ניתוח מיקרוסקופיית וידאו במהירות גבוהה הוא קל יחסית לביצוע, מהיר, חסכוני, ובידיים מנוסות, כלי אמין במידה ניכרת לאבחון קו ראשון של דיסקינזיה סילארית ראשונית, שאמורה להיות זמינה בכל מרכז המעורב באבחון ובטיפול במחלות ריאה קשות.
דיסקינזיה סילארית ראשונית (PCD) היא הפרעה מולדת התורשתית בעיקר בתכונה אוטוזומלית רצסיבית. ההפרעה גורמת להפרעה בתנועת הריסונים, מה שמוביל לפגיעה חמורה בפינוי רירית (MCC). אם לא מאובחנים או מאובחנים מאוחר מדי, המצב מוביל להתפתחות ברונכיאקטזיס ונזק חמור לריאות בהמשך החיים. רוב השיטות לאבחון PCD גוזלות זמן רב ודורשות משאבים כלכליים נרחבים כדי לבסס אותן. ניתוח מיקרוסקופיית וידאו במהירות גבוהה (HSVMA) הוא כלי האבחון היחיד להמחשה וניתוח של תאי נשימה חיים עם ריסונים פועמים במבחנה. זה מהיר, חסכוני, ובידיים מנוסות, אמין מאוד ככלי אבחון עבור PCD. בנוסף, אמצעי אבחון קלאסיים כגון מיקרוסקופ אלקטרונים הולכה (TEM) אינם ישימים עבור מוטציות מסוימות מכיוון ששינויים מורפולוגיים נעדרים.
מאמר זה מתאר את תהליך איסוף תאי אפיתל נשימתיים, את ההכנה הנוספת של הדגימה ואת התהליך של HSVMA. כמו כן, אנו מתארים כיצד ניתן לשמור בהצלחה על תאים מוברשים ללא פגע ולהכות על ידי השארתם במדיום מזין לאחסון והובלה לאתר החקירה במקרים בהם למרפאה אין את הציוד לביצוע HSVMA. כמו כן מוצגים סרטונים עם דפוסי הכאה פתולוגיים מחולים עם מוטציה בגן שרשרת כבדה 11 של זרוע הדיינין (DNAH11), שלא ניתן לאבחן עם TEM; התוצאה של HSVMA לא חד משמעי עקב זיהום של דרכי הנשימה העליונות, כמו גם צחצוח לא מוצלח עם superimposition של תאי דם אדומים. במאמר זה, ברצוננו לעודד כל יחידה העוסקת בחולי ריאות ומחלות ריאה נדירות לבצע HSVMA כחלק מהאבחנה השגרתית היומית שלהם עבור PCD או לשלוח את הדגימות למרכז המתמחה בביצוע HSVMA.
דיסקינזיה סילארית ראשונית (PCD) היא הפרעה גנטית תורשתית נדירה, הגורמת להפרעות בתנועת הריסונים המכים. אם לא מאובחנים, זה מוביל לנזק חמור לריאות בהמשך החיים עקב פגיעה חמורה של MCC. בעבר הוערך כי שכיחותו נעה בטווח של 1:4,000 עד 50,000. בשל שיפור מתמיד באבחון ומודעות גוברת למצב, עדכונים על שכיחות ה- PCD מצביעים על כך שהוא עשוי להיות נפוץ הרבה יותר וכנראה בטווח של 1:4,000 עד 20,000 במקום 1,2. עם זאת, חולים עם PCD עדיין מאובחנים בתת-אבחון או מאובחנים מאוחר מדי 1,3. לכן, תינוקות עם סיטוס אינברסוס מולד ו/או הטרוטקסיה או רינוריאה פרינטלית, מצוקה נשימתית בילודים, אף חסום וקשיי האכלה צריכים להיות חשודים ב-PCD. בהמשך החיים, דלקת אוזניים כרונית, דלקת ריאות חוזרת ונשנית, רינוזינוסיטיס ושיעול רטוב כרוני וטיפוסי עקב פגיעה ב-MCC הם הסימפטומים המוכרים של PCD, אשר בשילוב עם ברונכיאקטזיס ותפקוד ריאות לקוי, ממשיכים לתוךהבגרות 2.
