adhesie barrière vermindert de vorming van verklevingen 8, anekdotische veel chirurgen teleurgesteld met de effectiviteit van mechanische barrière producten.

Er zijn nog geen medicamenteuze anti-adhesie therapieën, waarbij het feit dat de precieze processen van vorming van verklevingen slecht begrepen weerspiegelt. Het ontwikkelen van een therapie gericht tegen cellulaire of moleculaire middelen betrokken bij de vorming van verklevingen zal een beter begrip van de gebeurtenissen die betrokken zijn bij de vorming van de hechting vereisen. verschillende groeps hebben moleculaire wegen die belangrijk zijn voor de vorming van verklevingen 9-11 kunnen worden geïdentificeerd. Dierlijke modellen bieden een uitstekende omgeving voor het bestuderen van de vorming van verklevingen. Veel studies zijn gepubliceerd waarin de chirurgische creatie van de hechting in verschillende dieren, met name de ratten en muizen 6,12-14. Gezien onze ervaring met het bestuderen van fibrose in de muis en de ruime beschikbaarheid van transgene muizen en muis-gebaseerde antilichamen, kozen we de muis als ons model voor de studie van verklevingen. Hierin beschrijven we de techniek die we hebben ontwikkeld om reproduceerbare en betrouwbare wijze maken abdominale adhesies in de muis.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Het volgende protocol werd goedgekeurd door de Stanford University Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC) en voldoet aan alle institutionele ethische richtlijnen met betrekking tot het gebruik van proefdieren.

