高速视频显微镜分析在原发性睫状体运动障碍一线诊断中的应用
Summary
高速视频显微镜分析是一种相对容易执行、快速、经济高效，而且在有经验的人手中，它是原发性睫状体运动障碍一线诊断的相当可靠的工具，每个参与诊断和治疗严重肺部疾病的中心都应该提供这种工具。
Abstract
原发性睫状体运动障碍（PCD）是一种先天性疾病，主要遗传于常染色体隐性遗传性状。该疾病导致纤毛运动紊乱，导致黏膜纤毛清除率（MCC）的严重损害。如果未确诊或诊断得太晚，该病症会导致支气管扩张症的发展，并在以后的生活中对肺部造成严重损害。大多数诊断PCD的方法都很耗时，需要大量的经济资源来建立它们。高速视频显微镜分析 （HSVMA） 是 体外可视化和分析纤毛跳动的活呼吸道细胞的唯一诊断工具。它快速，经济高效，并且在经验丰富的手中，作为PCD的诊断工具非常可靠。此外，由于不存在形态学变化，透射电子显微镜（TEM）等经典诊断措施不适用于某些突变。
本文介绍了收集呼吸道上皮细胞的过程，标本的进一步制备以及HSVMA的过程。我们还描述了如何在诊所不具备执行HSVMA的设备的情况下，通过将刷毛细胞保存在滋养介质中以储存并运输到调查地点，从而成功地保持不受伤害和跳动。还显示了来自动力蛋白臂重链11基因（DNAH11）突变的患者的病理性跳动模式的视频，该基因不能被诊断为TEM;由于上气道感染导致的 HSVMA 不确定的结果，以及刷牙与红细胞叠加不成功。通过本文，我们希望鼓励每个处理肺病患者和罕见肺部疾病的单位进行HSVMA，作为其PCD日常常规诊断的一部分，或将标本送到专门从事HSVMA的中心。
Introduction
原发性纤毛运动障碍（PCD）是一种罕见的遗传性遗传性疾病，可引起跳动纤毛运动的紊乱。如果未确诊，由于MCC的严重损害，它会导致晚年严重的肺损伤。过去，其患病率估计在1：4，000至50，000之间。由于诊断方法的稳步改善和对该病症的认识不断提高，关于PCD患病率的最新情况表明，它可能更为常见，可能在1：4，000至20，000的范围内，而不是1，2。然而，PCD患者仍然被低估或诊断得太晚1，3。因此，应怀疑患有先天性坐姿与异型或围产期鼻漏、新生儿呼吸窘迫、鼻塞和喂养困难的婴儿。在晚年，慢性中耳炎、复发性肺炎、鼻-鼻窦炎和由 MCC 受损引起的慢性典型湿性咳嗽是 PCD 的标志性症状，与支气管扩张症和肺功能受损相结合，持续到成年期2.
怀疑患有PCD的患者可以通过使用不同的诊断工具进行诊断。过去，TEM被认为是一线诊断的黄金标准。然而，高达30%的PCD病例没有显示异常的超微结构1，3，4，5，6，需要不同的诊断方法。因此，越来越多的中心和欧洲呼吸学会 （ERS） 指南建议将鼻一氧化氮 （nNO） 和 HSVMA 联合作为一线诊断方法 1，7，9，10。HSVMA 和 nNO 也是识别 PCD11 患者的最具成本效益的选择。然而，即使基因检测包含在诊断中，也必须记住，目前没有独立的检测或组合检测可以100%确定性排除PCD8，9，10。
在现有的诊断选项中，HSVMA 是唯一一种专注于活的纤毛包被呼吸道细胞并评估纤毛搏动模式 （CBP） 和纤毛搏动频率 （CBF） 的检查。与TEM相反，HSVMA的结果通常通常在测试当天快速获得，而TEM的结果可能在标本采集后数月到达。HSVMA可以适用于所有年龄组，而nNO要求高度合规;5岁以下尝试使用它通常不成功10.在有经验的人手中，HSVMA具有出色的敏感性和特异性，可分别诊断PCD 100%和96%，12。
本文描述了执行HSVMA的分步程序，包括从鼻子的下鼻甲中收获纤毛包被的呼吸道细胞，将收获的细胞保存在细胞滋养培养基中以运输到研究部位，以及微观视频分析以确定CBF和CBP的过程。此外，还显示了一些来自患者的视频剪辑，将正常的CBP和CBF与异常纤毛功能（视频3， 视频4， 视频5， 视频6， 视频7和 视频8）进行比较。
Protocol
Representative Results
Discussion
在这里，根据一线诊断来描述和使用HSVMA的PCD的诊断过程。尽管HSVMA相对容易建立，成本效益11，并且在有经验的手中是一种可靠的方法12，但HSVMA并不是一种没有陷阱的诊断措施。异常CBF和CBP可能是由于继发感染，导致支气管 – 呼吸道上皮炎症15，并且出于同样的原因，吸烟个体可能有异常的心跳频率16，…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们要特别感谢儿科护士Johanna Juvankoski女士在刷牙方面的出色帮助。我们还要特别感谢Heymut Omran教授（UKM明斯特大学诊所）允许使用其网站上的正常睫状运动示意图。最后，我们要感谢PGCE的Alan Brown BA（Hons）先生校对手稿。
Materials
| Amoxiciline-clavulanic acid | Orion Oyj | 40 mg/kg divided in 2 doses/day, for adults 875/125 mg 1 tablet x2/day | |
| Camera Software | Hamamatsu | HCI Image | |
| Cold pack | any | for preservation and transport | |
| Differential interference microscope | Carl Zeiss | Inverted, cell observer microscope | |
| Digitial High Speed Video Camera | Hamamatsu | Orca Flash 4.0, digital camera type C11440 | |
| Dulbecco´s Modified Eagle Medium | Thermo Fisher | 10565018 | basal cell culture medium |
| Eppendorf tube | Eppendorf | 30120086 | 1.5 mL tube |
| Glass-bottom microwell dish | MatTek | P35G-1.5-14-C | cuvette for microscopy |
| Heating Unit | Carl Zeiss/PeCon | 810-450001 | Carl Zeiss incubation elements with PeCon TempModule S1 temperature control |
| Interdental brush 0.6 mm | Doft | 872267 | Interdental brush on a long wire with a reusable handle and cap in zipbag |
| Objective | Carl Zeiss | 100x/1.46, α Plan-Apochromat DIC objective | |
| Small polystyrene box with lid | any | for transport |
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