Рассечение поджелудочной железы мыши для гистологического анализа и метаболические профили
Summary
Это видео статья предоставляет подробную демонстрацию процедуры, требуемые для успешного удаления поджелудочной железы от мыши рассечение гистологический анализ и метаболические профили.
Abstract
Мы исследовали поджелудочной железы конкретных транскрипционный фактор, 1a cre рекомбиназа; жидкий кислород стоп lox Кристен крыса саркома, глицин аспарагиновой кислоты на 12 кодон (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) мыши штамм как модель людского поджелудочного рака. Цель нашего текущего исследования — определить Роман метаболических биомаркеров прогрессирования рака поджелудочной железы. Мы выполнили, метаболические профили мочи, Кала, крови и экстракты ткани поджелудочной железы, а также гистологический анализ стадии прогрессии рака поджелудочной железы. Поджелудочной железы мыши не четко твердые органов как в организме человека, но скорее диффузно распределенных мягких тканей, который не определен, легко люди знакомы с внутренней анатомии мыши или отдельными лицами, которые имеют мало или нет опыта выполнения Анатомирование орган мыши. Целью этой статьи является предоставить подробный скачкообразно демонстрация для новичков в удаления поджелудочной железы мыши рассечение. Эта статья должна быть особенно ценной для студентов и следователи новые исследования, который требует уборки поджелудочной железы мыши путем рассечения метаболические профили или гистологических анализов.
Introduction
Мышь стала важным животной модели людского поджелудочного рака1,2. В Ptf1acre / +; LSL-красG12D / + модель мыши, Кристен, крыса саркома (K-Ras) онкогена активируется исключительно в поджелудочной железы, что приводит к инициации предраковых поражений в поджелудочной железе, известный как поджелудочной железы интраэпителиальные неоплазии (Панины), что прогресс для протока поджелудочной аденокарциномы часто называют PDACs3. Эта система модель мыши обеспечивает один из лучших доступных животных моделей для людского поджелудочного рака4,5, с дополнительным преимуществом, что Панины появляются в течение первых пяти месяцев жизни, и часто прогресс PDAC внутри один год4,5, тогда как рак поджелудочной железы чаще всего происходит в организме человека 60-70 лет.
Извлечение поджелудочной железы путем рассечения от Ptf1acre / +; LSL-красG12D / + мышей в различном возрасте позволяет для подробного продольной гистологического исследования развития рака в поджелудочной железе, начиная с самых ранних этапов Панин через прогрессии PDAC3,4 , 5. заготовка поджелудочной железы в возрасте от пяти до пятнадцати месяцев может также использоваться для подготовки ткани экстракты характеризовать глобальные изменения в поджелудочной железы4 метаболизм, возникающие во время перехода от здоровых пораженной ткани 6,7.
Эта статья представляет собой полный визуальный руководство шагов, необходимых для выполнения извлечения поджелудочной железы мыши и обеспечивает руководящие принципы для хранения поджелудочной железы для дальнейшего анализа. Это руководство будет одинаково ценны для лиц, проведение исследований на другие заболевания поджелудочной железы, в том числе диабета типа и должны быть особенно полезны для студентов и следователи, новые исследования, с участием уборки поджелудочной железы мыши с помощью рассечение метаболические профили или гистологических анализов.
Protocol
Representative Results
Discussion
Значение в отношении существующих методов
В то время как существуют другие неофициальные видео мыши Анатомирование, это видео статья предусматривает первого профессионального качества, рецензируемых, демонстрация всех подробные шаги, необходимые для извлечения и уборки п…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
MAK признает поддержку для этой работы национальных институтов здравоохранения / Национальный институт рака предоставить номер – 1R15CA152985-01A1. Этот проект также был поддержан Майами Undergraduate исследований премии программы университета, возможности доктора-бакалавриат университета Майами для стипендиальной программы и программы ученых летнего университета Майами.