1. Oprichting van abdominale verklevingen

  1. Start de muis in antibiotische chow dieet een week voorafgaand aan de procedure.
  2. Autoclaaf de chirurgische instrumenten en pre-warm het zoute irrigatie-oplossing.
  3. Verdoven van de muis met behulp van 2% geïnhaleerde isofluraan.
  4. Met een tondeuse gevolgd door een snelle applicatie (5-10 sec) van ontharingsmiddel, verwijder het haar van het grootste deel van het oppervlak van de buik. Verwijder zorgvuldig de ontharingsmiddel door voorzichtig af te vegen met natte gaas en, eventueel, door voorzichtig het onderdompelen de onderste helft van de muis in warm water. Droog het dier.
  5. Plaats snuit van het dier in het verdovingsmiddel neuskegel. Gedurende de gehele operatie zorgvuldig toezien op de respiratory snelheid van het dier en titreer de verdoving debiet als dat nodig is.
  6. Gebruik een warming-apparaat, zoals een verwarmingselement of een verwarmende lamp, om onderkoeling te voorkomen.
  7. Voorafgaand aan prepping de buik, zet de muis met afplakband boven en onder de buik geplaatst om te voorkomen dat de muis verschuift tijdens chirurgie. Ontsmet de buik met betadine, volgt daarna met 70% ethanol. Sluiten zoveel mogelijk gebied in de prep, waaronder het haar op de randen van het geschoren gebied. Plaats een steriel laken over de muis. (Figuur 1)
  8. Subcutaan injecteren 0,1 mg / kg buprenorfine of 3 ug voor een 30 g muis.
  9. Maak de huid incisie.
    1. Beginnend in de onderbuik middellijn, pakt de huid met een tang en een ondiepe verticale snede in de huid met behulp van een scherpe schaar.
    2. Draag de cut superieur aan de xyphoid met de schaar. Zorg ervoor dat alleen de huid in te voeren.
  10. Aangezien de buikspieren now zichtbaar voor de ingewanden, het grijpen van de middellijn van de spieren met een tang en heel voorzichtig een kleine snee in met behulp van een scherpe schaar. Zorg ervoor dat niet per ongeluk in een abdominale orgel te snijden.
  11. Na invoer van de peritoneale ruimte met een klein sneetje en zien de spierlaag weg te trekken van de buikorganen verlengen de snede craniaal en caudaal aan door de schaar in de opening en zorgvuldig snijden in beide richtingen. Verleng de incisie van de xyphoid superieur tot boven de blaas inferieur. (Figuur 2)
  12. Nu dat de darmen worden blootgesteld, zoek de blindedarm en voorzichtig exterioriseren het. Vermijd grijpen de blindedarm met getande of scherpe tang. In plaats daarvan een atraumatische tang zoals een getande Adson pincet.
  13. Schuur de blindedarm met schuurpapier.
    1. Voorzichtig schuren het gehele oppervlak van beide zijden van de blindedarm met 100 grit schuurpapier 30-60 seconden totdat het oppervlak minder glanzend en petechiae appear op het oppervlak. Als de chirurg rechtshandige is, helpt het om de blindedarm met de punt naar rechts te oriënteren en drapeer de blindedarm dan linker wijsvinger van de chirurg. (Figuur 3)
    2. Voer het schuren voorzichtig, omdat het gemakkelijk is om een ​​perforatie van de dunne wand blindedarmkeutels ongeluk veroorzaken. Een kleine hoeveelheid korreligheid worden gevoeld als schuurpapier wordt bewogen langs het oppervlak cecal. Als het schuurpapier herhaaldelijk gevoeld slaat aan de blindedarm, zal dit waarschijnlijk leiden tot een scheur in de cecale wand. Kijk zorgvuldig zodat deeltjes schuurpapier niet los en blijft in de buik door een te hoge vreemd lichaam reactie kan veroorzaken.
    3. Indien een scheur in de wand optreedt blindedarmkeutels beëindigen het procesverloop en inslapen het dier.
    4. Als een blindedarmkeutels bloedvat wordt geschoren door de schuurpapier en er bloedingen optreden, houdt de druk voor maximaal twee minuten met een gaasje. Echter, als bloeden aanhoudt na deze tijd, plaats een cijfer-van-acht 7-0 monofilament hechtdraad rond depunt van bloeden. Dit betrouwbare stoppen bloeden in bijna alle gevallen. Zorg ervoor dat u een grote hoeveelheid blindedarmkeutels muur op te nemen in de hechtdraad, omdat dit risico veroorzaakt necrose van het betrokken deel van de muur.
  14. Verwonden de juiste buik zijwand.
    1. Gebruik een strook schuurpapier om het peritoneale oppervlak van de spier van de rechter abdominale zijwand schuren. Agressiever het schuren hier dan aan de blindedarm en voortgezet totdat het gehele oppervlak van de rechter abdominale zijwand weergegeven opgeruwd. Vermijd het schuren zo hard dat de huid zichtbaar is door de openingen in de spierlaag. (Figuur 4)
    2. Met behulp van een Castro-Viejo naald driver, plaats tussen de twee en vier cijfer-van-acht 4-0 zijde hechtingen in de spierlaag van de rechter abdominale zijwand. Laat de staarten ongeveer 5 mm lang. Zorg ervoor dat u darmwand per ongeluk vangen in de hechtdraad. (Figuur 5)
  15. Met behulp van een 10 ml injectiespuit gevuld wet verwarmde zoutoplossing, irrigeren de darmen meerdere malen. Richt de stroom van zoutoplossing in de buikholte naar het inwendige irrigeren ook. Als het oppervlak onder de muis wordt doorweekt, beweeg de muis over of het oppervlak te vervangen, om onderkoeling te voorkomen.
  16. Gebruik een steriel gaasje geplaatst over de incisie om te genieten van overtollige irrigatie.
  17. Neem een ​​snuifje van zetmeel en strooi het op het oppervlak van de rechter abdominale wand en op beide zijden van de blindedarm. (Figuur 6)
  18. Zorg ervoor dat er geen actieve bloeden. Als er is, gebruik dan een gaasje spons om druk rechtstreeks toe te passen op het punt van het bloeden tot hij stopt. Als het bloeden niet snel stopt, plaats een hemostatische hechting zoals hierboven beschreven.
  19. Met het stompe uiteinde van de tang en een vinger duw de darm terug in de buikholte. Plaats de blindedarm naast de hechtingen in het rechter abdominale zijwand om adhesies te maximaliseren.
  20. Cverliest de incisie in de buik.
    1. Gebruik 6-0 absorbeerbare gevlochten hechtmateriaal, plaats een rijgsteek in de spierlaag aan de bovenkant van de incisie.
    2. Run de hechting beneden naar de onderkant van de incisie, het samenbrengen van de spierlaag. Reis met ongeveer 3 mm en neem 3 mm beten met elke nieuwe steek. Zorg ervoor dat u per ongeluk een hap van de darm te nemen terwijl het plaatsen van hechtingen.
    3. Onderaan de incisie, laat een lus van hechtdraad uit de vorige beet en gebruik dit instrument bind de hechtdraad. Snijd de hechtdraad verlaten 5 mm staarten.
    4. Herhaal de bovenstaande drie stappen met 6-0 nylon monofilament hechting aan de huid te sluiten.
  21. Dien een 20 ml / kg subcutaan zoutoplossing bolus (ongeveer 0,5 ml van een 30 g muis).
  22. Met behulp van een droog gaas, drogen het hele dier, als de dorsale vacht heeft de neiging om nat te worden tijdens irrigatie.
  23. Losjes wikkel een kleefverband rond de buik om de incisie te dekken. Zorg ervoor dat u het een beperkennimal's benen of ademhaling mechanica met de dressing.
  24. nauwlettend het dier als het herstelt van anesthesie. Dien buprenorfine elke 12 uur gedurende 2-3 dagen na de procedure voor pijnbestrijding.

