Ultrasonografía en las investigaciones de reproducción Experimental en ratas
Summary
Este manuscrito describe la utilidad de la ecografía realizada en ratas hembras para el diseño de modelos experimentales para la investigación ginecológica y reproductiva. Se muestra una explicación paso a paso de cómo realizar evaluación ultrasonográfica.
Abstract
Con el desarrollo de la tecnología de reproducción asistida y los límites éticos de la investigación en seres humanos, modelos animales de ratón han sido ampliamente utilizados en medicina reproductiva. En el pasado, el estudio del desarrollo del sistema reproductivo en roedores se ha basado en un solo examen histológico de tejidos suprimidos. Recientemente, con el desarrollo de la ecografía transabdominal de alta resolución, ecografía de alta calidad puede ahora realizarse para evaluar los órganos reproductivos de las ratas, lo que permite un nuevo método para estudiar el sistema reproductor. Se obtuvieron imágenes utilizando un sistema ultrasonográfico de alta resolución. Ecografía ginecológica fue realizada en 28 ratas no-embarazada de ocho semanas de edad y 5 ratas Sprague-Dawley preñadas. Describimos cómo reconocer los órganos del sistema reproductivo y las estructuras asociadas en las típicas vistas durante las diferentes fases del estro del ciclo. Color de flujo que Doppler se utiliza para medir el flujo sanguíneo de la arteria uterina y evaluar cambios del patrón de flujo sanguíneo uterino durante las diferentes etapas del embarazo. Hemos demostrado que la exploración de ultrasonido es un método útil para evaluar cambios en órganos reproductivos internos. Su uso plantea la posibilidad de llevar a cabo experimentos adicionales, incluyendo los procedimientos médicos o quirúrgicos y proporciona la capacidad para monitorear cambios sonográficos a los órganos internos sin sacrificar animales.
Introduction
Modelos animales de ratón han sido ampliamente utilizados en medicina reproductiva, incluyendo embriones y trasplante ovárico1,2. Sin embargo, en el pasado, el estudio del desarrollo del sistema reproductivo en roedores se ha basado en un solo examen histológico de tejidos suprimidos, y el estudio longitudinal de los cambios del día a día órgano reproductivo no ha sido posible en las ratas3. El ultrasonido ha sido ampliamente utilizado en reproducción asistida en humanos de más de 30 años, pero esta valiosa tecnología sólo se ha aplicado a las ratas recientemente.
Nuestro objetivo fue establecer un enfoque ultrasonographic para evaluar los órganos reproductivos de las ratas de Sprague-Dawley para diseño de modelos experimentales para la investigación de la reproducción y Ginecología y para demostrar el procedimiento porque a nuestro conocimiento, no hay visualizado las publicaciones actuales sobre este procedimiento. Describimos el procedimiento de la examinación ultrasonographic del sistema reproductivo de la rata hembra y los resultados de ultrasonographic presentes en la anatomía y el flujo sanguíneo de la arteria uterina utilizando ultrasonido de alta definición. Supervisamos las características del endometrio, los ovarios y flujo sanguíneo de la arteria uterina en hembras no preñadas en diferentes etapas del ciclo estral para evaluar las diferencias significativas en el espesor del endometrio, la morfología ovárica y del flujo sanguíneo uterino en diferentes etapas del ciclo estral, similar a las mujeres. Utilizamos equipos de ultrasonido de alta calidad con una frecuencia de 70 MHz y una resolución de 30 μm. Nuestro otro objetivo fue evaluar los cambios en la resistencia del flujo sanguíneo uterino en ratas preñadas. Esta técnica permite el estudio de los cambios diarios en los órganos reproductivos sin sacrificar animales.
Hay varias dificultades técnicas en la utilización de ultrasonido en ratas. Estas dificultades son: el endometrio de la rata es mucho más delgado que una hembra humana4. Dificultad en la proyección de imagen los ovarios de ratas se ha atribuido a la piel más gruesa y musculatura de la pared abdominal en ratas, que dio lugar a la casi completa atenuación del ultrasonido5, y la arteria uterina es mucho más difícil de encontrar en mujeres no embarazadas ratas. Hemos resuelto muchos problemas técnicos con el procedimiento, y para los problemas que quedan, mostramos cómo minimizarlos.
Seguimiento exitoso de sonográficas cambios en los órganos reproductivos de las ratas sin necesidad de sacrificar animales se abrirá la posibilidad de construir modelos animales futuro de la medicina reproductiva y otros procedimientos quirúrgicos.
Protocol
Representative Results
Discussion
Debido a las modificaciones procesales y resolución de problemas que era necesario en este estudio, a pesar de nuestro objetivo de identificar todas las fases del estro ciclo en ratas utilizando ultrasonido, fuimos incapaces de encontrar diferencias significativas. Presumimos que estas dificultades pueden ser porque el ciclo estral dura sólo unos días en ratas, a diferencia del ciclo en las mujeres. Estamos seguros que todas las mediciones se realizaron en exactamente el momento adecuado para determinar las diferencia…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Esta investigación fue apoyada por la sección de experimentación de animales de la Universidad de Murcia y de la obstetricia y Ginecología Departamento de Murcia Universidad. Agradecemos a todos los técnicos que trabajan en el CEIB (Centro Experimental en Investigaciones Biomédicas), la sección de experimentación animal de la Universidad de Murcia, que han colaborado en este proyecto.
Materials
| Vevo3100 high-resolution in vivo micro-imaging system* | Visual Sonics, inc. | www.visualsonics.com/products | |
| Vevo integrated rail system including physiological monitoring unit. | Visual Sonics, inc. | www.visualsonics.com/products | |
| MX400 Transducter | Visual Sonics, inc. | www.visualsonics.com/products | |
| Vevo Lab Software | Visual Sonics, inc. | www.visualsonics.com/products | |
| HSD: Sprague Dawley SD | Envigo, inc. | Rat strain | |
| Lubricating Gel | General Supply | ||
| CIBERTEC CA-EAC20 Anesthesia Trolley System | Cibertec S.A | Anesthesia Machine | |
| Ecogel 100 ultrasound gel | Eco-Med Pharmaceuticals Inc. | ||
| Hair removal lotion (Nair) | General Supply | ||
| Isoflurane | Esteve Veterinaria | Inhalatory anesthesia | |
| * Required software is Vevo software including B-Mode application, pulse wave Doppler application, and vascular strain analysis tools package. |
Riferimenti
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