Entrega Intraductal ao Coelho glândula mamária

Summary

Here, we describe a technique for the localized delivery of reagents to the rabbit mammary gland via an intraductal injection. In addition, we describe a protocol for visualization and the confirmation of delivery by high-resolution ultrasound imaging of contrast agents.

Abstract

Intraductais tratamentos localizados para o cancro da mama oferecem vantagens potenciais, incluindo a entrega eficiente para o tumor e reduziu a toxicidade sistémica e efeitos adversos ^{1, 2, 3, 4, 5, 6, 7.} No entanto, vários desafios permanecem antes que esses tratamentos podem ser aplicados de forma mais ampla. O desenvolvimento e validação de terapêuticas intraductais em um modelo animal apropriado facilitar o desenvolvimento de estratégias terapêuticas intraductais para os pacientes. Enquanto a glândula mamaria do rato tem sido amplamente utilizada como um sistema modelo de desenvolvimento mamário e a tumorigénese, a anatomia é distinta da glândula humano. Um modelo animal maior, tal como o coelho, pode servir como modelo para uma melhor estrutura de glândula mamaria e no desenvolvimento terapêutico intraductal. em cOntrast para ratos, em que dez árvores ductal são espacialmente distribuídos ao longo do eixo do corpo, cada uma terminando em uma teta separada, a glândula mamária de coelho mais se assemelha a glândula humana, com vários sistemas sobrepostos ductal que a saída através de aberturas separadas em uma teta. Aqui, apresentamos métodos minimamente invasivos para a entrega de reagentes diretamente no ducto mamário coelho e para visualização do próprio parto com a ultra-sonografia de alta resolução.

Introduction

A entrega intraductal de agentes terapêuticos tem sido estudada em modelos de roedores e em início de carreira testes em humanos ^{3, 4, 5, 6, 11, 12.} A Fase I recente estudo demonstrou a segurança ea viabilidade de carboplatina intraductal ou intraductal doxorrubicina lipossomal peguilada em mulheres que aguardam mastectomia para o tratamento de câncer invasivo ^2.

Protocolos anteriores para entrega intraductal foram desenvolvidos para rato e mamárias de ratos glândulas ^{6, 7, 8, 9.} Para fins de investigação, as injecções de células de tumor intraductal e a entrega de vector lentiviral de oncogenes também foram realizados em modelos de roedoresref "> ^{13, 14, 15, 16.} No entanto, um ideal em modelo vivo do processo de entrega intraductal deve permitir o desenvolvimento de novas classes de compostos terapêuticos e facilitar a avaliação pré-clínica. diferenças anatômicas entre roedores e humanos têm complicado a tradução destes estudos.

Ao contrário dos ratos, em que cada conduta termina a uma tetina separada, da mama humano consiste de 5 a 9 ductais sistemas independentes, cada um com uma abertura separada terminando na tetina. Coelho glândulas mamárias abrigar quatro sistemas ductais independentes, cada um separadamente, acessível através de um de quatro orifícios em uma única tetina. Um modelo de coelho corresponda melhor a anatomia humana e permite o estudo da entrega da droga intraductal em um contexto mais relevante.

Aqui, usamos duas técnicas para avaliar a prestação intraductal. A co-administração de umcorante vital permite a visualização através da pele e fornece uma confirmação simples e rápida do método. Para algumas aplicações, o mapeamento de resolução mais elevado dos ductos podem ser preferidos. Nós apresentamos aqui um protocolo para ultra-sonografia das condutas através da entrega intraductal de um reagente não-alvo contraste.

Protocol

Procedimentos usando indivíduos animais foram aprovados pelo Comitê de Cuidado e Uso Institucional Animal da Universidade do Texas em Austin. 1. Pré-operatório Preparação Registe o peso do corpo de cada coelho. Tal como acontece com todos os estudos pré-clínicos, monitorar os pesos dos animais regularmente para avaliar a toxicidade potencial. Antes de se anestesiar o coelho, encher um tubo de 50 mL cónico com gel de ultra-sons comercialmente disponível e de cen…

Representative Results

Aqui, mostra-se que a entrega de reagentes intraductal contraste com as condutas mamarias de um coelho pode ser alcançado sem trauma para o tecido (Figura 2). Em coelhos, quatro sistemas ductais separadas convergem para uma tetina e, assim, podem ser acedidos individualmente e fotografada utilizando este método. aberturas ductal individuais são facilmente visualizado; Observe a marcação de uma segunda abertura ductal adjacente à conduta canulada na Figura 2…

Discussion

Este método de entrega intraductal para a glândula mamaria de coelho pode ser utilizada para reagentes de contraste para ultrassons e muitas outras soluções aquosas, incluindo corantes vitais e terapêutica. Estudos anteriores demonstraram a entrega intraductal de hormônios ^{17, 18, 19.} Em modelos de roedores, a entrega intraductal de ácidos nucleicos ^8, quimioterápicos ^6,</s…

Materials

MicroMarker non-targeted contrast reagent	VisualSonics	VS-11694
Luer Lock 1mL Syringes	BD	309628
Glycopyrrolate 0.2mg/mL	Wedgewood Compounding Pharmacy	GLYCOP-INJ013VC	6 month shelf life, supply may be limited.
Atropine Sulfate 0.5 mg/mL	Animal Health International	15320764	If glycopyrrolate is unavailable. Not to be combined with glycopyrrolate.
Ketamine HCL 100mg/mL	Animal Health International	21250699	http://www.animalhealthinternational.com/
Acepromazine 10mg/mL	Animal Health International	17640541
Xylazine 20mg/mL	Animal Health International	20101547
Yohimbine 0.2mg/mL	Animal Health International	14588965
Hair Removing Cream	Veet		Sensitive skin solution. Available through local retailers.
Blunt tip infusion needles	Sai Infusion Technology	B14-50	http://www.sai-infusion.com/collections/blunt-needles
Veterinary Pulse Oximeter	EdanUSA	VE-H100B	http://www.edanusa.com/Product/VE-H100B-Veterinary-Pulse-Oximeter.html
Warm Water Pump	Gaymar	TP700
Warm Water Blanket	Animal Health International	21232696	Maxi-Therm Lite Warming Pads
Ultrasound system	VisualSonics	Vevo 2100