2. Oogsten Adhesie Tissue

  1. Wacht minimaal zeven dagen na de initiële operatie. Nogmaals, autoclaaf chirurgische instrumenten en verdoven de muis met isofluraan.
  2. Steriliseer de buik met betadine, gevolgd door 70% ethanol. Scheren en ontharen extra haar van de rechterkant van de buik, zodat de hechting specimen met de huid niet zal worden besproken in haar, dat histologie bemoeilijkt.
  3. Gebruik een links paramediane incisie, omdat darm vaak vast aan de oorspronkelijke incisie. Vanaf het ondereinde van de buik, ongeveer 5 mm links van de bodem van de oorspronkelijke incisie, grijpen de huid met kleine getande pincet en in de huid met scherpe schaar knippen. Verleng deze cut superieurely de ribbenkast. (Figuur 7)
  4. Met een schaar, in de spierlaag en na het invoeren van de peritoneale ruimte snijden, uit te breiden gesneden om de boven- en onderkant van de incisie. Er wordt lijm weefsel waardoor de blindedarm en de dunne darm te houden aan de juiste zijwand van de buik en mogelijk ook de oorspronkelijke incisie. (Figuur 8)
  5. Met de schaar en vanaf de rand van de incisie, boven het niveau van de blindedarm, kan beginnen in de buikwand in een cirkel rond het gebied waar de darm is adherent.
  6. Afwisselend boven en onder het niveau van de blindedarm, geleidelijk snijden helemaal rond de hechting en vul de cirkel, waardoor een "eiland" huid en buikwand aanhanger van de darm. (Figuur 9)
  7. Opnieuw met een schaar, gesneden in de darm en scheiden de hechtende deel van de rest van de darm, waardoor een sandwich van weefsel dat bestaat uit huid en buikwandenerzijds darm aan de andere kant en lijm weefsel tussen de twee daartussen. (Figuur 10)
  8. Eventueel met een puntig schaar om de huid te sterk te scheiden van de buikwand spier. Voor histologie overwegen waardoor de huid bevestigd, maar voor de spijsvertering en celisolatie de huid kan worden verwijderd. Als het weefsel zal worden gebruikt voor histologie, zorg ervoor dat zo veel hechtmateriaal mogelijk te verwijderen zonder overmatig verstoring van de lijm interface. Voor digestie en celisolatie is het acceptabel om de hechtingen te laten staan ​​zolang het weefsel digest wordt gefilterd.
  9. Na het uitsnijden van de hechting weefsel, euthanaseren de muis met behulp van een humane wijze door uw institutioneel gebruik dier commissie goedgekeurd.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Zeven dagen na de operatie, de blindedarm en eventueel colon ascendens, lever en lussen van de dunne darm moet aanhanger van de rechterkant van de buik muur. (Figuur 8) uitgesneden weefsel worden ingebed en coupes en uitstekende histologische coupes verkregen. (Figuur 11, 12)

Als de procedure goed is uitgevoerd, moet 100% muizen aanzienlijke verklevingen ten zeven dagen. Sterk moet minder dan 5% zijn.

