Intraduktal Levering til kanin mælkekirtlerne

Summary

Here, we describe a technique for the localized delivery of reagents to the rabbit mammary gland via an intraductal injection. In addition, we describe a protocol for visualization and the confirmation of delivery by high-resolution ultrasound imaging of contrast agents.

Abstract

Lokaliserede intraduktal behandlinger for brystkræft give potentielle fordele, herunder effektiv levering til tumoren og reduceret systemisk toksicitet og bivirkninger ^{1, 2, 3, 4, 5, 6, 7.} Men stadig flere udfordringer, før disse behandlinger kan anvendes mere bredt. Udvikling og validering af intraduktal lægemidler i en passende dyremodel lette udviklingen af ​​intraduktal terapeutiske strategier for patienterne. Mens musen mælkekirtlen har været meget anvendt som et modelsystem for mammary udvikling og tumorigenese, anatomi er forskellig fra den humane kirtel. En større dyremodel, såsom kanin, kan tjene som en bedre model for mælkekirtlen struktur og intraduktal terapeutisk udvikling. I contrast til mus, i hvilken ti duktale træer er rumligt fordelt langs kroppen akse, hver ender i en separat patte, kanin brystkirtel nærmere ligner den humane kirtel, med flere overlappende duktale systemer denne udgang gennem særskilte åbninger i én patte. Her præsenteres minimalt invasive fremgangsmåder til tilsætning af reagenser direkte i kanin mamma kanal og til visualisering af leveringen selv med høj opløsning ultralydsbilleddannelse.

Introduction

Den intraduktal afgivelse af terapeutiske midler er blevet undersøgt i gnavermodeller og i begyndelsen af fase menneskelige forsøg ^{3, 4, 5, 6, 11, 12.} En nylig fase I studie demonstreret sikkerhed og muligheden for intraduktal carboplatin eller intraduktal pegyleret liposomal doxorubicin hos kvinder venter mastektomi til behandling af invasiv cancer ^2.

Tidligere protokoller for intraduktal levering er blevet udviklet til mus og rotte mælkekirtler ^{6, 7, 8, 9.} Til forskningsformål, intraduktal tumor celle injektioner og lentivirusvektoren levering af onkogener er også blevet udført i gnavermodellerref "> ^{13, 14, 15, 16.} Imidlertid bør en ideel in vivo model af den intraduktal leveranceprocessen muliggøre udvikling af nye klasser af terapeutiske forbindelser og fremme præklinisk vurdering. Anatomiske forskelle mellem gnavere og mennesker har kompliceret oversættelsen af disse undersøgelser.

I modsætning mus, i hvilken hver kanal slutter i en separat patte, den humane bryst- består af 5 til 9 uafhængige duktale systemer, hver med en separat åbning slutter ved patten. Kanin brystkirtler havnen fire uafhængige duktale systemer, hver separat tilgængelige gennem en af ​​fire åbninger i en enkelt patte. En kanin model passer bedre den menneskelige anatomi og tillader studiet af intraduktal lægemiddeladministration i en mere relevant kontekst.

Her bruger vi to teknikker til at vurdere intraduktal levering. Samtidig administration af etvitalfarvestof tillader visualisering gennem huden og giver en enkel og hurtig bekræftelse af fremgangsmåden. For nogle anvendelser kan højere opløsning kortlægning af kanalerne blive foretrukket. Vi præsenterer her en protokol til ultralydsscanning af kanalerne gennem intraduktal overdragelse af et ikke-målrettet kontrast reagens.

Protocol

Procedurer bruger forsøgsdyr er blevet godkendt af Institutional Animal Care og brug Udvalg fra University of Texas i Austin. 1. Præoperativ forberedelse Optag legemsvægt hver kanin. Som med alle prækliniske studier, overvåge dyrs vægte regelmæssigt at vurdere potentielle toksicitet. Forud for bedøvelse kaninen, fylde en 50 ml konisk rør med kommercielt tilgængeligt ultralyd gel og centrifugering ved 500 xg i 30 s; Der bør ikke være nogen synlige bobler i gel…

Representative Results

Her viser vi, at den intraduktal levering af kontrastmidler reagenser til mammae kanaler med en kanin kan opnås uden trauma til vævet (figur 2). Hos kaniner fire separate duktale systemer konvergere på én patte, og dermed kan få adgang til og filmede individuelt ved hjælp af denne metode. Individuelle duktale åbninger er let visualiseres; Bemærk pilespidsen markerer en anden duktal åbning støder op til kanylerede kanalen i figur 2B. <p clas…

Discussion

Denne metode til intraduktal levering til kanin mælkekirtlerne kan anvendes til ultralydskontrastmidler reagenser og mange andre vandige opløsninger, herunder vitale farvestoffer og terapeutiske midler. Tidligere undersøgelser har vist, intraduktal levering af hormoner ^{17, 18, 19.} I gnavermodeller, den intraduktal administration af nukleinsyrer ^8, kemoterapeutika ^6, …

Materials

MicroMarker non-targeted contrast reagent	VisualSonics	VS-11694
Luer Lock 1mL Syringes	BD	309628
Glycopyrrolate 0.2mg/mL	Wedgewood Compounding Pharmacy	GLYCOP-INJ013VC	6 month shelf life, supply may be limited.
Atropine Sulfate 0.5 mg/mL	Animal Health International	15320764	If glycopyrrolate is unavailable. Not to be combined with glycopyrrolate.
Ketamine HCL 100mg/mL	Animal Health International	21250699	http://www.animalhealthinternational.com/
Acepromazine 10mg/mL	Animal Health International	17640541
Xylazine 20mg/mL	Animal Health International	20101547
Yohimbine 0.2mg/mL	Animal Health International	14588965
Hair Removing Cream	Veet		Sensitive skin solution. Available through local retailers.
Blunt tip infusion needles	Sai Infusion Technology	B14-50	http://www.sai-infusion.com/collections/blunt-needles
Veterinary Pulse Oximeter	EdanUSA	VE-H100B	http://www.edanusa.com/Product/VE-H100B-Veterinary-Pulse-Oximeter.html
Warm Water Pump	Gaymar	TP700
Warm Water Blanket	Animal Health International	21232696	Maxi-Therm Lite Warming Pads
Ultrasound system	VisualSonics	Vevo 2100