ניתן לאבחן חולים החשודים כבעלי PCD באמצעות כלי אבחון שונים. TEM נחשב בעבר לתקן הזהב לאבחון קו ראשון. עם זאת, עד 30% ממקרי ה-PCD אינם מראים מבנה-על חריגשל 1,3,4,4,5,6, מה שדורש גישה אבחנתית שונה. לכן, מספר גדל והולך של מרכזים וההנחיות של החברה האירופית לנשימה (ERS) מציעים שילוב של תחמוצת החנקן באף (nNO) ו- HSVMA כאבחון קו ראשון 1,7,9,10. HSVMA ו-nNO הן גם האפשרויות החסכוניות ביותר בזיהוי מטופל עם PCD11. עם זאת, גם אם הבדיקות הגנטיות נכללו באבחון, יש לזכור כי אין כיום בדיקה עצמאית או שילוב של בדיקות שיכולות לכלול PCD בוודאות של 100% 8,9,10.
מבין אפשרויות האבחון הזמינות, HSVMA היא הבדיקה היחידה המתמקדת בתאי נשימה חיים, מצופים ריסונים ומעריכה את תבנית הפעימה הציליארית (CBP) ואת תדירות הפעימה הציליארית (CBF). בניגוד ל-TEM, התוצאות של HSVMA זמינות במהירות, בדרך כלל ביום הבדיקה, בעוד שתוצאות ה-TEM עשויות להגיע חודשים לאחר נטילת הדגימה. ניתן ליישם HSVMA עבור כל קבוצות הגיל, בעוד ש- nNO דורש רמה גבוהה של תאימות; ניסיונות להשתמש בו מתחת לגיל 5 שנים הם בדרך כלל לא מוצלחים10. בידיים מנוסות, HSVMA יש רגישות מעולה וספציפיות לאבחון PCD ב 100% ו 96%, בהתאמה12.
מאמר זה מתאר את ההליך שלב אחר שלב לביצוע HSVMA, כולל קצירת תאי נשימה מצופים ריסונים מהטורבינט הנחות של האף, שימור תאים שנקטפו במדיום המזין את התאים להובלה לאתר החקירה, ותהליך ניתוח וידאו מיקרוסקופי לקביעת CBF ו- CBP. בנוסף, מוצגים כמה קטעי וידאו של מטופלים, המשווה בין CBPs ו- CBFs רגילים לתפקוד ריסונים לא תקין (וידאו 3, וידאו 4, וידאו 5, וידאו 6, וידאו 7 ווידאו 8).
כאן, תהליך האבחון עבור PCD באמצעות HSVMA מתואר ונדון לאור אבחון קו ראשון. למרות היותו קל יחסית להקמה,חסכוני 11, ושיטה אמינה בידיים מנוסות12, HSVMA אינו אמצעי אבחון ללא מכשולים. CBF ו- CBP חריגים עשויים להיות תוצאה של זיהום משני, מה שמוביל לדלקת של אפיתליה ברונכו-נשימתית<sup class="xr…
The authors have nothing to disclose.
אנו מבקשים להביע תודה מיוחדת לאחות הילדים גברת יוהנה יובנקוסקי על עזרתה המצוינת עם הצחצוחים. אנו רוצים גם להביע תודה מיוחדת לפרופסור היימוט עומרן (מרפאת האוניברסיטה מינסטר, UKM) על מתן רשות להשתמש בדמות הסכמטית של תנועה סילארית רגילה מאתר האינטרנט שלהם. לבסוף, ברצוננו להודות למר אלן בראון BA (Hons), PGCE, על הגהת כתב היד.
Amoxiciline-clavulanic acid | Orion Oyj | 40 mg/kg divided in 2 doses/day, for adults 875/125 mg 1 tablet x2/day | |
Camera Software | Hamamatsu | HCI Image | |
Cold pack | any | for preservation and transport | |
Differential interference microscope | Carl Zeiss | Inverted, cell observer microscope | |
Digitial High Speed Video Camera | Hamamatsu | Orca Flash 4.0, digital camera type C11440 | |
Dulbecco´s Modified Eagle Medium | Thermo Fisher | 10565018 | basal cell culture medium |
Eppendorf tube | Eppendorf | 30120086 | 1.5 mL tube |
Glass-bottom microwell dish | MatTek | P35G-1.5-14-C | cuvette for microscopy |
Heating Unit | Carl Zeiss/PeCon | 810-450001 | Carl Zeiss incubation elements with PeCon TempModule S1 temperature control |
Interdental brush 0.6 mm | Doft | 872267 | Interdental brush on a long wire with a reusable handle and cap in zipbag |
Objective | Carl Zeiss | 100x/1.46, α Plan-Apochromat DIC objective | |
Small polystyrene box with lid | any | for transport |