Figuur 1
Figuur 1: Voorbereiding voor Heelkunde (a) Het dier is vastgezet met tape en de buik klaargestoomd met betadine (b) De betadine is vereffend met een alcoholdoekje en een steriel laken is geplaatst...OM / files / ftp_upload / 54450 / 54450fig1large.jpg "target =" _ blank "> Klik hier om een ​​grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 2
Figuur 2:.. Insnijding De incisie moet zich uitstrekken van het niveau van de blaas naar de xyphoid Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figuur 3
Figuur 3:. Door slijtage van de blindedarm (a) draperen de blindedarm via linker wijsvinger met de punt naar rechts maakt de basis van de blindedarm te stabiliseren door de linker duim (b) een adequaat niveau van schuren verlaat. blindedarm met een ruw oppervlak is minder glanzend dan voorheen, en met een aantal petechiale punten van bloeden. Extra zorg moet worden genomen tijdens het schuren in de buurt van de mesenterische kant, zoals de vaten zal hier de meest flink bloeden. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figuur 4
Figuur 4:. Door slijtage van de buikwand De ingewanden worden weggevaagd en de peritoneale oppervlak van de spierwand geschuurd totdat het ruwe weergegeven. Het bloedvat gezien net boven het schuurpapier in de buikwand wordt vaak tegengekomen, maar zal niet substantieel bloeden. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

1 "> figuur 5
Figuur 5:.. Plaatsing van de cijfer-van-acht Suture Een zijden figure-van-acht hechtdraad geplaatst in de spier muur, alvorens te worden vastgebonden Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figuur 6
Figuur 6:. Toepassing van zetmeel Een dun laagje zetmeel wordt gestrooid over de buik zijwand en darmen. Twee cijfer-van-acht hechtingen worden gezien in de spier muur. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figuur 7
figuur 7: Incisie voor de tweede operatie (a) De incisie wordt net begonnen aan de linkerkant van de oorspronkelijke incisie (b) De nieuwe incisie moet zich uitstrekken van het niveau van de blaas naar de ribbenkast... Klik hier om een grotere versie te bekijken dit figuur.

Figuur 8
Figuur 8:. De Adhesie Loops van dunne darm (SB) zijn hechtend naar rechts zijwand en elkaar. De originele middellijn incisie, nu genezen, wordt gezien (Inc). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figuur 9
Trong> Figuur 9: wegsnijden Hechting Tissue. (a) en (b) een "eiland" van de huid en buikwand aanhanger van de onderliggende darm wordt bevrijd door het snijden in een volledige cirkel rond het hechtende gebied. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figuur 10
Figuur 10:. Het monster dwars door de darm een sandwich van weefsel darm opbrengst aan één zijde (a) en huid anderzijds (b). De stukken van hechtdraad zichtbaar moet worden verwijderd als het monster wordt gebruikt voor histologie. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

jove_content "fo: keep-together.within-page =" 1 "> figuur 11
Figuur 11:. Histologie een hematoxyline en eosine (H & E) gekleurde coupe van een adhesie zeven dagen na de operatie toont huid en buikwand (onder) verbonden via het kleefmiddel interface naar de blindedarm (boven). Op dit vroege tijdstip de blindedarm wordt waarschijnlijk gehecht aan de buikwand vooral door fibrine en andere moleculen, en substantiële littekenweefsel is nog niet gevormd. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figuur 12
Figuur 12: Immunofluorescente Imaging Een deel van de hechting op zeven dagen na de operatie immunofluorescently gekleurd voor α-gladde spieren ac.tin, toont ware verkleuring van de huid haarzakjes (links) en blindedarmkeutels spierwand (midden), en niet-specifieke kleuring van de blindedarm luminale oppervlak (rechts). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

De kritische stappen in deze procedure zijn: grondig schuren de blindedarm zonder dat perforatie, het plaatsen van hechtingen in de abdominale zijwand en toepassen van de juiste hoeveelheid zetmeel. Slechts schuurpapier toepassing op de blindedarm, of een klein specifiek gedeelte van de darm. Ruim gebruik van schuurpapier op grote hoeveelheden kleine darm vaak aanzienlijke ileus veroorzaken. Zorg ervoor dat de blindedarm met genoeg kracht dat het oppervlak wordt ruw schuren, maar niet zo veel dat de muur tranen. Het vinden van dit evenwicht kan enige tijd duren. Ga altijd de darm voorzichtig en vermijd het gebruik van scherpe of getande tang om darm manipuleren. Het is gemakkelijk om per ongeluk te veroorzaken bloeden door grijpen de dunne darm mesenterium met een pincet of door op de darm trekken te hard.

