Determinazione della densità del dotto biliare nel fegato del topo

Joshua  M. Adams; Hamed Jafar-Nejad

doi:10.3791/59587

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Articolo metodologico

Determinazione della densità del dotto biliare nel fegato del topo

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DOI:

10.3791/59587

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30 aprile 2019

Joshua M. Adams¹^,²^,³ , Hamed Jafar-Nejad¹^,³

¹Program in Developmental Biology, Baylor College of Medicine, ²Medical Scientist Training Program (MSTP), Baylor College of Medicine, ³Department of Molecular and Human Genetics, Baylor College of Medicine

In questo articolo

Sommario

Vi presentiamo un metodo piuttosto semplice e sensibile per la quantificazione accurata della densità del condotto biliare nel fegato del topo. Questo metodo può aiutare a determinare gli effetti dei modificatori genetici e ambientali e l'efficacia delle potenziali terapie nei modelli murini delle malattie biliari.

Abstract

Il topo è ampiamente usato come organismo modello per studiare le malattie biliari. Per valutare lo sviluppo e la funzione del sistema biliare, vengono utilizzate varie tecniche, tra cui la chimica del siero, l'analisi istologica e l'immunostaining per marcatori specifici. Anche se queste tecniche possono fornire importanti informazioni sul sistema biliare, spesso non presentano un quadro completo dei difetti dello sviluppo del dotto biliare (BD) in tutto il fegato. Ciò è in parte dovuto alla robusta capacità del fegato di topo di drenare la bile anche negli animali con compromissione significativa nello sviluppo biliare. Qui presentiamo un metodo semplice per calcolare il numero medio di BD associati a ogni vena del portale (PV) in sezioni che coprono tutti i lobi di topi mutanti/transgenici. In questo metodo, i fegati sono montati e sezionato in modo stereotipato per facilitare il confronto tra vari genotipi e condizioni sperimentali. I BD sono identificati tramite microscopia leggera dei cholangiociti macchiati di citokeratina, e quindi contati e divisi per il numero totale di FOTO presenti nella sezione epatica. Ad esempio, mostriamo come questo metodo possa distinguere chiaramente tra topi selvatici e un modello murino della sindrome di Alagille. Il metodo qui presentato non può sostituire le tecniche che visualizzano la struttura tridimensionale dell'albero biliare. Tuttavia, offre un modo semplice e diretto per valutare quantitativamente lo sviluppo della BD e il grado di formazione della reazione dudulare nei topi.

Introduzione

L'albero biliare è una parte critica del fegato dei mammiferi, permettendo il passaggio della bile dagli epatociti nell'intestino. I dotti biliari intraepatici (BD) sono formati da cholangiociti, che si differenziano dagli epatoblasti bipotenziali attraverso la segnalazione di Notch e TGF Una corretta specificazione e impegno dei cholangiocyti e del loro assemblaggio in BD maturi sono fondamentali per lo sviluppo dell'albero biliare intraepatico. Come il fegato cresce durante lo sviluppo o sulla rigenerazione dell'organo, il sistema biliare ha bisogno di sviluppare lungo il fegato per garantire il corretto dre....