Fare pankreas diseksiyon histolojik analiz ve metabolik profil oluşturma
Summary
Video bu makalede ayrıntılı bir gösteri diseksiyon histolojik analizi ve metabolik profil oluşturma için başarıyla bir fareden pankreas kaldırmak için gerekli yordamlar sağlar.
Abstract
Biz pankreas belirli transkripsiyon faktörü, 1a cre-recombinase soruşturma edilmiştir; füme balığı-dur-lox-Kristen sıçan sarkomu, 12 kodon aspartik asit glisin (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) fare zorlanma insan pankreas kanseri bir model olarak. Bizim mevcut çalışmalar amacı pankreas kanseri ilerleme roman metabolik biyolojik belirlemektir. İdrar, dışkı, kan ve pankreas dokusu özler yanı sıra pankreas kanseri ilerleme yerleştirmeye histolojik analizler metabolik profil oluşturma gerçekleştirdiniz. Fare pankreas insanlar gibi iyi tanımlanmış bir solid organ değil, ama oldukça kolayca bireyler ile fare iç anatomi yabancı veya az veya hiç deneyimi gerçekleştirme sahip bireyler tarafından tanımlanmış değildir havza dağıtılmış bir yumuşak doku fare organ diseksiyonu. Bu makalenin amacı ayrıntılı bir step-wise sağlamaktır diseksiyon tarafından fare pankreas kaldırma yeni başlayanlar Kılavuzu için görsel gösteri. Bu madde öğrenciler ve araştırmacılar yeni özellikle değerli diseksiyon metabolik profil oluşturma veya histolojik analizler için tarafından fare pankreas hasat gerektirir araştırma olmalıdır.
Introduction
Fare insan pankreas kanseri1,2önemli bir hayvan modeli olarak ortaya çıkmıştır. Ptf1a içindecre / +; LSI-KrasG12D / + fare modeli, sıçan sarkomu (K-Ras) onkogen pankreas İntraepitelyal Neoplazi (PanINs), bu ilerleme bilinen pankreasın prekanseröz lezyonlar inisiyasyon sonuçlanan pankreasın sadece aktif Kristen pankreas duktal Adenokanserine için genellikle PDACs3adlandırılır. Bu fare modeli sistemi insan pankreas kanseri4,5, PanINs hayat ve sık sık PDAC içinde ilerleme ilk beş ay içinde ortaya ek avantajı için en iyi mevcut hayvan modellerinden birini sağlayan bir Pankreas kanseri en sık 60-70 yaşın insanlarda ortaya çıkar, ancak yıl4,5, tek.
Pankreas diseksiyon Ptf1a dan tarafından çıkarılmasıcre / +; LSI-KrasG12D / + fareler çeşitli yaş itibariyle sağlar detaylı boyuna histolojik muayene pankreas kanseri gelişimi için en erken PanIN aşamaları ilerleme PDAC3,4 ‘ e değişen , 5. pankreas yaşları 5 ila 15 ay arasında değişen, hasat da kullanılabilir doku özleri pankreas4 metabolizması sağlıklı hastalıklı doku geçiş sırasında oluşan küresel değişiklikleri tanımlamak için hazırlamak için 6,7.
Bu yazı bir fare pankreas çekimi gerçekleştirmek için gereken adımları, tam bir görsel kılavuzu sunar ve daha fazla çözümleme için bir pankreas depolamak için yönergeler sağlar. Bu kılavuz-ecek var olmak aynı derecede değerli bireyler de dahil olmak üzere diğer pankreas Hastalıkları Araştırma tip ı diyabet ve özellikle öğrenciler ve araştırmacılar fare pankreas kullanarak hasat içeren araştırma için yeni yararlı olmalıdır diseksiyon metabolik profil oluşturma veya histolojik analizler için.
Protocol
Representative Results
Discussion
Mevcut yöntemler açısından önemi
Fare diseksiyonlarının resmi olmayan diğer videolar var iken, ilk profesyonel kalitede video bu makale sağlar, akran gözden, görsel gösteri tüm çıkış için gerekli ve fare pankreas diseksiyon10 tarafından hasat ayrıntılı adımlar . Metabolik aktivite ve insülin için ana bir organ olan pankreas ile üretim, diseksiyon ve pankreas hasat sağlayan fizyolojik özellikleri11korunması için. Pankreas izo…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
MAK kabul eder bu işten Ulusal Sağlık Enstitüleri için destek / Ulusal Kanser Enstitüsü vermek sayı – 1R15CA152985-01A1. Bu proje aynı zamanda Miami Üniversitesi lisans Araştırma Ödülü programı, Miami Üniversitesi doktora-lisans fırsatları burs programı ve Miami Üniversitesi yaz bilim programı tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Glass Jar | Corning | 3140-150 | The glass jar used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| Lid of Glass Jar | Corning | 9985-150 | The glass jar lid used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| 15 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339650 | |
| Surgical Scissors | Fisher Scientific | 9201 | |
| Squeeze bottle | Fisher Scientific | 03-409-10DD | |
| 100% Ethanol | Fisher Scientific | 22-032-103 | |
| Formalin | Fisher Scientific | 245-684 | |
| Foam Boards | Therapak | 562908 | |
| Forceps | Fisher Scientific | 200205SHN | |
| 1 mL 21G Syringes | BD Biosciences | 309624 | |
| 50 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339652 | |
| 2.0 mL Microcentrifuge Tubes | Fisher Scientific | 02-681-258 | |
| Surgical Pads | Fisher Scientific | S67011 | |
| T-Pins Length: 2" | Advance Store Products | X32T-05 | |
| Sterilizing Wipes | Professional Disposables International Inc. | Q85084 | |
| Sharps Container | Fisher Scientific | 14-827-122 | |
| Analytical Balance | Marshall Scientific | ME-AE200 | |
| 4L Dewar | Taylor-Wharton | 4LD | |
| Shallow Wide Mouth Dewar | Fisher Scientific | F3087-V | |
| Floating Microtube Rack | VWR | 60986-100 | |
| Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile | Fisher Scientific | 10-500-25 | |
| Isothesia (Isoflurane) | Henry Schein Animal Health | 050033 | |
| Liquid Nitrogen | Wright Brothers | NIT-60-XX | |
| Mouse Kras Strain | The Jackson Laboratory | OO8179 | |
| Mouse Cre Strain | MMRRC | OOO435-UNC |
Riferimenti
- Fesinmeyer, M. D., Austin, M. A., Li, C. I., De Roos, A. J., Bowen, D. J. Differences in Survival by Histologic Type of Pancreatic Cancer. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 14 (7), 1766-1773 (2005).
- Jackson-Grusby, L. Modeling cancer in mice. Oncogene. 21 (35), 5504-5514 (2002).
- Heid, I., et al. Early requirement of Rac1 in a mouse model of pancreatic cancer. Gastroenterology. 141 (2), 719-730 (2011).
- Hingorani, S. R., et al. Preinvasive and invasive ductal pancreatic cancer and its early detection in the mouse. Cancer cell. 4 (6), 437-450 (2003).
- Shi, C., et al. KRAS2 Mutations in Human Pancreatic Acinar-Ductal Metaplastic Lesions Are Limited to Those with PanIN Implications for the Human Pancreatic Cancer Cell of Origin. Mol Cancer Res. 7 (2), 230-236 (2009).
- LaConti, J. J., et al. Distinct serum metabolomics profiles associated with malignant progression in the KrasG12D mouse model of pancreatic ductal adenocarcinoma. BMC Genomics. 16 (1), 1-10 (2015).
- Ludwig, M. R., et al. Surveying the serologic proteome in a tissue-specific kras(G12D) knockin mouse model of pancreatic cancer. Proteomics. 16 (3), 516-531 (2016).
- Taylor, D. K., Mook, D. M. Isoflurane Waste Anesthetic Gas Concentrations Associated with the Open-Drop Method. J Am Assoc Lab Anim Sci. 48 (1), 61-64 (2009).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).
- Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. A protocol for islet isolation from mouse pancreas. Nature Protocols. 4 (11), 1649-1652 (2009).
- Auer, H., et al. The effects of frozen tissue storage conditions on the integrity of RNA and protein. Biotech Histochem. 89 (7), 518-528 (2014).
- Ma, J., Leung, L. S. Limbic System Participates in Mediating the Effects of General Anesthetics. Neuropsychopharmacology. 31, 1177-1192 (2006).
- Ijichi, H., et al. Aggressive pancreatic ductal adenocarcinoma in mice caused by pancreas-specific blockade of transforming growth factor-β signaling in cooperation with active Kras expression. Genes Dev. 20 (22), 3147-3160 (2006).
- Abiatari, I., et al. Moesin-dependent cytoskeleton remodelling is associated with an anaplastic phenotype of pancreatic cancer. J Cell Mol Med. 14 (5), 1166-1179 (2010).
- Goodpaster, A. M., Romick-Rosendale, L. E., Kennedy, M. A. a Statistical significance analysis of nuclear magnetic resonance-based metabonomics data. Analytical biochemistry. 401, 134-143 (2010).
- Yadav, D., et al. Idiopathic Tumefactive Chronic Pancreatitis: Clinical Profile, Histology, and Natural History After Resection. Clin Gastroenterol Hepatol. 1 (2), 129-135 (2003).