Als een scheur optreedt in de blindedarmkeutels wand, moet de procedure worden beëindigd en het dier gedood. In onze ervaring, blindedarm scheur leidt tot de dood van het dier na een paar dagen, zelfs als de scheur is repaIRED goed. Bovendien zal scheuren van de cecale wand morsen van ontlasting die de ontstekingsreactie op onvoorspelbare wijze beïnvloedt.

Hemostase moet volledig aan het einde van de procedure. Sommige bloeden schepen weer open en begint te bloeden na het verschijnen te zijn gestopt. Bij twijfel, plaatst een absorbeerbare monofilament figure-van-acht hechtingen rond het punt van bloeden. Dit type hechtdraad de voorkeur zijde of gevlochten absorbeerbaar hechtmateriaal omdat kan worden getrokken terwijl de weefsel met minimale weerstand. We hebben echter vastgesteld dat zijde of gevlochten absorbeerbaar hechtmateriaal is het meest effectief in de buik zijwand voor het induceren van verklevingen, zoals monofilament minder inflammatoire.

Toepassing van zetmeel aan het einde van de procedure helpt om de vorming van verklevingen te verhogen, maar we hebben ontdekt dat een overmatige hoeveelheid zetmeel een ontstekingsreactie die doodsoorzaken veroorzaakt. Het zetmeel moet worden gestrooid op lightly. Er moet niet zo veel dat het een solide laag.

Wanneer deze procedure voor het eerst leren, is het gebruikelijk om meerdere muizen verliezen. In onze ervaring de meest voorkomende doodsoorzaken zijn uitdroging als gevolg van ileus veroorzaakt door overdreven krachtige slijtage van darm en sepsis als gevolg van darmperforatie. Dood veroorzaakt door bloeden kan optreden als volledige hemostase niet wordt bereikt aan het einde van de operatie.

Als de vorming van verklevingen onvoldoende is, kunt u overwegen meer agressieve slijtage van de blindedarm en rechter zijwand, waardoor er meer zetmeel, of het plaatsen van meer hechtingen op de buik zijwand. In onze ervaring, te wachten op minder dan een week voor de heropening van de buik resulteert in minder dan voldoende hechting formatie. Anderzijds, als de mortaliteit van muizen na chirurgie is hoog, overwegen minder agressieve slijtage van de blindedarm, inspecteren nader hemostase en toepassen minder zetmeel. Het is ook belangrijk om nauwlettendde ademhaling van de muis tijdens operatie. Zodra de chirurg krijgt ervaring met deze procedure had sterfte minder dan 10% bedragen.

Deze techniek is vooral ontworpen voor verklevingen vormen tussen de blindedarm en de rechter abdominale zijwand. Verklevingen worden vaak gevormd tussen de dunne darm, lever, en de middellijn incisie. Met deze techniek meestal niet verklevingen aan de linkerkant van de buik veroorzaken. Een beperking van deze techniek is dat adhesies tussen darm en buikwand vaker vormen dan adhesies tussen lussen van de darm. Bovendien is het niet waarschijnlijk resulteren in een volledig bevroren buik vol lijm weefsel, dat vaak voorkomt bij mensen die meerdere operaties hebben.

Zoals in de inleiding, verschillende technieken voor het produceren abdominale adhesies bij muizen en andere soorten, in het bijzonder ratten, zijn in de literatuur beschreven 6,12-14. Er zijn veel minder gepubliceerde protoco ls voor de creatie van verklevingen in muizen. We speculeren dat omdat de oprichting van verklevingen in muizen is moeilijker dan bij ratten meeste onderzoekers kozen hun techniek bij de rat ontwikkelen. Vanwege de grotere beschikbaarheid van transgene muizen en anti-muizenantilichamen, wij geloven dat het waardevol om een ​​robuuste uitvoering voor hechting verwezenlijking in muizen, ondanks de grotere technische moeilijkheidsgraad. We ontwikkelden dit protocol na het proberen veel van de gepubliceerde rat protocollen. We vonden dat methoden voor het maken verklevingen bij de rat, zoals het gebruik van elektrocauterisatie op de blindedarm, veroorzaken vaak muizen sterven. We waren niet tevreden met de dichtheid van verklevingen geproduceerd door technieken die een enkele ingreep te gebruiken, zoals het plaatsen van zijwand ischemische knoppen alleen, of alleen schuren de blindedarm. De techniek die we hier presenteren is een combinatie van interventies die we vonden, met vallen en opstaan, om verklevingen consequent terwijl het minimaliseren van de mortaliteit te produceren.

