Murine цервикальной аорты трансплантации модель с использованием модифицированных non-Suture манжеты Техника
Summary
Здесь мы представляем протокол гетеротопной аортальной трансплантации у мышей с использованием техники не-шовной манжеты в модели шейки матки. Эта модель может быть использована для изучения основной патологии хронической аллотрансплантата васкулопатии (CAV) и может помочь оценить новые терапевтические агенты, с тем чтобы предотвратить его образование.
Abstract
С введением мощных иммуносупрессивных протоколов возможны различные достижения в профилактике и терапии острых эпизодов отторжения. Однако за последние десятилетия можно было наблюдать лишь незначительное улучшение долгосрочных результатов трансплантации твердых органов. В этом контексте, хроническая аллотрансплантат васкулопатия (CAV) по-прежнему представляет собой ведущую причину поздней органной недостаточности в сердечной, почечной и легочной трансплантации.
До сих пор, основной патогенез развития CAV остается неясным, объясняя, почему эффективные стратегии лечения в настоящее время отсутствует и подчеркивая необходимость соответствующих экспериментальных моделей для того, чтобы изучить основные патофизиологии, ведущие к Формирование CAV. Следующий протокол описывает модель гетеротопической аорты шейки матки с использованием модифицированной техники, не присущей манжете. В этом методе, сегмент грудной аорты находится в неправильном общей сонной артерии. С помощью техники не-сутур манжеты, легко учиться и воспроизводимой модели может быть установлен, сводя к минимуму возможную неоднородность зашесущих сосудистых микро анастомозов.
Introduction
За последние шесть десятилетий, сплошная трансплантация органов превратилась из экспериментальной процедуры в стандарт ухода за лечением конечной стадии органной недостаточности1. В связи с улучшением противомикробных препаратов, хирургических методов и продвижения в иммуносупрессивных полков, ранний показатель успеха трансплантации твердых органов значительно возросли за последние десятилетия2.
Тем не менее, долгосрочные показатели выживаемости трансплантата не значительно улучшились таким же образом3. Развитие CAV является основным фактором, ограничивающим долгосрочное выживание4,5,6. Эта патология характеризуется образованием концентрического неоистимного слоя, состоящего из гладких мышечных клеток, что приводит к постепенному сужению сосуда и последовательному мальперфузии пересаженного твердого органа. У реципиентов пересадки сердца, CAV поражения могут быть диагностированы в до 75% пациентов 3 лет после трансплантации7.
Патофизиология CAV еще не до конца понятна. Это, кажется, связано с многочисленными иммунологическими и неиммунологическими факторами, приводящими к эндотелиальным повреждениям с последующей эндотелиальной активацией и дисфункцией8. До сих пор не существует варианта причинно-следственной связи для профилактики CAV, подчеркивая необходимость воспроизводимой модели малых животных для изучения формирования и потенциальной терапии CAV.
С использованием моделей трансплантации аорты, CAV, как поражения можно увидеть 4 недели после трансплантации. Эти поражения состоят в основном из сосудистых гладких мышечных клеток, тем самым, напоминающих патологию человека. Из-за широкого спектра трансгенных и нокаут мышей, использование моделей мыши в трансплантации связанных патологий предлагает уникальную возможность определить новые терапевтические варианты и понять их развитие. Из-за малого диаметра пересаженных сосудов, однако, использование моделей мыши обычно ассоциируется с длинными кривыми обучения и первоначальный высокий уровень осложнений9. С введением не-шов манжеты техники, эта самая сложная часть операции может быть облегчена и диаметр анастомоза сохраняется постоянно10,11.
Protocol
Representative Results
Discussion
Хроническая аллотрансплантат васкулопатия является основной причиной поздней потери трансплантата после трансплантации твердых органов сердца и, вероятно, почек и легких аллотрансплантатов8. До сих пор не может быть разработан апогеонный терапевтический режим для пред?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ни один.
Materials
| Balb-c Mice (H2-d) | Charles River | Strain# 028 | Donor animal |
| Bipolar cautery system | ERBE | ICC 50 / 20195-023 | Bipolar cautery |
| C57BL/6J (H-2b) | Charles River | Strain# 027 | Recipient animal |
| Halsey Needle Holders | FST | 12501-12 | Needle Holder |
| Halsted-Mosquito Forceps | AESCULAP | BH111R | Curved Clamp |
| Medical Polyimide Tubing | Nordson MEDICAL | 141-0031 | Cuff-Material |
| Micro Serrefines | FST | 18055-04 | Micro Vessel Clip |
| Micro-Adson Forceps (serrated) | FST | 11018-12 | Standard Forceps |
| Micro-Serrefine Clamp Applying Forceps | FST | 18057-14 | Clipapplicator |
| S&T Forceps – SuperGrip Tips (Angled 45°) | S&T | 00649-11 | Fine Forceps |
| S&T Vessel Dilating Forceps – Angled 10° (Tip diameter 0.2 mm) | S&T | 00125-11 | Vesseldilatator |
| Schott VisiLED Set | Schott | MC 1500 / S80-55 | Light |
| Stereoscopic microscope | ZEISS | SteREO Discovery.V8 | Microscope |
| Student Fine Scissors / Surgical Scissors – Sharp-Blunt | FST | 91460-11 / 14001-12 | Standard Sissors |
| Vannas-Tübingen Spring Scissors (curved, 8.5 cm) | FST | 15004-08 | Microsissors (curved) |
| Vannas-Tübingen Spring Scissors (straight, 8.5 cm) | FST | 15003-08 | Microsissors (straight) |
Riferimenti
- Rana, A., et al. Survival benefit of solid-organ transplant in the United States. JAMA Surgery. 150 (3), 252-259 (2015).
- Rana, A., Godfrey, E. L. Outcomes in Solid-Organ Transplantation: Success and Stagnation. Texas Heart Institute Journal. 46 (1), 75-76 (2019).
- Meier-Kriesche, H. U., Schold, J. D., Srinivas, T. R., Kaplan, B. Lack of improvement in renal allograft survival despite a marked decrease in acute rejection rates over the most recent era. American Journal of Transplantation. 4 (3), 378-383 (2004).
- Bagnasco, S. M., Kraus, E. S. Intimal arteritis in renal allografts: new takes on an old lesion. Current Opinion in Organ Transplantation. 20 (3), 343-347 (2015).
- Hollis, I. B., Reed, B. N., Moranville, M. P. Medication management of cardiac allograft vasculopathy after heart transplantation. Pharmacotherapy. 35 (5), 489-501 (2015).
- Verleden, G. M., Raghu, G., Meyer, K. C., Glanville, A. R., Corris, P. A new classification system for chronic lung allograft dysfunction. The Journal of Heart and Lung Transplantation. 33 (2), 127-133 (2014).
- Ramzy, D., et al. Cardiac allograft vasculopathy: a review. Canadian Journal of Surgery. 48 (4), 319-327 (2005).
- Skoric, B., et al. Cardiac allograft vasculopathy: diagnosis, therapy, and prognosis. Croatian Medical Journal. 55 (6), 562-576 (2014).
- Koulack, J., et al. Development of a mouse aortic transplant model of chronic rejection. Microsurgery. 16 (2), 110-113 (1995).
- Rowinska, Z., et al. Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation – An Instructional Video. Journal of Visualized Experiments. (128), (2017).
- Dietrich, H., et al. Mouse model of transplant arteriosclerosis: role of intercellular adhesion molecule-1. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 20 (2), 343-352 (2000).
- Mähler Convenor, M., et al. FELASA recommendations for the health monitoring of mouse, rat, hamster, guinea pig and rabbit colonies in breeding and experimental units. Laboratory Animals. 48 (3), 178-192 (2014).
- Ollinger, R., et al. Blockade of p38 MAPK inhibits chronic allograft vasculopathy. Transplantation. 85 (2), 293-297 (2008).
- Thomas, M. N., et al. SDF-1/CXCR4/CXCR7 is pivotal for vascular smooth muscle cell proliferation and chronic allograft vasculopathy. Transplant International. 28 (12), 1426-1435 (2015).
- Ollinger, R., et al. Bilirubin: a natural inhibitor of vascular smooth muscle cell proliferation. Circulation. 112 (7), 1030-1039 (2005).
- Segura, A. M., Buja, L. M. Cardiac allograft vasculopathy: a complex multifactorial sequela of heart transplantation. Texas Heart Institute Journal. 40 (4), 400-402 (2013).
- McDaid, J., Scott, C. J., Kissenpfennig, A., Chen, H., Martins, P. N. The utility of animal models in developing immunosuppressive agents. European Journal of Pharmacology. 759, 295-302 (2015).
- Shi, C., Russell, M. E., Bianchi, C., Newell, J. B., Haber, E. Murine model of accelerated transplant arteriosclerosis. Circulation Research. 75 (2), 199-207 (1994).
- Koulack, J., et al. Importance of minor histocompatibility antigens in the development of allograft arteriosclerosis. Clinical Immunology and Immunopathology. 80 (3 Pt 1), 273-277 (1996).
- Maglione, M., et al. A novel technique for heterotopic vascularized pancreas transplantation in mice to assess ischemia reperfusion injury and graft pancreatitis. Surgery. 141 (5), 682-689 (2007).
- Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. Journal of Visualized Experiments. (92), e50753 (2014).
- Nakao, A., Ogino, Y., Tahara, K., Uchida, H., Kobayashi, E. Orthotopic intestinal transplantation using the cuff method in rats: a histopathological evaluation of the anastomosis. Microsurgery. 21 (1), 12-15 (2001).