Materials
| Glass Jar | Corning | 3140-150 | The glass jar used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| Lid of Glass Jar | Corning | 9985-150 | The glass jar lid used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| 15 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339650 | |
| Surgical Scissors | Fisher Scientific | 9201 | |
| Squeeze bottle | Fisher Scientific | 03-409-10DD | |
| 100% Ethanol | Fisher Scientific | 22-032-103 | |
| Formalin | Fisher Scientific | 245-684 | |
| Foam Boards | Therapak | 562908 | |
| Forceps | Fisher Scientific | 200205SHN | |
| 1 mL 21G Syringes | BD Biosciences | 309624 | |
| 50 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339652 | |
| 2.0 mL Microcentrifuge Tubes | Fisher Scientific | 02-681-258 | |
| Surgical Pads | Fisher Scientific | S67011 | |
| T-Pins Length: 2" | Advance Store Products | X32T-05 | |
| Sterilizing Wipes | Professional Disposables International Inc. | Q85084 | |
| Sharps Container | Fisher Scientific | 14-827-122 | |
| Analytical Balance | Marshall Scientific | ME-AE200 | |
| 4L Dewar | Taylor-Wharton | 4LD | |
| Shallow Wide Mouth Dewar | Fisher Scientific | F3087-V | |
| Floating Microtube Rack | VWR | 60986-100 | |
| Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile | Fisher Scientific | 10-500-25 | |
| Isothesia (Isoflurane) | Henry Schein Animal Health | 050033 | |
| Liquid Nitrogen | Wright Brothers | NIT-60-XX | |
| Mouse Kras Strain | The Jackson Laboratory | OO8179 | |
| Mouse Cre Strain | MMRRC | OOO435-UNC |
Riferimenti
- Fesinmeyer, M. D., Austin, M. A., Li, C. I., De Roos, A. J., Bowen, D. J. Differences in Survival by Histologic Type of Pancreatic Cancer. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 14 (7), 1766-1773 (2005).
- Jackson-Grusby, L. Modeling cancer in mice. Oncogene. 21 (35), 5504-5514 (2002).
- Heid, I., et al. Early requirement of Rac1 in a mouse model of pancreatic cancer. Gastroenterology. 141 (2), 719-730 (2011).
- Hingorani, S. R., et al. Preinvasive and invasive ductal pancreatic cancer and its early detection in the mouse. Cancer cell. 4 (6), 437-450 (2003).
- Shi, C., et al. KRAS2 Mutations in Human Pancreatic Acinar-Ductal Metaplastic Lesions Are Limited to Those with PanIN Implications for the Human Pancreatic Cancer Cell of Origin. Mol Cancer Res. 7 (2), 230-236 (2009).
- LaConti, J. J., et al. Distinct serum metabolomics profiles associated with malignant progression in the KrasG12D mouse model of pancreatic ductal adenocarcinoma. BMC Genomics. 16 (1), 1-10 (2015).
- Ludwig, M. R., et al. Surveying the serologic proteome in a tissue-specific kras(G12D) knockin mouse model of pancreatic cancer. Proteomics. 16 (3), 516-531 (2016).
- Taylor, D. K., Mook, D. M. Isoflurane Waste Anesthetic Gas Concentrations Associated with the Open-Drop Method. J Am Assoc Lab Anim Sci. 48 (1), 61-64 (2009).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).
- Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. A protocol for islet isolation from mouse pancreas. Nature Protocols. 4 (11), 1649-1652 (2009).
- Auer, H., et al. The effects of frozen tissue storage conditions on the integrity of RNA and protein. Biotech Histochem. 89 (7), 518-528 (2014).
- Ma, J., Leung, L. S. Limbic System Participates in Mediating the Effects of General Anesthetics. Neuropsychopharmacology. 31, 1177-1192 (2006).
- Ijichi, H., et al. Aggressive pancreatic ductal adenocarcinoma in mice caused by pancreas-specific blockade of transforming growth factor-β signaling in cooperation with active Kras expression. Genes Dev. 20 (22), 3147-3160 (2006).
- Abiatari, I., et al. Moesin-dependent cytoskeleton remodelling is associated with an anaplastic phenotype of pancreatic cancer. J Cell Mol Med. 14 (5), 1166-1179 (2010).
- Goodpaster, A. M., Romick-Rosendale, L. E., Kennedy, M. A. a Statistical significance analysis of nuclear magnetic resonance-based metabonomics data. Analytical biochemistry. 401, 134-143 (2010).
- Yadav, D., et al. Idiopathic Tumefactive Chronic Pancreatitis: Clinical Profile, Histology, and Natural History After Resection. Clin Gastroenterol Hepatol. 1 (2), 129-135 (2003).