content "> Omdat deze techniek consequent lijm weefsel te vormen tussen de blindedarm en de zijwand oorzaken, geloven wij dat het ideaal is om te testen acties waardoor de vorming van verklevingen verminderen. Ook deze techniek kan worden gebruikt om de moleculaire pathways en celtypes die staand betrokken bij de vorming van verklevingen. De hechting weefsel kan eenvoudig worden uitgesneden en geprepareerd voor histologie en levert uitstekende histologische beelden (figuren 11, 12).

Sommige onderzoekers een model waarin verklevingen vormen minder dan 100% van de tijd wenst. Het weglaten van de toepassing van zetmeel zal de hechting percentage op ongeveer 80% te verminderen. Verminderen van het aantal zijden hechtdraden geplaatst in de rechter abdominale zijwand de adhesietarief verder te verminderen.

In onze ervaring, de zevende dag na de operatie het eerst punt waar de darm is altijd aanhanger van de buikwand. Echter, andere tijdstippen relevanter afhankelijk zijnop de focus van het project. Zo kunnen onderzoekers geïnteresseerd in de migratie van neutrofielen en macrofagen in de hechting ruimte willen weefsel oogsten in de eerste vijf dagen na de operatie. Anderzijds, de afzetting van collageen door fibroblasten plaatsvindt weken na de initiële verwonding, en dit zal het beter zijn om weefsel op tijdstippen gespreid enkele weken na de operatie te onderzoeken.

Chirurgische loepen zijn zeer nuttig voor de vergroting van het chirurgische veld tijdens het uitvoeren van deze procedure. Een operatieve microscoop kunnen ook worden gebruikt, maar beperkt het vermogen van de chirurg om het operatiegebied te inspecteren vanuit verschillende hoeken. De procedure kan ook worden uitgevoerd zonder vergroting helemaal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen.

Acknowledgments

CDM werd gesteund door de American College of Surgeons (ACS) Resident Research Scholarship. MSH werd ondersteund door het California Institute for Regenerative Medicine (CIRM) Klinische Fellow training subsidie ​​TG2-01159. MSH, HPL, en MTL werden gesteund door de American Society of Maxillofacial Surgeons (ASMS) / kaakchirurgen Foundation (MSF) Research Grant Award. HPL werd ondersteund door NIH-subsidie ​​R01 GM087609 en een geschenk van Ingrid Lai en Bill Shu ter ere van Anthony Shu. HPL en MTL werden ondersteund door de Hagey Laboratory for Pediatric Regenerative Medicine en The Oak Foundation. MTL werd gesteund door de Gunn / Olivier Fund.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Fisherbrand Absorbent Underpads, 20" x 24" Fisher Scientific 14-206-62
Polylined Sterile Field, 18" x 24" Busse Hospital Disposables 696 Cut a rectangular hole of the appropriate size
Isothesia isoflurane Henry Schein  050033
Fisherbrand Sterile cotton gauze pad, 4" x 4" Fisher Scientific 22-415-469
Puralube petrolatum ophthalmic ointment, 1/8 oz. tube Dechra Veterinary Products NDC 17033-211-38
Nair depilatory cream Church & Dwight Co. 22339-05
Buprenex buprenorphine  0.3 mg/ml Reckitt Benckiser Pharmaceuticals Inc. NDC 12496-0757-5
1 cc insulin syringe, 27 G Becton Dickinson 329412
Povidone Iodine Prep Solution Medline MDS093944H
Webcol alcohol prep swabs Covidien 6818
General-Purpose Labarotory Labeling tape VWR 89097-912
BioGel PI surgical gloves Mölnlycke Health Care ALA42675Z
Micro Forceps with teeth Roboz RS-5150
Fine scissors- sharp Fine Science Tools 14060-09
Straight serrated forceps Fine Science Tools 11050-10
Castro-Viejo needle driver Fine Science Tools 12565-14
100 grit 1/4 sheet sandpaper ACE Hardware 1010446 Cut into strips
4-0 silk suture, 30", SH needle Ethicon K831
7-0 PDS II absorbable monofilament suture, 30", BV-1 needle Ethicon Z135 Usually comes double-armed. Cut the suture at the midway point to generate two usable sutures.
Rice starch MP Biomedicals 102955
0.9% Sodium Chloride Irrigation Baxter BHL2F7121 Warm to 37 °C prior to use
10 ml syringe Becton Dickinson 309604
6-0 Vicryl absorbable braided suture, 18", RB-1 taper needle Ethicon J212H
6-0 Ethilon nylon monofilament  suture, 18", P-3 needle,  Ethicon 1698G
Tegaderm Transparent Film Dressing Frame Style, 6 cm x 7 cm 3M 1624W Cut in half lengthwise

