Aparelhos para colheita de tecido Microcolumns

Summary

Aqui descrevemos um protocolo para a produção de colheita agulhas que podem ser usadas para coletar tecido cheio-espessura da pele sem causar o doador do site cicatrizes. As agulhas podem ser combinadas com um sistema de coleta simples para atingir alto volume de colheita.

Abstract

Este manuscrito descreve o processo de produção para um aparelho de laboratório, feito de componentes de prateleira, que podem ser usados para coletar a microcolumns dos tecidos da pele de espessura total. O tamanho pequeno da microcolumns permite aos doadores sites curar rapidamente sem causar local doador, cicatrizes, durante a colheita de tecidos da cheio-espessura permite a incorporação de todos os componentes celulares e extracelulares dos tecidos da pele, incluindo aqueles associados com regiões dérmicas profundas e as estruturas dos anexos da pele, que ainda precisa com sucesso ser reproduzido usando tecido convencional, técnicas de engenharia. O microcolumns pode ser aplicado diretamente em feridas de pele para aumentar a cura, ou podem ser usados como fonte de células/tecidos autólogos para outras abordagens de engenharia de tecidos. As agulhas de colheita são feitas, modificando o padrão de agulhas hipodérmicas, e podem ser usados sozinho para colheita de pequenas quantidades de tecido ou juntamente com um sistema simples baseado em sucção coleção (também feito de material de laboratório comumente disponíveis) para alto volume da colheita para facilitar os estudos em modelos animais grandes.

Introduction

Enxerto de pele autólogo é o esteio de reparação da ferida, mas é limitada pela escassez de sítio doador e morbidade, levando a esforços concertados nas últimas décadas para desenvolver novas opções terapêuticas para substituir o enxerto de pele convencional^1,2 . Recentemente desenvolvemos um método alternativo de colheita da pele para aproveitar os benefícios do enxerto de pele de espessura total, minimizando a morbidade do sítio doador. Através da recolha de pele de espessura total na forma de pequenas (~0.5 mm de diâmetro) “microcolumns”, locais de doadores são capazes de curar rapidamente e sem cicatrizes em circunstâncias normais (para possíveis exceções, consulte a seção de discussão abaixo)³. Microcolumns pode ser aplicado diretamente na ferida camas para acelerar o fechamento da ferida, reduzir a contração³e restaurar uma variada gama de tipos de células epidérmicas e dérmicas e estruturas funcionais dos anexos⁴, muitas das quais são carentes de enxerto de pele de espessura dividida convencional ou de substitutos de pele de bioengenharia atual⁵. A capacidade de microcolumns para aumentar a cura e de seus sites de doador para curar sem cicatriz ambos independentemente validados por outros grupos de pesquisa^6,7.

Anteriormente, nós desenvolvemos um sistema de abate de laboratório para permitir que a coleção de microcolumns na escala⁸; no entanto, este sistema é composto de muitos componentes personalizados que não estão amplamente disponíveis. Aqui, descrevemos em detalhe o processo para produzir colheita agulhas, bem como sistemas de simples coleta, feita a partir principalmente componentes prontos para uso, que podem ser usados para atingir alto volume de colheita. Os aparelhos descritos neste manuscrito é apropriado para in vitro e em animal trabalho, mas não para uso em seres humanos. Um dispositivo clínico com autorização da FDA para a aplicação desta técnica em seres humanos é comercialmente disponível, mas não será discutido em detalhe aqui.

Protocol

Todo o trabalho envolvendo animais vivos e amostras de tecido animal foram aprovadas pelo Comitê de uso (IACUC) e Massachusetts General Hospital institucional Cuidado Animal. 1. produção de colheita agulhas Instalação da fase de produção Fixar um conector luer fêmea bloqueio de um post e montar o post para um palco de rotação, de modo que o conector luer-lock é o centro do palco (Figura 1A). Nesta primeira f…

Representative Results

As agulhas de colheita devem ser capazes de coletar microcolumns cheio-espessura dos tecidos da pele com aproximadamente uma taxa de sucesso de 80-90%, e cada microcolumn deve conter a epiderme, derme e alguma gordura subcutânea (Figura 4). Se a taxa de sucesso de colheita é baixa, ou se torna-se difícil inserir uma agulha no tecido, em seguida, uma agulha nova provavelmente é necessária. Se a taxa de sucesso para a colheita é consistentemente baixa, me…

Discussion

Os métodos descritos aqui destinam-se para permitir que a coleção de tecido microcolumns em quantidades suficientes na vivo grandes estudos em animais, usando ferramentas feitas de suprimentos de laboratório disponíveis comercialmente. Este aparelho tem sido usado anteriormente na colheita do tecido da pele humana extirpado^4,9 , bem como de pele suína ao vivo³. Os parâmetros específicos descritos são aqueles que foram enc…

Materials

Diamond wheel	Dremel	545
Hypodermic needle (19G)	Fisher Scientific	14-840-98	Other needle sizes could be used, depending on experimental needs
Stome wheel	Dremel	540
Syringe (20mL with luer lock)	Fisher Scientific	22-124-967
Suction adapter	Tulip Medical	PA20BD	Optional, for high volume harvesting
Suction canister	Fisher Scientific	19-898-212	Optional, for high volume harvesting. Sterilize before use.
Suction tubing	Medline	DYND50216H	Optional, for high volume harvesting