ऊतकीय विश्लेषण और चयापचय की रूपरेखा के लिए माउस अग्ंयाशय का विच्छेदन
Summary
इस वीडियो लेख ऊतकीय विश्लेषण और चयापचय रूपरेखा के लिए विच्छेदन द्वारा एक माउस से अग्ंयाशय को सफलतापूर्वक हटाने के लिए आवश्यक प्रक्रियाओं का एक विस्तृत प्रदर्शन प्रदान करता है ।
Abstract
हम अग्ंयाशय विशिष्ट प्रतिलेखन कारक है, 1a cre-recombinase जांच कर रहा है; लोक्स-stop-लोक्स-िईद्भस्टेन चूहा सार्कोमा, glycine में एसपारटिक एसिड से 12 codon (Ptf1acre/ LSL-KrasG12D/+) मानव अग्नाशय के कैंसर के एक मॉडल के रूप में माउस तनाव । हमारे वर्तमान अध्ययन के लक्ष्य के लिए अग्नाशय के कैंसर की प्रगति के उपंयास चयापचय के निशान की पहचान है । हम मूत्र, मल, रक्त, और अग्न्याशय ऊतक निष्कर्षों के चयापचय की रूपरेखा का प्रदर्शन किया है, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से कैंसर प्रगति चरण के लिए अग्ंयाशय के ऊतकीय विश्लेषण । माउस अग्ंयाशय मानव में की तरह एक अच्छी तरह से परिभाषित ठोस अंग नहीं है, बल्कि एक diffusely वितरित नरम ऊतक है कि आसानी से माउस आंतरिक शरीर रचना विज्ञान या व्यक्तियों है कि कम या कोई अनुभव के साथ अपरिचित व्यक्तियों द्वारा की पहचान नहीं है प्रदर्शन माउस अंग विच्छेदन । इस अनुच्छेद के प्रयोजन के लिए एक विस्तृत कदम वार दृश्य प्रदर्शन प्रदान करने के लिए विच्छेदन द्वारा माउस अग्ंयाशय को हटाने में नौसिखिया गाइड है । यह लेख विशेष रूप से छात्रों और अनुसंधान के लिए नए जांचकर्ताओं के लिए मूल्यवान होना चाहिए कि चयापचय रूपरेखा या ऊतकीय विश्लेषण के लिए विच्छेदन द्वारा माउस अग्ंयाशय की कटाई की आवश्यकता है ।
Introduction
माउस मानव अग्नाशय के कैंसर1,2के एक महत्वपूर्ण पशु मॉडल के रूप में उभरा है । Ptf1a मेंcre/ LSL-KrasG12D/+ माउस मॉडल, िईद्भस्टेन चूहा सार्कोमा (कश्मीर रास) oncogene अग्न्याशय में विशेष रूप से सक्रिय है, अग्न्याशय में कैंसर के घावों की दीक्षा में जिसके परिणामस्वरूप, अग्नाशय intraepithelial neoplasias (PanINs) के रूप में जाना जाता है, कि प्रगति अग्नाशय वाहिनी adenocarcinomas, सामांयतः के रूप में संदर्भित करने के लिए PDACs3। इस माउस मॉडल प्रणाली मानव अग्नाशय के कैंसर के लिए सबसे अच्छा उपलब्ध पशु मॉडलों में से एक प्रदान करता है4,5, अतिरिक्त लाभ के साथ कि PanINs जीवन के पहले पांच महीनों के भीतर उभरने और अक्सर एक के भीतर PDAC प्रगति एकल वर्ष4,5, जबकि अग्नाशय के कैंसर सबसे अधिक बार उंर के 60-70 वर्ष मनुष्यों में होता है ।
Ptf1a से विच्छेदन द्वारा अग्ंयाशय का निष्कर्षणcre/ LSL-KrasG12D/+ विभिंन उंर में चूहों अग्ंयाशय में कैंसर के विकास की विस्तृत अनुदैर्ध्य ऊतकीय परीक्षा के लिए अनुमति देता है, को प्रगति के माध्यम से जल्द से प्नि्न चरणों से लेकर PDAC3,4 , 5. पांच से पंद्रह महीने से लेकर उंर में अग्ंयाशय कटाई भी ऊतक निष्कर्षों को तैयार करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है अग्ंयाशय4 चयापचय में वैश्विक परिवर्तन विशेषता है कि स्वस्थ से रोगग्रस्त ऊतक संक्रमण के दौरान हो 6,7.
यह आलेख एक माउस अग्न्याशय निष्कर्षण करने के लिए आवश्यक चरणों का एक पूर्ण दृश्य मार्गदर्शिका प्रस्तुत करता है और आगे विश्लेषण के लिए एक अग्ंयाशय के संग्रहण के लिए दिशानिर्देश उपलब्ध कराता है । इस गाइड प्रकार मैं मधुमेह सहित अन्य अग्नाशय के रोगों पर अनुसंधान का आयोजन व्यक्तियों के लिए समान रूप से मूल्यवान हो जाएगा, और विशेष रूप से छात्रों और माउस का उपयोग कर अग्न्याशय की कटाई को शामिल अनुसंधान के लिए नए जांचकर्ताओं के लिए उपयोगी होना चाहिए चयापचय की रूपरेखा या ऊतकीय विश्लेषण के लिए विच्छेदन ।
Protocol
वीडियो में किए गए प्रक्रियाओं और नीचे वर्णित संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) द्वारा मियामी विश्वविद्यालय में अनुमोदित किया गया है ।
1. तैयारी और उत्तेजना टेस्ट शल्य प्रक्रिय…
Representative Results
Discussion
मौजूदा तरीकों के संबंध में महत्व
जबकि अंय माउस विच्छेदन के अनौपचारिक वीडियो मौजूद है, इस वीडियो लेख पहले पेशेवर गुणवत्ता प्रदान करता है, की समीक्षा की सहकर्मी, विस्तृत निष्कर्षण और माउस अग्ंया…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
पहुंच स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों/राष्ट्रीय कैंसर संस्थान अनुदान संख्या-1R15CA152985-01A1 से इस काम के लिए समर्थन स्वीकार करता है । इस परियोजना को भी मियामी विश्वविद्यालय के स्नातक अनुसंधान पुरस्कार कार्यक्रम द्वारा समर्थित किया गया है, मियामी विश्वविद्यालय डॉक्टरेट-छात्रवृत्ति कार्यक्रम और मियामी विश्वविद्यालय ग्रीष्मकालीन विद्वानों कार्यक्रम के लिए स्नातक के अवसर ।
Materials
| Glass Jar | Corning | 3140-150 | The glass jar used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| Lid of Glass Jar | Corning | 9985-150 | The glass jar lid used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| 15 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339650 | |
| Surgical Scissors | Fisher Scientific | 9201 | |
| Squeeze bottle | Fisher Scientific | 03-409-10DD | |
| 100% Ethanol | Fisher Scientific | 22-032-103 | |
| Formalin | Fisher Scientific | 245-684 | |
| Foam Boards | Therapak | 562908 | |
| Forceps | Fisher Scientific | 200205SHN | |
| 1 mL 21G Syringes | BD Biosciences | 309624 | |
| 50 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339652 | |
| 2.0 mL Microcentrifuge Tubes | Fisher Scientific | 02-681-258 | |
| Surgical Pads | Fisher Scientific | S67011 | |
| T-Pins Length: 2" | Advance Store Products | X32T-05 | |
| Sterilizing Wipes | Professional Disposables International Inc. | Q85084 | |
| Sharps Container | Fisher Scientific | 14-827-122 | |
| Analytical Balance | Marshall Scientific | ME-AE200 | |
| 4L Dewar | Taylor-Wharton | 4LD | |
| Shallow Wide Mouth Dewar | Fisher Scientific | F3087-V | |
| Floating Microtube Rack | VWR | 60986-100 | |
| Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile | Fisher Scientific | 10-500-25 | |
| Isothesia (Isoflurane) | Henry Schein Animal Health | 050033 | |
| Liquid Nitrogen | Wright Brothers | NIT-60-XX | |
| Mouse Kras Strain | The Jackson Laboratory | OO8179 | |
| Mouse Cre Strain | MMRRC | OOO435-UNC |
Riferimenti
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