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Ellis, H., et al. Adhesion-related hospital readmissions after abdominal and pelvic surgery: a retrospective cohort study. Lancet. 353 (9163), 1476-1480 (1999).
  2. Brochhausen, C., et al. Current strategies and future perspectives for intraperitoneal adhesion prevention. J Gastrointest Surg. 16 (6), 1256-1274 (2012).
  3. diZerega, G. S., Campeau, J. D. Peritoneal repair and post-surgical adhesion formation. Hum Reprod Update. 7 (6), 547-555 (2001).
  4. Hellebrekers, B. W., Kooistra, T. Pathogenesis of postoperative adhesion formation. Br J Surg. 98 (11), 1503-1516 (2011).
  5. Herrick, S. E., et al. Human peritoneal adhesions are highly cellular, innervated, and vascularized. J Pathol. 192 (1), 67-72 (2000).
  6. Beyene, R. T., Kavalukas, S. L., Barbul, A. Intra-abdominal adhesions: Anatomy, physiology, pathophysiology, and treatment. Curr Probl Surg. 52 (7), 271-319 (2015).
  7. ten Broek, R. P., et al. Benefits and harms of adhesion barriers for abdominal surgery: a systematic review and meta-analysis. Lancet. 383 (9911), 48-59 (2014).
  8. Becker, J. M., et al. Prevention of postoperative abdominal adhesions by a sodium hyaluronate-based bioresorbable membrane: a prospective, randomized, double-blind multicenter study. J Am Coll Surg. 183 (4), 297-306 (1996).
  9. Cassidy, M. R., Sherburne, A. C., Heydrick, S. J., Stucchi, A. F. Combined intraoperative administration of a histone deacetylase inhibitor and a neurokinin-1 receptor antagonist synergistically reduces intra-abdominal adhesion formation in a rat model. Surgery. 157 (3), 581-589 (2015).
  10. Thaler, K., et al. Coincidence of connective tissue growth factor expression with fibrosis and angiogenesis in postoperative peritoneal adhesion formation. Eur Surg Res. 37 (4), 235-241 (2005).
  11. Hong, G. S., et al. Effects of macrophage-dependent peroxisome proliferator-activated receptor gamma signalling on adhesion formation after abdominal surgery in an experimental model. Br J Surg. 102 (12), 1506-1516 (2015).
  12. Whang, S. H., et al. In search of the best peritoneal adhesion model: comparison of different techniques in a rat model. J Surg Res. 167 (2), 245-250 (2011).
  13. Buckenmaier, C. C. 3rd, Pusateri, A. E., Harris, R. A., Hetz, S. P. Comparison of antiadhesive treatments using an objective rat model. Am Surg. 65 (3), 274-282 (1999).
  14. Rajab, T. K., et al. An improved model for the induction of experimental adhesions. J Invest Surg. 23 (1), 35-39 (2010).

Tags

Geneeskunde anatomie chirurgie muis abdominale adhesie dunne darm obstructie fibrose littekenvorming
Oprichting van abdominale verklevingen in Muizen
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Marshall, C. D., Hu, M. S., Leavitt, More

Marshall, C. D., Hu, M. S., Leavitt, T., Barnes, L. A., Cheung, A. T. M., Malhotra, S., Lorenz, H. P., Longaker, M. T. Creation of Abdominal Adhesions in Mice. J. Vis. Exp. (114), e54450, doi:10.3791/54450 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter